In order to determine whether the tumor-inducing iridoviruses and the mortality-associated iridoviruses from cultured marine fish in Korea belong to same type, we compared the immunological characteristics of these viruses. The electrophoretical pattern of structural proteins of the tumor-inducing was different from that of the mortality-associated iridoviruses. The antigenicity of structural proteins of these viruses were identified by Western blotting using two monoclonal antibodies against tumor-inducing iridovirus. Two monoclonal antibodies recognized a 150 kDa structural protein of tumor-inducing iridoviruses showed. However, the structural proteins of the mortality-associated iridoviruses did not react with these monoclonal antibodies. These results demonstrate that the antigenicity of the structural proteins of tumor-inducing iridovirus is different from that of mortality-associated iridovirus, indicating that these two iridoviruses belong to different types.
To investigate the antiviral activity of marine algae against fish pathogenic viruses, which are often the causes of viral disease in aquaculture, the 80% methanolic extracts of 21 species collected from the coast of Korea were screened for their in vitro antiviral activities on infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), using a flounder spleen (FSP) cell-line. Among them, Monostroma nitidum (10 ${\mu}g/mL$) exhibited the strongest inactivation on IHNV, showing a 2 log reduced virus titre as compared to the control in the determination of direct virucidal activity. In addition, Polysiphonia morrowii (100 ${\mu}g/mL$) remarkably reduced the virus titres of treated cells by 2-2.5 log, for both IHNV and IPNV, in the determination of cellular protective activity, implying the existence of substances that may modulate innate host defense mechanisms against viral infections. These results reveal that some marine algae could be promising candidates as sources of antiviral agents or as health-promoting feeds for aquaculture.
We developed and subsequently characterized mouse monoclonal antibodies (MAbs) against nervous necrosis virus (NNV, RGNNV genotype). We established six hybridoma clones secreting MAbs against NNV antigen: 2B1, 2B11, 2C12, 13C1-1, 13C1-2 and 14D11. All six MAbs belonged to the IgG2a isotype with a kappa light chain and their reactivity recognized against the 41 kDa coat protein of NNV by Western blot analysis. The affinity constants of the six MAbs were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). All six MAbs reacted with two NNV isolates (SgNag05 and Gemunodo06), while no reactivity was observed with five know fish viruses, namely marine birnavirus, infectious pancreatic necrosis virus, viral hemorrhagic septicemia virus, hirame rhabdovirus, and infectious hematopoietic necrosis virus. Moreover, high ELISA optical density (OD) values (0.87-1.42) were observed in the brain tissues of NNV-infected sevenband grouper, while low OD values (less than 0.12) were recorded in the brain tissues of uninfected fish. These results suggest that these six MAbs are highly competent and useful for the detection of NNV with the RGNNV genotype.
Vaccines based on single-cycle viruses that are replication-incompetent due to knockout of replication-related structural gene(s) are more immunogenic than inactivated or subunit vaccines and can be used as delivery vehicles for foreign antigens without concerns on the reverting to virulent forms. The aim of this study was to develop a delivery vehicle for nervous necrosis virus (NNV)-like particles (VLPs) using G gene deleted single-cycle VHSV (rVHSV-𝚫G). Recombinant single-cycle VHSVs carrying NNV capsid protein gene between N and P gene of rVHSV-𝚫G genome (rVHSV-𝚫G-NNVCap) were rescued by reverse genetic technology. The successful expression of NNV capsid protein in cells infected with rVHSV-𝚫G-NNVCap was demonstrated by Western blot analysis, and the production of NNV VLPs in infected cells was confirmed using an electron microscopy. The results suggest that single-cycle VHSVs can be used as a safe delivery vehicle for NNV VLPs, and can be extended to other pathogens for the development of prophylactic vaccines.
Choi, Jae Chan;Kim, Young Chul;Choi, Hwan Jun;Park, Jeon Oh;Jeong, Hyun Do
Journal of fish pathology
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v.28
no.1
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pp.27-35
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2015
VHSV is a major viral agent that affects freshwater and marine fish, causing serious economic losses in aquaculture in the world. Due to their filter-feeding activity, bivalve mollusks may act as viral transmitters after accumulation of the fish viruses released into seawater from infected fish. Amplification by RT-PCR was carried out to investigate the presence of VHSV in pacific oysters (Crassotrea gigas) and blue mussels (Mytilus edulis), inhabiting regions around aquatic farms in Korea. Primers designed from conserved regions of VHSVs allowed us to detect four different types of VHSV in a single PCR. Twenty two of the eighty four samples showed positive results of VHSV in a 2-step RT-PCR. Using six positive samples from three different regions in Korea, we cloned and sequenced the glycoprotein (G) gene (467-bp long) of VHSVs. Genetic analysis of the VHSVs detected in shellfish in various geographical areas of Korea showed highly restricted results to VHSV type Iva. This was in agreement with the reports showing only a single genotype of VHSV (Iva genotype) in outbreaks in cultured or wild fish in Korea. Consequently, we investigated VHSVs carried by bivalve mollusks inhabiting the vicinity of aquatic farms, and revealed correlationship between the type of viral accumulated in shellfish by filter-feeding, and those detected in disease outbreaks in fish.
Kim, Jin-Woo;Cho, Mi-Young;Park, Gyeong-Hyun;Won, Kyoung-Mi;Choi, Hye-Sung;Kim, Myoung-Sug;Park, Myoung-Ae
Journal of fish pathology
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v.23
no.3
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pp.369-377
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2010
The epidemiological study was performed to survey the prevalence of fish pathogens of cultured olive flounder, Paralichthys olivaceus collected in Pohang, Ulsan.Gijang, Keoje and Wando area of Korea from 2005 to 2007. In this study, the fish pathogens were detected from 1,528 among 2,238 fish samples and annual incidences were 60.6% in 2005, 66.7% in 2006 and 72.3% in 2007, respectively. Seasonal prevalence was 63.5% in February, 67.3% in May, 75.1% in August and 64.2% in November for three years. The detection rates of parasites, bacteria or viruses were 36.7%, 32.8% and 31.4%, respectively. 775 cases (34.6%) among 2,238 fish samples showed mixed infection with a different pathogens. The distribution of specific diseases showed that detection rates of diseases occurring the most frequently during the study period were Trichodina spp., (28.2%), viral nervous necrosis virus (24.3%), Vibrio (11.6%), viral hemorrhagic septicaemia virus (10.5%).
Infectious Pancreatic Necrosis Virus (IPNV) is one of the most important pathogens for inland fish farming and had been first reported in Korea from returning adult chum salmon (Oncorhynchus keta) at hatcheries on the east coast. During the past years, several viruses identified as IPNV were isolated not only from chum salmon, but also from gold fish (Carassius auratus), eel(Anguilla japonica), and rainbow trout (Salmo gairdneri). An isolate, coded DRT, from fingerlings of pan-cultured rainbow trout in Daechung Dam showed different serotype from three known reference serogroups of IPNV such as VR-299, Sp, and Ab. Antisera to three of these serotypes, however, partially neutralized the infectivity of this isolate. Anti-Sp type was rather effective than either anti-VR-299 or anti-Ab, implying DRT could be more closely related to Sp. DRT has been purified and its RNA genome segments were compated showing that the isolate does not belong to any of known serogroups even with some common antigenicity.
The glycoprotein of novirhabdoviruses is known to play a critical role in the determination of host specificity. Viral hemorrhagic septicemia viruses (VHSVs) in different genotypes have different glycoprotein sequences and show different preferences for specific cell lines. In this study, to know whether the glycoprotein is solely responsible for the host cell preference of VHSV, a recombinant VHSV expressing vesicular stomatitis virus (VSV) glycoprotein instead of VHSV IVa glycoprotein (rVHSV-VSV-G) was generated by reverse genetics and inoculated into several fish cell lines, then, cytopathic effect (CPE) and viral growth caused by rVHSV-VSV-G infection were compared with those caused by rVHSV-wild that was previously generated and has the same genomic sequence with wild-type VHSV except a few nucleotides. The plaque numbers of rVHSV-VSV-G were significantly higher in EPC, BF-2 and GF cells than those of rVHSV-wild. However, in HINAE cells (originated from olive flounder), rVHSV-VSV-G titer was significantly lower than rVHSV-wild titer, and both recombinant VHSVs were not grown well in CHSE-214 cells. Although statistical significances were detected in the titers between rVHSV-wild and rVHSV-VSV-G in several cell lines, the cell line-preference order of rVHSV-VSV-G was not different from that of rVHSV-wild. These results suggest that the replacement of VHSV glycoprotein may not completely change host cell preference, and other regions of VHSV might also involve in the determination of host cell preference.
Park, Ji-Yoon;Kim, Hyoung Jun;Choi, Hye-Sung;Kwon, Se Ryun
Journal of fish pathology
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v.35
no.1
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pp.41-46
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2022
Since viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) was first reported in European rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in the 1930s, it has caused high prices in freshwater and saltwater fish around the world, causing enormous economic damage to the aquaculture industry. We have been seeking required countermeasures against viruses because of economic damage to the aquaculture industry. However, commercial vaccines have the limitations of being costly to use in farms and being effective to only one pathogen. The aquaculture industry these days is taking on new alternatives to vaccines, antibiotics and chemicals. In this study, the suitability of antiviral effects against VHSV was evaluated in vitro for various plant extracts to judge their effectiveness. Atriplex gmelinii, Ixeris repens, Arctium lappa, and Sargassum coreanum were tested to know the correlation between the amount of virus and the concentration of extract investigates if these extracts have antiviral effects. Virus and extracts at various concentrations were inoculated simultaneously as 1:1 ratio into EPC cell lines. There are no antiviral effects with Atriplex gmelinii, Ixeris repens and Arctium lappa. Extract of Sargassum coreanum only has the antiviral activity in a dose-dependent manner. These results show that extract of Sargassum coreanum can be used in aquaculture industry as an antiviral materials.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.15
no.8
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pp.5412-5418
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2014
The red seabream iridovirus (RSIV), which belongs to the iridoviridae, causes infectious fish diseases in many Asian countries, leading to considerable economic losses to the aquaculture industry. Using the yeast surface display (YSD) technique, a new experimental system was recently developed for the detection and identification of a variety of marine viruses. In this study, a coat protein gene of RSIV was synthesized based on the nucleotide sequence database and subcloned into the yeast expression vector, pCTCON2. The expression of viral coat proteins in the yeast strain, EBY100, was detected by flow cytometry and Western blot analysis. Finally, they were isolated from the yeast surface through a treatment with ${\beta}$-mercaptoethanol. The data suggests that the YSD system can be a useful method for acquiring coating proteins of marine viruses.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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