냉장식품의 주요한 변패원일균으로서 저온세균인 Pseudomonas aeruhinosa를 최소 전처리한 후 신속히 검출할 수 있는 비표지 면역센서 시스템을 개발하였다. 수정결정전극상으로의 생물요소인 항체의 고정화는 이형이기능성 가교화제인 sulfosuccinimidyl 6-[3-(2-pyridyldithio)propionamido] hexanoate를 사용하여 항체를 티올화시킨 후 티올화된 항체를 화학흡착하여 행하였고, P. aeruginosa flagella에 대한 단클론항체를 사용하였을 때 다클론항체를 사용한 경우보다 센서감응이 우수한 것으로 나타났다. 항체가 고정화된 센서 chip과 flow형 quart crystal microbalance 계측 시스템을 이용하여 균 첨가 및 증균을 행한 10종의 모델시료에 대한 계측을 행하였다. 이 때, 시료자체에 의한 진동수변화가 52~89 Hz 범위인 반면 균 첨가 시에 나타난 진동수변화는 108~200 Hz이었고 증균시료에 의한 진동수변화는 162~222 Hz 범위로 나타났다. 시스템 안정화, 시료주입 및 정상상태이 센서반응 획득, 시스템 세척으로 이루어지는 한 주기의 센서계측에 소요된 시간은 모든 시료에 있어 30분 이내였다.
The growth inhibition of Campylobacter jejuni ATCC 33291 in the presence of $1\%$ acetic acid at 4, 25, and $42^{\circ}C$, followed by $25^{\circ}C$ and $4^{\circ}C$, at pH 5.5 and pH 6.5, and by the addition of $1\%$ acetic acid aat 4, 25, and $42^{\circ}C$ were determined to be 22, 8.5, and 1.4 min, respectively, in an FBP-SBB medium. The D values of C. jejuni were increased by the addition of chicken and did not follow the linear relationship observed in the FBP-SBB media without chicken. When using distilled water instead of FBP-SBB in the model system, the death rate of C. jejuni was dramatically accelerated. The injured or low cell numbers that were impossible to enumerate using the plate count method, were detected by a polymerase chain reaction and enrichment culture procedure. These results suggested that acetic acid is reliable and effective as a disinfectant, however, it is necessary to take additional care at refrigeration temperatures due to the potential of injred cells during poultry processing.
Vinclozolin, an endocrine disrupting chemical, is a chlorinated fungicide widely used to control fungal diseases. However, its metabolite 3,5-dichloroaniline is more toxic and persistent than the parent vinclozolin. For the biodegradation of vinclozolin, vinclozolin- and/or 3,5-dichloroaniline-degrading bacteria were isolated from pesticide-polluted agriculture soil. Among the isolated bacteria, a Rhodococcus sp. was identified from a 16S rDNA sequence analysis and named Rhodococcus sp. T1-1. The degradation ratios for vinclozolin or 3,5-dichloroaniline in a minimal medium containing vinclozolin $(200{\mu}ml)$ or 3,5-dichloroaniline $(120{\mu}g/ml)$ were 90% and 84.1%, respectively. Moreover, Rhodococcus sp. T1-1 also showed an effective capability to biodegrade dichloroaniline isomers on enrichment cultures in which they were contained. Therefore, these results suggest that Rhodococcus sp. T1-1 can bioremediate vinclozolin as well as 3,5-dichloroaniline.
The effect of live food and commercial diet on sweetfish Plecoglossus altivelis culture was assessed by determining the daily growth rate and feed conversion ratio. After feeding for 8 weeks, the Moina macrocopa diet resulted in a higher growth rate of 5.101 compared to commercial (3.441) and Artemia (2.729) diets. In addition fish fed the M. macrocopa diet had the weight gain, averaging 41.29 g at the end of the experiment. The content of n-3 highly unsaturated fatty acids (HUFA) was highest in the commercial diet, while free fatty acids were not detected in the M. macrocopa diet. Triglycerides, the energy source in fishes, constituted 40.0% of the M. macrocopa diet, which was significantly higher than in the commercial and Artemia diets at 20.0 and 12.0%, respectively These results indicate that freshwater M. macrocopa can be used as feed for sweetfish larvae, even without docosahexaenoic acid (DHA) enrichment from Artemia.
Calcineurin governs stress survival, sexual differentiation, and virulence of the human fungal pathogen Cryptococcus neoformans. Herein, we identified and characterized calcineurin substrates in C. neoformans by employing phosphoproteomic $TiO_2$ enrichment and quantitative mass spectrometry. The identified targets include the zinc finger transcription factor Crz1 and proteins whose functions are linked to P-bodies/stress granules (PBs/SGs) and mRNA translation and decay, such as Pbp1 and Puf4. We show that Crz1 is a bona fide calcineurin substrate, and localization and transcriptional activity of Crz1 are controlled by calcineurin. Several of the calcineurin targets localized to PBs/SGs, including Puf4 and Pbp1, and are required for survival at high temperature and for virulence. Genetic epistasis analysis revealed that Crz1 and the novel targets Lhp1, Puf4, and Pbp1 function in a branched calcineurin pathway that orchestrates stress survival and virulence. These findings propose that calcineurin controls thermal stress and virulence at the transcriptional level via Crz1 and post-transcriptionally by regulating target factors involved in mRNA metabolism.
7-Aminocephalosporanic acid (7-ACA) is the initial compound in preparation of cephalosporin antibiotics widely used in clinical treatment. Bacteria producing glutaryl 7-ACA acylase, which convert cephalosporin C to 7-ACA, has been screened in soil samples. A bacterial strain exhibiting high glutaryl 7-ACA acylase activity, designated KAC-1, was isolated and identified as a strain of Pseudomonas diminuta by characterizing its morphological and physiological properties. The screening procedures include culturing on enrichment media containing glutaric acid, glutamate, and glutaryl 7-aminocephalosporanic acid as selective carbon sources. To enhance enzyme production, optimal cultivation conditions were investigated. This strain grew optimally at pH 7 to 9 and in temperatures of 20 to 40 C, but acylase production was higher when the strain was grown at 25 C. Glutaric acid, glutamate and glucos also acted as inducers for acylase production. In a jar fermenter culture, P. diminuta KAC-1 produce acylase in a growth-associated manner. The substrate specificity of KAC-1 acylase by cell extract showed that this enzyme had specificity toward glutaryl 7-ACA, glutaryl 7-ADCA, but not cephalosporin C.
In this study, the performance of a gold biosensor combined with light microscope imaging system (GB-LMIS) was comparatively evaluated against enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting Salmonella under simulated chilling condition. The optimum concentration of antiSalmonella polyclonal antibodies (pAbs) was determined to be 12.5 and 100 ㎍/ml for ELISA and GBLMIS, respectively. GB-LMIS exhibited a sufficient and competitive specificity toward three tested Salmonella among only. To mimic a real-world situation, chicken was inoculated with Salmonella cocktail and stored under chilling condition for 48 h. The overall growth of Salmonella under chilling condition was significantly lower than that under non-exposure to the chilling condition (p < 0.05). No significant differences in bacterial growth were observed between brain heart infusion and brilliant green broth during the enrichment period (p > 0.05). Finally, both GB-LMIS and ELISA were employed to detect Salmonella at every 2-h interval. GB-LMIS detected Salmonella with a competitive specificity by the direct observation of bacteria on the sensor using a charge-coupled device camera within a detection time of ~2.5 h. GB-LMIS is a feasible, novel, and rapid method for detecting Salmonella in poultry facilities.
Fire blight is a bacterial disease caused by Erwinia amylovora. In Korea, fire blight was first reported in 2015 in an orchard. If the infection is confirmed, all trees in the orchard must be removed and the orchard must remain closed for 3 years. Since 2020, if the number of trees infected with fire blight is less than 5% of the total trees in the orchard, only the infected tree and adjacent trees are removed in Korea. Three years after removal, the trees can be replanted after confirming that the orchard soil is free from E. amylovora. In this study, a protocol was established for detecting E. amylovora in soil via selective enrichment, using tryptic soy broth with 0.05% bile salts and 50 ㎍/ml cycloheximide, and real-time polymerase chain reaction. This protocol resulted in a 1,000-times improved detection limit for E. amylovora in soil samples compared to that in unenriched samples. Soil monitoring was performed for orchards where fire blight-infected trees had been removed 3-27 months prior; the selected orchards were monitored every 3 months. Monitoring confirmed that E. amylovora was not present in the soil at any site in any of the orchards. A new detection protocol facilitates the monitoring of E. amylovora in soil and could help permit the replanting of trees in orchards. Also monitoring results provide evidence that trees can be planted earlier.
본 연구에서는 가축분퇴비에 존재할 수 있는 식중독균의 검출을 위하여 기존의 배양을 이용한 방법을 대체할 수 있는 real-time PCR을 적용하고자 하였으며, 이에 따라 유전자 증폭에 영향을 미치는 DNA 추출 방법에 따른 식중독균 검출 효율을 비교하였다. 적용한 방법은 가열 처리, 유기용매 및 흡착제 처리, 효소 처리의 3가지로 구분할 수 있으며, 각 방법에 따른 DNA의 검출 효율을 실험 결과로 나타내었다. 가열 처리 방법에서는 가열 시간의 증가에 따라 DNA 검출 효율이 높아지는 경향을 나타냈으며, 유기용매 및 흡착제는 효과를 나타내지 않았고, 효소 처리의 경우에는 그람 양성균 보다는 그람 음성균의 DNA가 추출 효율이 더 높은 것으로 나타났다. 결론적으로 퇴비에서 30분 이상의 가열 처리와 효소의 처리를 통한 DNA 추출 방법은 real-time PCR을 적용한 식중독균 검출에 적합한 것으로 판단된다.
왕겨를 탄소원으로 사용하여 증균 배양을 실시함으로써 국내 사찰에서 제조된 된장으로부터 xylan 분해능 우수한 균주를 분리하였다. 분리균 YB-1301은 DNA gyrase subunit B 유전자(gyrB)의 염기서열에 근거하여 Bacillus safensis로 동정되었다. B. safensis YB-1301을 밀기울 또는 여러 종류의 xylan들이 첨가된 배지에서 배양하였을 때 xylanase의 생산성이 급격하게 증가되었다. 특히 birchwood xylan이 첨가된 LB 배지에서 플라스크 배양을 하였을 때 최대 340 U/ml 이상의 xylanase 생산성을 보였다. Xylan이 첨가되지 않은 LB 배지에서는 매우 소량의 xylanase가 균의 성장과 연계되어 항시적으로 생산되지만, xylan이 첨가된 배지에서는 정지기 생육단계에서 xylanase의 생산이 크게 유도되었다. 더구나 xylanase 생합성은 가수분해되지 않은 xylan 보다 xylan의 효소적 가수분해 산물에 의해 더 빠르게 유도되었다. 또한 B. safensis YB-1301의 배양상등액에 존재하는 xylanase는 55℃와 pH 6.5−7.0의 반응조건에서 최대활성을 나타냈다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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