Cryopreservation affects osmotic tolerance and intracellular ion concentration through changes in expression levels of water and ion channels. Control of these changes is important for cell survival after cryopreservation. Relatively little is known about changes in $K^+$ channel expression compared to water channel expression. This study was performed to investigate changes in TASK-2 channel (KCNK5: potassium channel, subfamily K, member 5), a member of two-pore domain $K^+$ channel family, in cryopreserved mouse ovaries. Cryopreservation increased TASK-2 mRNA expression in mouse ovaries. In addition, TASK-2 protein expression was upregulated in vitrified and slowly frozen ovaries. TASK-2 protein was expressed in all area of granulosa cells that surround the oocyte within the follicle, except nucleus. Viability of cells overexpressed with TASK-2 was higher than that of vector-transfected cells. Our results found that TASK-2 expression was increased by cryopreservation and overexpression of TASK-2 decreased cryopreservation-induced cell death. These results suggest that TASK-2 upregulation might reduce cryodamage.
Objectives : We examined the effect of Hwangryunhaedoktang(HH) on the experimental ulcerative colitis induced by dextran sulfate sodium (DSS). Methods : Experimental colitis was induced in rats by daily treatment with 5% DSS in the drinking water for 5 days. Afterward, the mts were divided into two groups: the control group was administered water and the sample group was administered HH for 7 days. Results : The sample group provided HH for 7 days demonstrated fast recovery of body weight compared with the control group. Histologic change showed fast regeneration of crypt and surface epithelial cells and decreased edema of the submucosa and decreased lymphatic follicle of mucosa compared with the control group. Immunohistochemical stain usingCOX-2 gene was decreased and there was localized Ki-67 positive reaction. Regeneration of surface epithelial cell and goblet cell in mucosa was observed by transmission electron microscope. These results indicate therapeutic effect of HH on DSS-induced colitis in rats.
Although assisted reproductive technology is very useful to develop novel and therapeutic biomaterials for reproduction, research on molecular mechanism of folliculogenesis in pig is not clear. Therefore, the alteration of gene expression during follicular development in pigs was examined in this study. The expression of folliculogenesis-related genes was quantified in preantral ($250{\sim}300{\mu}m$) and antral (> $300{\mu}m$ in diameter) follicles, and overall gene expression was evaluated by a genome-wide microarray. The microarray results showed that 219 genes were differentially expressed, and of those, 10 and 22 known genes showed higher and less expression at the preantral stage than at antral stages, respectively. Among them, the expression of NR0B1, PPARG, GATA4, and ANXA2 genes related to folliculogenesis was validated by quantitative real-time PCR analysis. The expression of PPARG and GATA4 genes were increased at antral stages, but a significantly stage-specific increase (p<0.05) was only detected in annexin A2 (ANXA2) in antral-stage follicles. The expression of NR0B1 genes was increased at preantral stage and these patterns of gene expression were comparable to the results obtained by microarray analysis. We propose that the systematical regulation of genes supporting specific follicle stage should be employed for improved in-vitro folliculognesis.
Here, we evaluated the mode of programmed cell death during porcine oocyte maturation by comparing the two major pathways associated with programmed cell death, apoptosis (type I), and autophagy (type II). We investigated the expression and localization of major genes involved in autophagy and apoptosis at mRNA and protein levels. Furthermore, the effect of hormonal stimulation on autophagy and apoptosis was analyzed. We found that the activity of autophagy-associated genes was increased in the cumulus-oocyte complexes (COCs) following follicle-stimulating hormone (FSH) treatment, while the addition of luteinizing hormone (LH) reversed this effect. The expression of proteins associated with autophagy was the highest in FSH-treated COCs. On the other hand, caspase-3 protein level was maximum in COCs cultured with LH. The treatment with rapamycin resulted in the effect similar to that observed with FSH treatment and increased autophagy activity. Thus, hormonal stimulation of pig oocytes resulted in distinct patterns of maturation. The high-quality oocytes majorly relied on the type II pathway (autophagy), while the type I pathway (apoptosis) was more prominent among poor-quality oocytes. Further investigation of this distinction may allow the development of techniques to produce high-quality oocytes in porcine in vitro fertilization.
In order to investigate the mechanism of regulation of progesterone production, quail were hypophysectomized at various times during the ovulation cycle, and granulose cells were isolated from follicles 4 hr after the operation. They were incubated in vitro at $40^{\circ}C$ with or without LH or dibutyryl cyclic AMP, and the amounts of progesterone produced during 3 hr of incubation were measured by radioimmunoassay. Hypophysectomy at 8 hr or 20 hr before the predicted time of ovulation caused a reduced responsiveness of F1 granulosa cells to exogenous LH or dibutyrul cyclic AMP. Although hypophysectomy at 24 hr before ovulation caused a slight reduction of responsiveness of F1 granulosa cells, the reduction of the progesterone production during the incubation without any stimuli was prominent by the sham operation. These results suggest that the presence of pituitary gland influences the ability of the granulose cells to produce progesterone in response to LH or dibutyryl cyclic AMP.
수정란의 체외생산(IVP)기술은 동물생산기술의 적용과 생리학이나 세포생물학의 기본 연구에 새로운 biotchnologies의 발생에 있어 매우 중요하고 흥미로운 사건으로서 여러 종류의 포유류에 적용되고 있다. 이러한 기술은 3가지의 절차를 밟아야 하는데 In vitro maturation(IVM), In vitro fertilization(IVF) 및 In vitro development(culture)(IVD)가 그것이다. 그런데 돼지는 다태동물로서 난소의 난포가 성장할 때 난포간 meiotic competence가 난자에 의하여 진행되므로 난포내의 난포액에 의하여 난자의 발육이 좌우된다고 보고 있다 돼지WP에 사용되는 난자는 난포의 직경이 3~5mm에서 수집하고 cumulus-oocyte complexes(COCs)의 형태에 따라 선택하는 것이 보편화되어 있다. 실험목적은 돼지 난소의 antral follicles이 성장할 때 크기에 의하여 oocyte meiotic competence의 방출에 어떤 영향을 주는지를 난자의 체외성숙과 체외수정 및 체외발육 비율을 각각 조사하여 미성숙 난자의 체외배양 기술을 개선할 목적이었다. 수행내용은 도축돈 난소의 난포크기별 3mm<, 3~5mm, 5mm)로 나누어, 다시 말해서 preantral stage, antral stage, postantral stage으로 구분하여 채취한 COCs를 IVM, IVF, IVC 상태에서의 COCs 형태, cell cleaved rate, developmental rate 등을 조사하였다.
We examined the ultrastructure of eupyrene and apyrene spermatogenesis in the testis of Helicoverpa assulta (Lepidoptera: Noctuidae). The spermatogenesis was progressed near the fringe adjacent to the follicular layer of the testicular follicle, surrounding the apical cell concentrically. Eupyrene and apyrene were firstly distinguished at the telophase stage of the primary spermatocyte. Chromatin was evenly scattered in eupyrene nuclei, whereas it was lumped near the nuclear envelope in apyrene spermatogenesis. Then, the nucleus of eupyrene was transformed into two daughter nuclei by meiosis, while the nucleus of apyrene was divided into many micronuclei by irregular meiosis. After the meiosis was completed, a number of mitochondria in the cytoplasm of the early spermatids of the eupyrene and the apyrene were fused into one nebenkern. Also, as axial filament was formed due to the elongation of the spermatid, the nebenkern became splitted into mitochondrial derivatives. An acrosome precursor was present only in the eupyrene, attached to nuclear envelope.
Bovine follicular oocytes were matured in two different conditions, TCM 199+10% FBS with or without hormones (0.01 unit/ml ovine follicle stimulating hormone, 0.01 unit/ml ovine luteinizing hormone and 1$\mu\textrm{g}$/ml $\beta$-estradiol). There was no significant difference in maturation and fertilization rates of the oocytes between two groups. The result indicates that hormonal treatment does not have beneficial effect on in vitro maturation and fertilization of follicular oocytes. IVF-derived cone-cell bovine embryos were injected with foreign DNA (CChcLf) by microinjection method and then co-cultrued with bovine oviductal epithelial cells. Developmental rate of microinjected embryos to blastocyst stage (21%) was similar to that of non-injected embryos(29%). This result represents that microinjected bovine embryos produced in vitro have a potential of development to normal blastocysts.
Progressive transformation of germinal centers(PTGC) is a rare benign lymph node enlargement characterized by chronic lymphadenopathy and the presence of germinal centers with fused and expanded mantles within a lymph node that are 3-5 times the size of a typical reactive follicle. Although PTGC is reported in 3.5-10% of chronic lymphadenopathy, head and neck surgeons do not often experience this condition and its clinical implications. Althoug PTGC is benign disease, it could not be excluded the association with other malignant lymphoid diseases. Therefore, periodic follow up of PTGC patient could be required. We report two cases at this study ; a 16 years old man who visited out-patient clinic due to palpable mass of right cervical area, several months ago, and a 35 years old man who visited out-patient clinic for evaluating right cervical mass. Both of two patients were diagnosed with PTGC. In this study, we focus on the clinic-pathologic features of this uncommon disease along with other literature reviews.
The present study was conducted to evaluate the hair growth-promoting effect of Clitocybin A from mushroom Clitocybe aurantiaca with dermal papilla cells (DPCs), which play important roles in the regulation of hair cycle. Clitocybin A significantly increased the proliferation of immortalized rat vibrissa DPCs. Flow cytometry analysis revealed that Clitocybin A promoted cell-cycle progression through G0/G1 to S phase in immortalized rat vibrissa DPCs. In addition, Clitocybin A increased the level of cell cycle proteins such as cyclin D1, phospho-pRB, and phospho-CDK2. To elucidate the molecular mechanisms of Clitocybin A on the proliferation of DPCs, we examined the activation of wnt/${\beta}$-catenin signaling which is known to regulate hair follicle development, differentiation and hair growth. Clitocybin A activated wnt/${\beta}$-catenin signaling via the increase of phospho(ser552)-${\beta}$-catenin, phospho(ser675)-${\beta}$-catenin and phospho(ser9)-$GSK3{\beta}$. Furthermore, Clitocybin A markedly increased the activation of extracellular signal-regulated kinase (ERK). These results suggest that the Clitocybin A may induce hair growth by proliferation of DPCs via cell-cycle progression as well as the activation of Wnt/${\beta}$-catenin signaling and ERK pathway.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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