어류질병에 대한 천연 항균제를 개발하기 위한 일환으로 계피로부터 항균성 물질을 추출하여 어류질병세균에 대한 항균효과, 최소발육저지농도, 최소살균농도 및 어류 사료에 적용 시험 등을 실시하였다. 계피 추출물의 그람양성세균에 대한 최소발육저지농도는 $75.8\sim189.6{\mu}g/mL$이었고, 그람음성세균에 대하여는 $75.8\sim113.8{\mu}g/mL$ 이었으며, 그람양성균보다 음성균에 대하여 보다 강한 살균작용을 나타내었다. 계피 추출물은 본 실험에 사용된 그람양성세균 및 그람음성세균 모두에 대하여 폭 넓은 항균스펙트럼을 나타내었으며, 특히 Streptococcus iniae, Edwardsiella tarda 및 Listonella anguillarum에 대하여 강한 증식 억제력을 보였다. 계피 추출물은 S. iniae에 대하여 $113.8{\mu}g/mL$ 첨가로 살균작용을 보여 12시간 배양 후 31og 정도의 균수를 감소시켰고, $189.6{\mu}g/mL$ 첨가구는 초기 균수 $10^6CFU/mL$인 것이 12시간 배양 후 세균이 검출되지 않았다. 또한 L. anguillarum에 대하여는 $75.8{\mu}g/mL$ 첨가시에는 배양 24시간 후 약 21og 정도의 균수가 감소하였고, $151.6{\mu}g/mL$첨가구에서는 24시간 후 세균이 검출되지 않았다 사료를 계피 추출액에 침지시 적정 침지 시간은 10분이었으며, 사료 중량에 따른 추출물 흡수량은 식 Y=7.2726X+4.5083 ($R^2=0.9998$)이었다 계피 추출액에 침지시킨 사료는 사용된 모든 어류질병세균의 증식을 억제하였으며, 그것의 항균활성은 저장온도 $10\sim35^{\circ}C$에서 28일까지 안정하였다. 또한 침지 사료를 액체배지에 넣어 배양했을 때, 사료에 존재하는 미생물의 증식을 억제시켰다.
상백피로부터 항균성 물질을 추출하여 어규질병에 대한 천연 항균약제로서의 이용 가능성을 타진하기 위하여 어류질병세균에 대한 항균활성 및 상백피 추출물에 침지 시킨 사료의 항균작용 등을 검토하였다. 고체배지에서 상백피 에탄올 추출물은 Steptococcus sp., Lactococcus garvieae 및 Staphylococcus sp. 등의 그람양성 세균에 대하여는 강한 항균활성을 나타내었으나, 그람음 성세균인 Listonella anguillarum 및 Edwardsiella tarda에 대하여는 약한 항균활성을 보였다. 액체배지에서 상백피 에탄올 추출물의 그람양성세균에 대한 최소발육저지농도는 19.8 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$이었으며, 37.5~118.5 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 농도에서는 살균작용물 보여 그람양성세균에 대하여는 균 증식을 억제함은 물론 살균작용도 가지고 있음을 알 수 있었다 반면, 그람음성세균에 대한 최저발육저지농도는 790.0~1185.0$\mu\textrm{g}$/$m\ell$이었고, E. tarda에 대하여는 1185.0 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$이었고, E. tarda에 대하여는 1185.0 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$를 첨가하여도 균을 사멸시키지 못하였다. 사료를 상백피 에탄올 추출물에 침지시 적정 침지 시간은 3분이었고, 상백피 추출물에 침지시킨 사료는 그람양성세균의 증식을 억제하여 10.5~12.0 mm의 저해환을 나타내지 못하였다. 또한, 사료 중량에 따른 추출물 흡수량은 식 Y = 7.5757X + 4.6962 ($R^2$ = 0.9998)으로 아주 밀접한 상관관계를 나타내었다.
This study examined the effects of dietary glycoprotein extracted from Porphyra yezoensi on growth performance and resistance against the pathogenic bacteria Edwardsiella tarda in olive flounder. A porphyra-originated glycoprotein (P) was extracted using sequential processes of water and ethanol treatment. P extracts were added to a fish-meal-based diet at concentrations of 0.0, 0.5, and 1.0% (designated as Con, $P_{0.5}$, and $P_{1.0}$, respectively). Fish were fed one of the three experimental diets for 10 weeks. All fish groups exhibited over 96.7% survival during the experimental period. Results indicated that the fish fed diets containing P showed an increase in growth performance, including enhanced weight gain, specific growth rate, and feed efficiency. An increase in insulin-like growth factor (IGF-1) was observed in the fish fed the $P_{1.0}$ diet, as compared to those fed Con. At the end of the 10-week feeding trial, all fish were infected with E. tarda, and accumulated mortality was monitored for 8 days. Fish fed the Con diet exhibited increasing mortality from day 3 to the end of the challenge test, whereas the mortality of P-fed fish ceased at day 5. We suggest that supplementation with P-originated glycoprotein in aquafeed may increase growth performance and resistance against pathogenic bacteria in olive flounder juveniles.
This study was examined the microbiological adequacy of fish feed treated with high-dose irradiation (5 kGy). 125 flounder (Paralichthys olivaceus) were grouped into 5 and then the fishes were fed the following feeds for 28 days: (1)standard feed; (2)standard feed, inoculated with Edwardsiella tarda ($1{\times}10^8-1{\times}10^9CFU/g$ of feed); (3)standard feed, inoculated with Vibrio anguilarum ($1{\times}10^8-1{\times}10^9CFIT/g$ of feed); (4)standard feed, inoculated with Streptococcus faecalis ($1{\times}10^8-1{\times}10^9CFU/g$ of feed); (5)standard feed, inoculated with Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum and Streptococcus faecalis, and then irradiated the mixed feed to 5 kGy. The flounders feed the mixed diet with Edwardsiella tarda, Wbrio anguillarum or Streptococcus faecalis inoculated feed were showed severe cumulative mortalities of 60, 48 and 52% respectively. The gross and histological changes were observed on the fishes. However, fishs fed with the feed of bacteria inoculation before irradiation demonstrated excellent protection against the bacteria-related disease. The results from experiments with bacteria inoculated feed indicated that the irradiation methods employed were capable of preventing contamination of the fishs with pathogenic bacteria.
Celebes rainbow (Marosantherina ladigesi) is one of Indonesia's exported ornamental fish commodities, but the exploitation of this fish only relies on wild catches. The rise of unlimited fishing, especially those using poison, has changed the aquatic environment, threatening sustainability and causing fish extinction. This study aimed to evaluate the effectiveness of several types of feed in improving the absolute growth rate (AGR), specific growth rate (SGR), survival rate (SR), feed conversion ratio (FCR), feed efficiency (FE), hematology, and immune response of Celebes rainbow. The fish used in this study were male ornamental Celebes rainbow (M. ladigesi) weighing 1.32 ± 0.21 g/ind, reared in 54 L-aquariums at a stocking density of 30 individuals/aquarium for six weeks. The fish were fed according to the test diet consisting of live Tubifex sp worms, dry Tubifex sp worms, Spirulina platensis, and crumble pellets. The parameters observed were AGR, SGR, SR, FCR, FE, hematology, intestinal histology, liver histology, and a challenge test with the pathogenic bacteria Aeromonas hydrophila. The results showed that fish-fed live Tubifex sp worms had better AGR, SGR, SR, FCR, FE, hematology, and disease resistance compared to all other treatments. These results indicate that live Tubifex sp worms are the best feed for rearing Celebes rainbow.
전복의 면역, 생리 및 생태에 관한 기초 연구는 매우 부족하며 전복 질병에 관한 연구 또한 어류에 비하여 극히 취약한 상태이다. 외국의 경우 전복 치패에서 vibrios로 인한 피해 사례가 많이 보고되어 있으나 우리나라에서는 세균성 질병으로 인한 전복 폐사에 관한 보고가 드물다. 그러나 폐사체로부터 vibrios가 높은 빈도로 분리되고 있어 이들 Vibrio속 세균과 전복 폐사와의 관련성에 대한 검토가 필요하다. 현재 전복 양식 현장에서는 질병으로 인한 피해를 최소화하기 위해 항균제를 사용하고 있지만 치료 효과는 미미한 수준이다. 이에 대한 대책으로 probiotics에 대한 요구가 증가하고 있어 본 연구에서는 인체에 위해하지 않은 균을 분리하여 전복 probiotics로서의 개발 가능성을 알아보았다. 잘 숙성된 김치액에서 분리된 균들 중 다양한 vibrios에 대하여 항균력을 나타낸 KC16-2을 candidate probiotic 균으로 선발하였다. KC16-2는 생화학적 특성과 16S rRNA gene sequence에 근거하여 Bacillus amyloliquefaciens로 동정되었다 (B. amyloliquefaciens KC16-2). B. amyloliquefaciens KC16-2는 in vitro 실험에서 병원성 비브리오에 대하여 광범위한 생장 억제 효과를 보였으며, 온도 $15{\sim}25^{\circ}C$의 해수에서 4일까지 일정수를 유지하였으므로 겨울 이외의 기간에는 사용이 가능하다고 판단되었다. 또한 담즙에 의해 생장이 억제되었으나 시간 경과에 따라 처음 투여 농도보다 증가하는 양상이 관찰되어 담즙이 있는 곳에서도 생존 가능하다고 판단되었다. 시판 사료에 KC16-2를 혼합하여 12주간 전복에 투여하였을 때 대조구에 비해 다소 좋은 성장을 보였으나 통계학적으로 유의한 차이는 없었다. 한편 전복에 병원성을 가진 Vibrio tubiashii의 인위감염실험에서 probiotic사료를 공급한 수조에서 폐사율을 약 50% 감소시키는 결과를 나타냄으로써 기회성 vibrios로 인한 전복의 폐사를 줄이기 위하여 KC16-2의 사용이 긍정적으로 검토될 수 있음을 시사하였다.
어류병원성 연쇄상구균에 대하여 항 미생물 효과를 갖는 것으로 보고된 Bacillus sp. CPB-St를 수산용 probiotics로 개발하기 위한 기초 조사로서 미생물의 생물학적인 특성을 알아보았다. Bacillus sp. CPB-St는 16S rRNA 유전자 염기서열에 근거하여 Bacillus pumilus로 동정되었으며 B. pumilis CPB-St (이하 CPB-St)로 명명되었다. CPB-St를 배양 온도 및 배지의 종류에 따라 Streptococcus sp.에 대한 생장억제능력을 평가한 결과, $20^{\circ}C$(억제대: 11~29 mm)에서 배양하였을 때가 $30^{\circ}C$ (12~21 mm)에서 배양했을 때보다 생장억제효과가 높았고, NA (29 mm)와 TSA (29 mm)에서는 유사하였으나 BHIA (22 mm)에서는 낮게 나타났다. 또한 생장억제대의 크기는 pH 7.0에서 18 mm로 가장 높게 나타났고, 염분농도 0.5~3%에서는 동일하였다. 한편 CPB-St 의 생물학적 특성을 알아본 결과 $30^{\circ}C$에서 완만한 증식을 보였으며 배양 후 48시간에 최고 생장을 나타내었다. pH 4.0로 조정한 인공위액에서는 5시간까지 약간의 감소만 나타내었다. 넙치에서 채취 한 담즙에서 CPB-St는 농도에 관계없이 동일한 성장을 보였으며 deoxycholic acid가 첨가된 TSA배지에서 $300{\mu}g/ml$의 농도까지 증식 가능하였다. 또한 1%의 염분농도에서 최적의 성장을 보였으며 7%의 농도까지 증식에 큰 차이를 보이지는 않았고 저온 내성의 경우 $-20^{\circ}C$와 $-70^{\circ}C$에서는 45분경과 시점부터 대조군에 비해 성장 감소가 나타났으나 $4^{\circ}C$에서는 실온과 차이를 보이지 않았다. 따라서 CPB-St는 어류의 소화관 내에서의 생존가능성이 높으며 사료에 첨가하여 저온에 보관하여도 균수가 감소되지 않을 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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