In Korea, fish is a major food source, and sustainable production of fish is critical for the aquaculture industry. Recently, infectious diseases have become an unavoidable problem in aquaculture and have caused serious economic losses. Therefore, there is an urgent need to overcome this challenge to increase productivity in aquaculture. Vaccination is the most effective and long-term measure for improving the management of a fish farm. Sales of fish vaccines in Korea have been steadily increasing, with a confirmed increase from 600 million won in 2007 to 3.4 billion won in 2018. As of 2021, 30 licensed fish vaccines, including both single and combination vaccines containing more than two inactivated pathogens, have been approved in Korea for 10 fish pathogens. Twenty-eight of these are used in olive flounder Paralichthys olivaceus; however, only two vaccines are used in starry flounder Platichthys stellatus, red seabream Ragrus major and rock bream Oplegnathus fasciatus. Therefore, vaccine development is required not only for the olive flounder but also for other cultured fish species. The development of effective vaccines and vaccination programs for fish is a continuous requirement for a sustainable aquaculture industry.
본 연구에서는 넙치에 대한 β-용혈성 Streptococcus iniae 백신의 효능을 조사하였다. 시험 백신은 10% 중성포르말린을 이용하여 최종 농도가 0.3% 및 3%가 되도록 첨가하여 제작하였으며 건강한 넙치의 복강에 1회 또는 2회 주사하였다. 그 결과, 두 종류의 백신 모두 어떠한 심각한 부작용도 야기하지 않았다. 또한 1회 접종구에 비해 2회 접종구에서 응집항체가가 유의적으로 증가하였으며, 포르말린 농도별로 비교한 결과 저농도인 0.3%에 비해 고농도인 3% 포르말린 처리 백신을 접종한 경우 1회 접종구에서는 4주째에, 2회 접종구에서는 8주째 응집항체가가 유의적으로 증가한 것으로 나타났다. 항체 생성에서 나타난 차이에도 불구하고 두 종류의 백신 모두 공격 실험 결과 방어력이 인정되었다. 즉, 0.3% 포르말린 처리 백신의 1회 접종 및 2회 접종구의 경우 각각 67% 및 87.5%의 상대생존율을 나타내었으며, 3% 포르말린 처리 백신의 1회 접종 및 2회 접종구에서는 각각 70% 및 77%의 상대생존율을 나타내었다. 따라서 추후 응집항체가와 방어력 사이의 상관성뿐만 아니라 고농도의 포르말린 처리가 항원성의 변형에 미치는 영향에 대한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
As the capture fishing industry has declined, the aquaculture industry has become an important source of seafood. With this tendency all fish farming will be performed by large-scale farms where the fish are cultivated in much high density and as a result the incidence of infectious diseases increases. Therefore, vaccination has become an increasingly important part of aquaculture as a cost effective method of controlling various diseases. The early fish vaccines were the formalin inactivated bacteria or virus cultures, which were administered by either immersion or injection. Recombinant DNA biotechnology allowed us to develop orally administrated DNA and recombinant vaccines. In terms of the manufacturing process and cost, Lemna and Spirodela is the most efficient and reliable plant expression system for the production of edible vaccine.
It has been very difficult to develop and evaluate efficient fish vaccines because fish immune cells have not been properly characterized. In this study, we investigated the cell-mediated immunological properties of B- and T-like cells in Nile tilapia (Oreochromis nilotica). Surface immunoglobulin negative ($slg^{-}$) cell population proliferated in response to mammalian T-cell mitogens PHA and Con A, while surface immunoglobulin positive ($slg^{+}$) cells responded to the B-cell mitogen LPS. The slg$^{[-10]}$ cells from hemocyanin (HC)-immunized Tilapia, compared to the non-immunized control, reacted more to PHA than to Con A. Unexpectedly, antigen (Ag)-specific response was observed in both $slg^{-}$ and $slg^{-}$cells. Regardless of HC immunization, whole leukocytes from 8 head kidney of fish showed natural killer (NK)cell activity. Especially, NK cell activity was much higher in slg$^{[-10]}$ cells than in slg$^{+}$cells, indicating the possibility that fish NK cells were not at least associated with slg$^{+}$ cell population and not activated by Ag. Further understanding of functional fish immune cells will help to evaluate and develop effective vaccines for fishes and to monitor the course of therapy In infected fishes.hes.
Vaccines based on single-cycle viruses that are replication-incompetent due to knockout of replication-related structural gene(s) are more immunogenic than inactivated or subunit vaccines and can be used as delivery vehicles for foreign antigens without concerns on the reverting to virulent forms. The aim of this study was to develop a delivery vehicle for nervous necrosis virus (NNV)-like particles (VLPs) using G gene deleted single-cycle VHSV (rVHSV-𝚫G). Recombinant single-cycle VHSVs carrying NNV capsid protein gene between N and P gene of rVHSV-𝚫G genome (rVHSV-𝚫G-NNVCap) were rescued by reverse genetic technology. The successful expression of NNV capsid protein in cells infected with rVHSV-𝚫G-NNVCap was demonstrated by Western blot analysis, and the production of NNV VLPs in infected cells was confirmed using an electron microscopy. The results suggest that single-cycle VHSVs can be used as a safe delivery vehicle for NNV VLPs, and can be extended to other pathogens for the development of prophylactic vaccines.
Streptococcosis, caused by Streptococcus iniae and Streptococcus parauberis is an important bacterial disease that affects in olive flounder in Korea. In Korea, multivalent bacterial vaccines are used to prevent streptococcal diseases in aquaculture. In this study, commercial vaccines containing formalin-inactivated bacterial cells of S. iniae and S. parauberis were administered at six fish farms and one unvaccinated fish farm were designated for investigation (Wando; 4 sites and Jeju; 3 sites). Blood was collected from vaccinated and unvaccinated olive flounders, and titers of antibodies against S. iniae and S. parauberis in serum were analyzed using ELISA. After a one shot vaccination in the farms at Jeju (farm A) and Wando (farm D), the proportion of individuals with specific antibodies against S. parauberis OD values of 0.4 or higher was 60% and 53.5%, respectively. But after booster vaccination, the proportion of individuals with serum OD values of 0.4 or higher was higher substantially increased to 96.6% (farm A) and 100% (farm D). The levels of S. parauberis specific antibodies of olive flounder were increased after vaccination in three fish farms (farm D, E, and F), but not S. iniae specific antibodies.
Microorganism-derived compounds, such as peptidoglycan, lipoteichoic acid, and β-glucan were supplemented in the scuticociliate Miamiensis avidus (M. avidus) vaccine to verify the specify component contribution to the adjuvant effect. Vaccine was formulated with the inactivated M. avidus antigen (YS2, 4.44×105 cells/fish) in combination with either peptidoglycan (10 ㎍ and 100 ㎍/fish), lipoteichoic acid (5 ㎍ and 50 ㎍/fish), or β-glucan (10 ㎍ and 100 ㎍/fish). Olive flounder injected with peptidoglycan supplemented vaccine (10 ㎍ and 100 ㎍/fish) exhibited significant protection, and the relative percent survival (RPS) was 55% and 65% at 4 weeks post vaccination (wpv), respectively, at the corresponding doses. The vaccine groups with added lipoteichoic acid (5 ㎍ and 50 ㎍/fish) exhibited RPS of 40% and 5%, respectively. Additionally, the group with added β-glucan (100 ㎍/fish) exhibited RPS of 35%, but no effect was observed in the group with added 10 ㎍/fish β-glucan. At 8 wpv, olive flounder injected with peptidoglycan and lipoteichoic acid supplemented vaccines exhibited protection with RPS range of 11/11% and 5/21%, respectively, at the respective doses. M. avidus vaccine containing 10 ㎍ and 100 ㎍/fish of β-glucan exhibited the RPS of 32% and 37%, respectively. Conclusively, peptidoglycan contributed in high protection of the M. avidus vaccine, and thus, it can be used as an effective adjuvant in the M. avidus vaccine.
양식 잉어류에서 심각한 피해를 야기하고 있는 VSNCV에 대한 백신을 제작하여 잉어에 투여한 후 특이적 및 비특이적 면역반응을 조사하였다. 백신은 포르마린처리백신 (FKV)과 가온처리백신 (HKV)를 제작하여 건강한 잉어에 0.2㎖씩 복강주사 하였으며, 2주 후 동일한 방법으로 boost 처리하였다. 백신 투여 후 비특이적 면역반응 중 혈청 라이소자임 활성과 대식세포의 chemiluminescent (CL) reponses은 1차 주사 후 및 boost 처리 후 2일째부터 7일째까지 유의적인 증가를 나타내었으며, 이후 대조구 수준으로 감소하였다. ELISA법으로 항체가를 조사한 결과 대조구를 제외한 FKV와 HKV 투여구에서 주사 후 2주 째부터 boost 처리 후 6주 째까지 유의적으로 증가하였으며, 그 중에서도 boost 처리 후 2주 째 최고치를 나타내었다. 각 시험구별로 boost 처리 후 2주 째에 VSNCV로 공격 실험한 결과 FKV 투여구에서는 20%의 누적폐사율을 나타내어 방어력이 인정되었으나, HKV 투여구에서는 70%의 누적폐사율이 나타나 방어효과가 거의 없는 것으로 나타났다.
Snakehead rhabdovirus (SHRV) is different from other fish novirhabdoviruses such as viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), and hirame rhabdovirus (HIRRV) in that it replicates at high temperatures. Therefore, the delivery of foreign proteins to fish living at high water temperature would be possible by using recombinant SHRVs. In the present study, to evaluate the possible use of SHRV as a vehicle for foreign proteins delivery, we generated a recombinant SHRV that contains an enhanced-GFP (eGFP) gene between nucleoprotein (N) and phosphoprotein (P) genes (rSHRV-A-eGFP), and another recombinant SHRV expressing two heterologous genes by inserting an eGFP gene between N and P genes, and mCherry gene between P and M genes (rSHRV-AeGFP-BmCherry). Epithelioma papulosum cyprini (EPC) cells infected with the recombinant SHRVs showed strong fluorescence(s), suggesting the possible availability of recombinant SHRVs for the development of combined vaccines by expressing multiple foreign antigens.
Since viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) was first reported in European rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in the 1930s, it has caused high prices in freshwater and saltwater fish around the world, causing enormous economic damage to the aquaculture industry. We have been seeking required countermeasures against viruses because of economic damage to the aquaculture industry. However, commercial vaccines have the limitations of being costly to use in farms and being effective to only one pathogen. The aquaculture industry these days is taking on new alternatives to vaccines, antibiotics and chemicals. In this study, the suitability of antiviral effects against VHSV was evaluated in vitro for various plant extracts to judge their effectiveness. Atriplex gmelinii, Ixeris repens, Arctium lappa, and Sargassum coreanum were tested to know the correlation between the amount of virus and the concentration of extract investigates if these extracts have antiviral effects. Virus and extracts at various concentrations were inoculated simultaneously as 1:1 ratio into EPC cell lines. There are no antiviral effects with Atriplex gmelinii, Ixeris repens and Arctium lappa. Extract of Sargassum coreanum only has the antiviral activity in a dose-dependent manner. These results show that extract of Sargassum coreanum can be used in aquaculture industry as an antiviral materials.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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