Wamala, S.P.;Mugimba, K.K.;Mutoloki, S.;Evensen, O.;Mdegela, R.;Byarugaba, D.K.;Sorum, H.
Fisheries and Aquatic Sciences
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제21권2호
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pp.6.1-6.10
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2018
The intention of this study was to identify the bacterial pathogens infecting Oreochromis niloticus (Nile tilapia) and Clarias gariepinus (African catfish), and to establish the antibiotic susceptibility of fish bacteria in Uganda. A total of 288 fish samples from 40 fish farms (ponds, cages, and tanks) and 8 wild water sites were aseptically collected and bacteria isolated from the head kidney, liver, brain and spleen. The isolates were identified by their morphological characteristics, conventional biochemical tests and Analytical Profile Index test kits. Antibiotic susceptibility of selected bacteria was determined by the Kirby-Bauer disc diffusion method. The following well-known fish pathogens were identified at a farm prevalence of; Aeromonas hydrophila (43.8%), Aeromonas sobria (20.8%), Edwardsiella tarda (8.3%), Flavobacterium spp. (4.2%) and Streptococcus spp. (6.3%). Other bacteria with varying significance as fish pathogens were also identified including Plesiomonas shigelloides (25.0%), Chryseobacterium indoligenes (12.5%), Pseudomonas fluorescens (10.4%), Pseudomonas aeruginosa (4.2%), Pseudomonas stutzeri (2.1%), Vibrio cholerae (10.4%), Proteus spp. (6.3%), Citrobacter spp. (4.2%), Klebsiella spp. (4.2%) Serratia marcescens (4.2%), Burkholderia cepacia (2.1%), Comamonas testosteroni (8.3%) and Ralstonia picketti (2.1%). Aeromonas spp., Edwardsiella tarda and Streptococcus spp. were commonly isolated from diseased fish. Aeromonas spp. (n = 82) and Plesiomonas shigelloides (n = 73) were evaluated for antibiotic susceptibility. All isolates tested were susceptible to at-least ten (10) of the fourteen antibiotics evaluated. High levels of resistance were however expressed by all isolates to penicillin, oxacillin and ampicillin. This observed resistance is most probably intrinsic to those bacteria, suggesting minimal levels of acquired antibiotic resistance in fish bacteria from the study area. To our knowledge, this is the first study to establish the occurrence of several bacteria species infecting fish; and to determine antibiotic susceptibility of fish bacteria in Uganda. The current study provides baseline information for future reference and fish disease management in the country.
Raw-fish food contains a lot of moisture and is a high-protein food. It is a first-stage processed food taking a lot of manual work. Therefore, it is classified as a PHF food, very liable to cause a bacterial food-poisoning. But its manufacturers are usually small-sized and a systematic sanitation management is difficult to expect. But the manufacturer participating in this study produces chilled fresh raw-fish food. Fish are sliced into two fillets, which are packaged under vacuum, kept and distributed in refrigerators, and sold within a day. It is a newly-developed kind of raw-fish food, and a more improved kind of raw-fish food making possible a systematic sanitation management. The HACCP (Hazard Analysis and Critical Control Point) is a systematic and continuous process-control method which is very efficient for controling food sanitation and reducing the expenses. A new HACCP model has been developed to be applied to a large-sized chilled fresh raw-fish food manufacturer. To ascertain its efficiency, the baterial examination was done to its workplace and products. The significance test was done on its data by "SPSS 12.0 for Window" and "Mann-Whitney U Test". The numbers of bacteria on its final products were significantly different in flatfish and porgy. The number of bacteria tended to decrease in each time-differential sampling (P<.00l). The final food products showed no food-poisoning bacteria in all the time-differential tests and in all the samplings, which proves that the CCP of the HACCP system is under control. After the SSOP program was applied, no pathogenic bacteria were found in the work-place, and the kinds and numbers of bacteria decreased. The numbers of general bacteria and colon bacilli also showed a significant difference from those before the SSOP program in the filleting board (P<.05), in the skinning board (P<.0l), in the neck-removing knife (P<.05), and in the filleting knife (P<.01). The working equipments, periodically disinfected, also showed a significant difference in sanitary conditions (in the dehydrator, P<.05). The number of bacteria found on the food-touching surface was within the standard (below 500/l00 cm$^2$) After the SSOP program was applied, the general bacteria and colon bacilli were not found. The quality of water used in the food processing was also within the standard. The numbers of bacteria falling from the air in the work-place were negligible in all the samplings (<30CFU/l000ι). The staphylococci and fungi were not found.
본 연구에서는 광합성세균 또는 젖산균 등과 같은 유용 미생물에 의한 육상수조식 양식장 배출물의 재활용이 가능한지 평가하였다. 제주에 있는 육상수조식 양식장의 배출물을 조사 분석한 결과 배출물은 회분, 수분과 더불어 단백질, 지방으로 구성되어 있었다. 따라서 배출물이 광합성세균 또는 젖산균의 생장에 대한 기질로서 이용 가능한지를 평가하였다. 배출물은 광합성세균 생장의 기질로서 이용할 수 있었으며, 젖산균의 경우에는 당분을 첨가하면 기질로서 이용할 수 있었다. 본 결과는 육상수조식 양식장에서 배출되는 배출물이 유용미생물에 의하여 효과적으로 재활용될 수 있는 가능성을 제시하였다.
본 실험의 목적은 Gram 양성균 뿐만 아니라 Gram음성세균에 대한 넓은 항균활성 및 내산성 그리고 항생제 내성을 갖고 있는 유용한 probiotic 후보균주를 선발하여 어류의 세균성 질병 예방 흑은 치료를 함으로써 양식산업의 효율성을 증대시키고자 한다. 20균주의 유산균을 김치, 양식 넙치의 장 그리고 각종 젓갈류 중에서 분리하여 어류 병원성 세균에 대한 항균능을 MRS agar상에서 agar spotted method에 의해 조사하여 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda 그리고 streptococcus sp.에 대해 항균활성 이 있는 7균주를 1차 선발 하고 이들중 항균스펙트럼 이 넓은 BK19를 최종선발하여 동정한 결과 Lactobacillus sakei BKl9로 나타났다. L. sakei BK19의 cell free supernatant를 pH 중화 및 catalase 처리한 후 어병세균에 대하여 항균활성을 확인하였다. L. sakei BK19 supernatant의 V.anguillarum 및 V.alginolyticus에 대한 항균성 기작은 주사전자현미경 관찰을 통하여 확인하였고 세포벽을 붕괴 시킴으로써 성장을 저해하고 사멸시키는 것으로 확인되었다.
본 실험의 목적은 Gram 양성균 뿐만 아니라 어병세균인 Gram 음성세균에 대한 넓은 항균활성 및 내산성 그리고 항생제 내성을 갖고 있는 유용한 probiotic 후보균주를 선발하여 어류의 세균성 질병 예방 혹은 치료를 함으로써 양식산업의 효율성을 증대시키고자 한다. 20종의 유산균을 김치, 양식 넙치의 장 그리고 각종 젓갈류 등에서 분리하여 어류병원성 세균에 대한 항균능을 MRS agar상에서 agar spotted method에 의해 조사하여 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda, 그리고 Streptococcus sp.에 대해 항균활성이 있는 7종의 균주를 1차 선발을 하였다. pH 및 항생제 내성능을 검토하여 probiotic 균주를 분리하였다. 분리된 후보 균중 창란젓에서 분리된 BK19에서 가장 큰 항균 spectrum과 pH 내성 그리고 항생제에 대한 내성이 확인되어 최종적으로 본 실험의 공시균주로 선발하여 생화학적, 형태학적 특성 및 16S rRNA 분석을 통하여 Lactobacillus sakei BK19로 동정하였다.
Various antibiotics, that could induce the appearance of resistant microorganisms, have been used for treatment or prevention of bacterial diseases in marine and ornamental fish. We determined and characterized the level of antibiotic-resistant bacteria and proportion of multi-drug resistant bacteria in intestinal microflora of both marine fish cultured in Korea and imported ornamental freshwater fish. For this the bacterial species and resistance to antibiotics were investigated in intestine of rock bream Oplegnathus fasciatus cultured in Korea and pearl gourami Trichogaster leeri imported from Singapore to characterise. Although the bacterial species were different, proportions of resistant bacteria to single antibiotics or multi-drug were higher in intestinal microflora of pearl gourami Trichogaster leeri imported from Singapore than in rock bream Oplegnathus fasciatus cultured in Korea. These results indicate that various antibiotics have been being used before trading without measures in the market of asian ornamental fishes, providing high risks for the emergence of multi-drug resistant bacteria.
본 연구에서는 주요 어류 병원성 그람음성세균인 E. tarda 및 V. anguillarum에 대하여 14 종의 생약 추출물의 항균활성을 검색하였다. 그 결과, 감초, 지유 및 칠피 추출물이 항균활성을 나타냄을 밝혔다. 그 중, 가장 우수한 항균활성을 나타낸 칠피 추출물에 대하여 활성지향적인 분리기법을 적용하여 활성분획물인 EtOAc분획물로부터 항균활성물질 1종을 분리하고 페놀성 화합물인 methyl gallate로 동정하였다. methyl gallate는 실험에 사용된 E. tarda 및 V. anguillarum의 균주들의 증식을 효과적으로 저해하였으며 이에 대한 MIC는 모두 1 mg/ml로 측정되었다.
In this study, the bactericidal activity of each extract from Sawa-wasabi (Wasabia japonica) root, stem and leaf against the fish pathogenic bacteria were examined. The main component related to bactericidal activity in Sawa-wasabi was well known to AlT. The Sawa-wasabi roots showed the highest AIT amount with 1.18 mg/g. Stems was 0.41 and leaves was 0.38 mg/g. All of them showed bactericidal activity against 2 strains of Vibrio hollisae, V. anguillarum, and 2 strains of Edwardsiella tarda, but weak effect against Staphylococcus capitis. The Sawawasabi leaves showed the strongest bactericidal activity with minimal bactericidal concentrations (MBCs) of 156.3mg of dry weight/mL against 2 strains of V. hollisae, V. anguillarum and 2 strains of E. tarda. The roots and stems showed a little weak bactericidal activities with 312-1,250mg of dry weight/mL against them. These results suggest that certain components besides AIT in Sawa-wasabi are affective in killing fish pathogenic bacteria.
The gamma-radiation sensitivity of three kinds of pathogenic bacteria to fish was investigated. $D_{10}$ values (irradiation dose required to inactivate 90% of the population) of Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum and Streptococcus faecalis were 0.08, 0.10 and 0.44 kGy, respectively. The inactivation factors were 4.50 - 24.30 and 6.75 - 36.45 at radiation doses of 2 and 3 kGy. Raw moist pellets were inoculated with Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum or Streptococcus faecalis. Inoculated feed samples were packaged in air and irradiated at 5 kGy. This dose was effective in controlling the inoculated and general bacteria in fish feed. We consider gamma-radiation to be an effective method to sterilize pathogenic bacteria in fish feed.
세균성 어류질병의 치료 및 예방을 위하여 어류와 인체에 안전한 수산용 probiotic의 개발이 요구되고 있다. 본 연구에서는 남해안 일대에서 양식되고 있는 참굴 (Crassostrea gigas), 바지락 (Ruditapes philippinarum), 피조개 (Scapharca broughtonii), 새조개 (Fulvia mutica)의 가식 부위로부터 17균주의 candidate probiotic bacteria (CPB)를 분리하였다. 나아가 다양한 연쇄상구균 (Lactococcus garvieae, L. piscium, Streptococcus sp., S. iniae, and S. parauberis)에 대하여 강한 생장 억제력을 보이는 균주(CPB-St)를 선별하여 어류의 연쇄구균증 관리를 위한 probiotic 균주로서의 개발 가능성을 알아보았다. CPB-St 균주를 double layer test를 통하여 다양한 연쇄상구균들에 대한 생장 억제 정도를 알아보았으며, 혼합 배양에서의 Streptococcus sp.에 대한 생장 억제 능력을 확인하였고, CPB-St의 어류에 대한 안전성 및 장내 생존 유무를 평가하였다. CPB-St는 대부분의 연쇄상구균에 대하여 18~26 mm의 생장 억제대를 형성함으로써 높은 생장 억제 능력을 보였다. CPB-St와의 혼합 배양에서 Streptococcus sp.는 6시간째부터 생장 억제 현상이 관찰되기 시작하여 12시간 전후로 8~55배 정도의 감소를 나타내었다. CPB-St의 어류에 대한 병원성 유 무를 알아본 결과, 2주일 동안 CPB-St로 인한 어류 폐사는 관찰되지 않았다. CPB-St의 1회 강제 경구 투여 후, 위와 장에서 CPB-St의 생존을 확인한 결과 투여 24시간 후에는 CPB-St가 모두 배출되는 것으로 나타났다. CPB-St를 probiotic bacteria로 개발하기 위해서는 어류의 장내 정착 가능성과 먹이를 통한 효과의 정확한 검증이 추후 이루어져야 할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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