Atypical furnculosis caused by atypical Aeromonas salmonicida, is an emerging problem of farming of rockfish (Sebastes schlegeli) in Korea. In this study, protection against atypical furunculosis was compared in rockfish vaccinated with A. salmonicida formalin killed cell (FKC) and adjuvant containing FKC. The formalin inactivated A. salmonicida vaccine provided a low protection of 20% and 10% relative percent survival (RPS) at 44 and 58 days post vaccination. However, addition of adjuvant (squalene and aluminum hydroxide) into inactivated A. salmonicida vaccine clearly enhanced the level of protection showing 70% and 50% RPS at 44 and 58 days post vaccination.
Hantavax(R) is one of the killed Hantavirus vaccines, and is commercially available in South Korea. This vaccine was developed by inactivation of virus isolated from infected suckling mouse brain with formalin. Although Hantavax(R) can induce neutralizing antibodies in vaccinees, the strength of this induction and the duration of the humoral immune response are controversial issues. In this study, we studied the native conformation of the killed vaccine by antigen-capture reverse transcriptase polymerase chain reaction with patient and vaccinee sera containing neutralizing antibodies against Hantavirus. The results showed that Hantavax(R) could bind HTNV patient and vaccinee sera like live virus, suggesting that the integrity of the viral epitope is maintained in Hantavax(R) and induces the protective antibodies, even though the virus was inactivated with formalin.
Vibrio vulnificus ghosts (VVG) were generated using a mobilizable vector including a thermosensitive expression cassette by conjugation. The vaccine potential of VVG was investigated in mouse. Mice immunized with VVG showed significantly higher antibody titer than those with formalin-killed V. vulnificus. The present study supports the conceptive usefulness of bacterial ghosts as vaccine candidates.
경남 김해 명지 양어장에서 사육중이던 뱀장어(평균체중 20g)에 Vibrio anguillarum vaccine을 주사하여 일정기간이 경과한 뒤 생균을 감염시켜 뱀장어의 면역효과를 조사하였다. 이 실험에서 사용된 vaccine은 $25^{\circ}C$로 조절된 $0.3\%$의 formalin에 24시간 방치하여 사균화시킨 formalin-killed vaccine, $121^{\circ}C$에서 3분 및 15분간 가열한 vaccine등 3종류의 vaccine이다. 이 3종류의 vaccine을 접종했을 때 효과의 차이와 formalin-killed vaccine의 접종 시 온도와 접종농도에 따른 효과를 조사했으며 booster접종의 필요여부도 검토했다. 1984년 12월 4일부터 85년 4월 30일까지 실시한 연구 결과는 다음과 같다. 1. 수온 $15^{\circ}C$에서 $23^{\circ}C$의 범위까지 항체생산에 의한 응집력가는 수온이 높을수록 높게 나타났고, $23^{\circ}C$와 $28^{\circ}C$에서는 응집력가는 별차이가 없었다. 2. 사균 vaccine 접종양을 $10^7cells/$미로 주사하면 면역능력이 아주 미비하였고, $10^8cells/$미에서 강한 면역능력을 획득했다. 그러나 $10^9cells/$미로 증가시켜도 $10^8cells/$미 때와 유사하였다. 3. $10^8cells/$미를 2회 접종시켰을 때 1회만 접종시켰을 때보다 효과가 훨씬 좋았으나 3회 접종시켰을 때는 2회 접종구와 면역효과의 차이가 없었다. 4. formalin으로 처리된 사균 vaccine이 완전면역을 나타내었으며 $121^{\circ}C$로 열처리한 vaccine의 경우는 면역효과가 약했다.
본 연구는 Streptococcus iniae 포르말린 불활화 백신을 냉장 보관한 후 보존 기간별로 넙치에 접종하여 면역 효능 및 안정성을 조사하였다. 그 결과 6, 12, 15개월 보존한 후에도 면역 효능의 감소가 확인되지 않아 백신으로서의 높은 안정성을 확인할 수 있었다. 또한, 1회 접종구에 비해 2회 접종구에서 높은 항체가가 유도되었으며 방어력도 증가하는 것으로 나타났다. 특히, 1회 접종만으로도 낮은 항체가에도 불구하고 60% 이상의 방어 효과가 나타남에 따라 항체 이외의 세포성 면역이 방어력 형성에서 중요한 역할을 하는 것으로 추정되었다.
Starry flounder, which are recently increasingly cultured in Korea, are known to highly vulnerable to Streptococcus parauberis infection. Five groups of starry flounder (n=30 for each group) were vaccinated with S. parauberis formalin-killed whole cells by intraperitoneal injection at a final concentration of 0, 0.01, 0.1, 1 and 10 mg $fish^{-1}$. Specific antibody production of 1 and 10 mg $fish^{-1}$ administered groups significantly increased at four weeks post immunization. All vaccinated groups showed higher survival rates than a control group when five groups of fish were challenged with S. parauberis at a dose of $1.14{\times}10^4$ cfu $fish^{-1}$ and $1.14{\times}10^2$ cfu $fish^{-1}$, respectively. In particular, 0.1 or higher concentrations of formalin killed bacterial cells are able to confer the fish high protection against S. parauberis infection.
본 연구는 약병원성 조류인플루엔자 사독백신 개발을 위하여 백신 후보주(ADL0401)로서의 생물학적 특성 및 개발 백신에 대한 면역원성 및 안전성 평가를 실시하였다. 백신 후보주인 ADL0401의 병원성을 조사한 결과 폐사는 없었으며, 임상증상 및 바이러스 재분리율 양상이 국내 표준 야외주인 MS96과 상당히 유사한 생물학적 특성을 나타내어 약병원성 조류인플루엔자의 특징을 갖고 있음을 알 수 있었다. 표준야외주인 MS96과 백신후보주인 ADL0401간의 이종항원의 중화능 실험을 한 결과 r값 = 0.71로 동종항원(r값 = 1)에 비하여 다소 낮은 중화능을 나타내었지만, 두 바이러스간의 항원성엔 큰 차이가 없음을 알 수 있었다. 불활화 능력실험으로 $0.1\%$ Formalin을 $37^{\circ}C$ 조건에서 처리하였을 때 가장 효과적인 결과를 가져왔으며, MS96은 2시간, ADL0401은 1시간만에 다소의 역가 저하는 있었으나 빠르게 불활화가 이루어짐을 확인하였다. 개발 백신의 면역원성 및 안전성 실험 결과 ISA 70 adjuvant 백신 접종시 백신 접종 전후로 폐사율 및 임상증상은 관찰되지 않았으며, 높은 수준의 항체 역가를 형성함으로써 가장 면역원성이 우수한 것으로 확인되었다.
Killed vaccines, developed by inactivation with formalin, have been investigated for many fish viruses. In this study, the inactivation of viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) by formalin was investigated based on the infectivity titer. When viral cell culture supernatants were used, the infectivity titer decreased 1,000-fold at 1 d after treatment with 0.1% (v/v) formalin, but was below the detection limit at 7 and 14 d. Moreover, neither the N nor G gene were detectable by RT-PCR immediately after formalin treatment. In western blot analysis, N protein was not detected by rabbit antiserum against VHSV KR-9225 from 2 d after formalin treatment. On the other hand, when we used a virus that was purified and concentrated ~100 times, the infectivity titer was maintained at 106.05 TCID50/mL, even at 14 d after formalin treatment, and no change in the viral structural proteins was observed. This study provides important data on the production and use of formalin-inactivated vaccines.
Pasteurella multocida, a Gram-negative facultative anaerobic bacterium, is a causative animal pathogen in porcine atrophic rhinitis and avian fowl cholera. For the development of recombinant subunit vaccine against P. multocida, we cloned and analyzed the gene for outer membrane protein H (ompH) from a native strain of Pasteurella multocida in Korea. The OmpH had significant similarity in both primary and secondary structure with those of other serotypes. The full-length, and three short fragments of ompH were expressed in E. coli and the recombinant OmpH proteins were purified, respectively. The recombinant OmpH proteins were antigenic and detectable with antisera produced by either immunization of commercial vaccine for respiratory disease or formalin-killed cell. Antibodies raised against the full-length OmpH provided strong protection against P. multocida, however, three short fragments of recombinant OmpHs, respectively, showed slightly lower protection in mice challenge. The recombinant OmpH might be a useful vaccine candidate antigen for P. multocida.
For the production of ghost bacteria vaccine to prevent the streptococcal disease in aquaculture fish species, a double cassettes vector was constructed and cloned in Escherichia coli DH5${\alpha}$. Ghost bacteria vaccine production from Escherichia coli DH5${\alpha}$/pHCE-InaN-GAPDH-Ghost 37 SDM (SIG) was maximized at a glucose concentration of 1 g/l, agitation of 300 rpm, and aeration of 1 vvm. The maximal efficiency of ghost bacteria formation was obtained at the mid-exponential phase ($OD_{600}=2.0$) with the concentration of 0.77 g/l for SIG. The molecular mass of GAPDH was detected at 67 kDa with the insoluble fraction, by SDS-PAGE and Western blot. The protective efficacy of ghost bacteria vaccine was evaluated by challenge test using olive flounder. The cumulative mortalities of the positive control, formalin-killed cell (FKC) vaccine, and SIG vaccine immunized groups were 91%, 74%, and 57%, respectively. These results suggest that SIG vaccine showed efficacy as a vaccine and had a higher potential to induce protective antibodies than did FKC vaccine.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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