• 제목/요약/키워드: Fingerprinting Methods

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유전자형에 따른 Streptococcus mutans의 subtyping: Southern blot RFLP와 AP-PCR을 이용한 비교 (EVALUATING TWO METHODS FOR FINGERPRINTING GENOMES FOR STREPTOCOCCUS MUTANS IN CHILDREN : A COMPARISON WITH AP-PCR AND SOUTHERN BLOT RFLP)

  • 정태성;김신
    • 대한소아치과학회지
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    • 제25권2호
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    • pp.292-303
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    • 1998
  • The arbitrary primer polymerase chain reaction(AP-PCR) and Southern blot restriction fragment length polymorphism(RFLP) were used to genotype the cariogenic pathogen S. mutans in children. Following the morphologic chracteristics of colony on selective medium for S. mutans, total genomic DNA from 155 strains was extracted by conventional methods. Among 155 strains, 143 strains (92.3%) were confirmed S. mutans by PCR with dexA gene and 114 strains were used in this study. Three random sequence 10-base oligonucleotide primers were chosen for AP-PCR. The amplified DNA products were separated electrophoretically in a 2% agarose gel containing ethidium bromide and the banding patterns were compared among different strains. For RFLP analysis, DNA was digested with EcoRI and BamHI, separated on a 0.7 % agarose gel and transferred to a nylon membrane. The membrane was probed with a previously characterised 1.6 kilobases (kb) DNA fragment cloned from gtf B gene of S. mutans. The probe was labeled with isotope[$^{32}P-{\alpha}CTP$], and hybridized fragments were detected with intensifying screen. AP-PCR produced 4-8 DNA bands in the 0.25-10 kb regions and distinguished 9, 10 or 12 genotypes, depending on the specific primer used. Southern blot RFLP analysis revealed 2 hybridization patterns consisting of 1 DNA fragments 450, 500 bp. These results indicate that AP-PCR is more discriminative method for genotyping of S. mutans.

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Anti-proliferative Effect of Coptis Chinensis Extract in Hep G2 Cells

  • Kim, Jun-Lae;Oh, Se-Mi;Shin, Jang-Woo;Son, Jin-Young;Cho, Jung-Hyo;Lee, Yeon-Weol;Son, Chang-Gue;Cho, Chong-Kwan;Yoo, Hwa-Seung
    • 대한한의학회지
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    • 제27권4호
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    • pp.48-56
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    • 2006
  • Objectives : This study is aimed to elucidate anti-hepatoma activity of Coptis Chinensis Extract (CCE) and evaluate its effect on proliferation of human hepatoma Hep G2 cells. Methods : To identify CCE and control the quality, we performed fingerprinting by high-performance thin layer chromatography (HPTLC). To investigate effects of CCE on anti-hepatoma activity, we measured cytotoxicity against Hep G2 cells compared with treatment of paclitaxel and 5-fluorouracil (5-FU). To examine the mechanism of inhibitory effect of CCE on Hep G2 cell proliferation, cell cycle distribution was evaluated using fluorescent activated cell sorter (FACS) Result : CCE showed a significant effect that arrests Hep G2 cells at the G2/M phase of the cell cycle. CCE combined with paclitaxel inhibited synergistically cell growth of Hep G2 cells. Conclusion : CCE may present anticancer effects through inhibition of hepatocellular carcinoma (HCC) cell proliferation via G2/M arrest, and may be a useful anticancer agent for HCC.

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Vasorelaxation Study and Tri-Step Infrared Spectroscopy Analysis of Malaysian Local Herbs

  • Ch'ng, Yung Sing;Tan, Chu Shan;Loh, Yean Chun;Ahmad, Mariam;Asmawi, Mohd. Zaini;Yam, Mun Fei
    • 대한약침학회지
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    • 제19권2호
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    • pp.145-154
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    • 2016
  • Objectives: The aim of this paper is to investigate the activities of Malaysian local herbs (Clinacanthus nutans Lindau, Strobilanthes crispus, Murdannia bracteata, Elephantopus scaber Linn., Pereskia bleo, Pereskia grandifolia Haw., Vernonia amygdalina, and Swietenia macrophylla King) for anti-hypertensive and vasorelaxant activity. An infrared (IR) macro-fingerprinting technique consisting of conventional fourier transform IR (FTIR), second-derivative IR (SD-IR), and two-dimensional correlation IR (2D-correlation IR) analyses were used to determine the main constituents and the fingerprints of the Malaysian local herbs. Methods: The herbs were collected, ground into powder form, and then macerated by using three different solvents: distilled water, 50% ethanol, and 95% ethanol, respectively. The potentials of the extracts produced from these herbs for use as vasorelaxants were determined. Additionally, the fingerprints of these herbs were analyzed by using FTIR spectra, SD-IR spectra, and 2D-correlation IR spectra in order to identify their main constituents and to provide useful information for future pharmacodynamics studies. Results: Swietenia macrophylla King has the highest potential in terms of vasorelaxant activity, followed by Vernonia amygdalina, Pereskia bleo, Strobilanthes crispus, Elephantopus scaber Linn., Pereskia grandifolia Haw., Clinacanthus nutans Lindau, and Murdannia bracteata. The tri-step IR macro-fingerprint of the herbs revealed that most of them contained proteins. Pereskia bleo and Pereskia grandifolia Haw. were found to contain calcium oxalate while Swietenia macrophylla King was found to contain large amounts of flavonoids. Conclusion: The flavonoid content of the herbs affects their vasorelaxant activity, and the tri-step IR macro-fingerprint method can be used as an analytical tool to determine the activity of a herbal medicine in terms of its vasorelaxant effect.

젖소 유방염 유즙에서 분리한 Streptococcus uberis의 항생제 감수성 및 유전학적 특성 (Antimicrobial susceptibility and genetic characteristics of Streptococcus uberis isolated from bovine mastitis milk)

  • 이길;강현미;정충일;문진산
    • 대한수의학회지
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    • 제47권1호
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    • pp.33-41
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    • 2007
  • Streptococcus spp. comprising Streptococcus (S.) uberis S. dysgalactiae strains is major causeof bovine mastitis from particularly well-managed or low somatic cell count herds that have successfullycontrolled contagious pathogens. In this study, antimicrobial susceptibility and genetic characteristics of S.uberis isolated from clinical or subclinical mastitis milk at 2003 were investigated. Eighty seven isolatesof Streptococus spp. were identified by the conventional biochemical methods. The antimicrobialsusceptibility by disk diffusion method was determined for 46 S. uberis, 11 S. bovis, 10 S. oralis, 6 S.uberis and 14 other Streptococcus spp.. Overall, the tested strains were susceptible to tetracycline (11.5%),amikacin (14.9%), streptomycin (16.1%), neomycin (26.4%), kanamycin (35.6%), gentamicin (65.2%),oxacillin (70.1%), ampicillin (75.9%), chloramphenicol (78.2%), and cephalothin (97.7%). Additionally, S.uberis strains were susceptible to pencillin G (97.8%), but resistant to erythromycin (76.0%) by minimalinhibitory concentration test. The multiple-drug resistance rate of isolated bacteria to 4 more thanamplification fingerprinting patterns amplifed with primer 8.6d showed that 3 to 8 number of distinguishableDNA fragments ranged from 180 bp to 1,20 bp. Thirty seven isolates of S. uberis strains were subtypedinto 8 distinct patterns. Each subtype revealed a typical pattern of antimicrobial susceptibilities. Thesefindings demonstrate that S. uberis isolates were mastitis pathogens of diverse serotypes, and oftenencountered the diverse resistant patterns.

HPLC를 이용한 정공등의 다성분 동시함량분석 (Simultaneous Quantification Analysis of Multi-components on Erycibae Caulis by HPLC)

  • 전혜진;유정;황완균
    • 약학회지
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    • 제57권4호
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    • pp.272-281
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    • 2013
  • In this study, we developed and validated the HPLC method using the isolated components from Erycibae caulis. Their structures were elucidated by spectroscopic methods including UV, $^1H$-NMR, $^{13}C$-NMR, FAB-Mass and ESI-Mass as Compound 1 (crypto-chlorogenic acid), Compound 2 (scopolin), Compound 3 (neochlorogenic acid) and Compound 4 (3,4-di-O-caffeoylquinic acid). Major three compounds and scopoletin were decided as representative components of Erycibae caulis. We established HPLC analytical method by using the representative components and 20 commercial samples which were collected considering to various cultivated area. The HPLC fingerprinting was successfully achieved with an AKZO NOBEL Kromasil 100-5C18 column. The mobile phase consisted of 0.5% acetic acid in water (A) and methanol (B) using gradient method of 85(A) to 50(A) for 35min. The fingerprints of chromatograms were recorded at an optimized wavelength of 330 nm. This developed analytical method was validated with specificity, selectivity, accuracy and precision. And it is suggested that scopolin, scopoletin, neochlorogenic acid, 3,4-di-O-caffeoylquinic acid were more than 0.162%, 0.133%, 0.057%, 0.044%, respectively. In addition, principal component analysis (PCA) was performed on the analytical data of 20 different Erycibae caulis samples in order to classify samples collected from different regions. We hope that this assay can be readily utilized as quality control method for Erycibae caulis.

다공성 표면에서 현출된 지문의 정량적인 평가방법 개발을 위한 농도계 이미지 분석을 이용한 선행연구 및 응용 (A preliminary study and its application for the development of the quantitative evaluation method of developed fingerprints on porous surfaces using densitometric image analysis)

  • 조재현;김효원;김민선;최성운
    • 분석과학
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    • 제29권3호
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    • pp.142-153
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    • 2016
  • 범죄수사에서 지문인식은 개인 식별을 위한 가장 중요한 기술 중 하나이다. 그러나 다양한 방법으로 각각 현출된 지문을 비교하는 객관적이고 공정한 평가 방법은 존재하지 않는다. 따라서 객관적이고 정량적인 방법의 개발을 위하여 농도계 이미지 분석(densitometric image analysis) 프로그램(CP Atlas 2.0)과 Automated Fingerprint Identification System (AFIS)을 이용하여 다공성 표면에서 현출된 지문을 비교, 평가하였다. 먼저 시료지문 채취 상 최적의 압력과 유류시간 조건을 찾기 위하여 두 가지 조건을 변화시켜 날인을 한 비교적 균일한 품질을 가진 잉크지문(Inked fingerprint)을 분석하였다. AFIS 분석을 통해 얻은 특징점(minutia)수와 이미지 분석을 통해 얻은 융선 peaks의 면적 결과를 계산하여 비교한 결과 1.0 kg.f 의 압력으로 5초(sec.) 동안 유류 한 잉크지문이 육안 상 가장 선명한 융선을 보였으며 가장 많은 수의 특징점 수, 가장 넓은 융선의 peaks 면적을 갖는 것을 확인 할 수 있었다. 또한, 잠재지문 현출에 응용하기 위하여 감열지에 날인 된 잠재재문을 iodine fuming법으로 현출시켜 분석한 결과 1.0 kg.f/5 sec의 조건에서 특징점 수가 가장 많고 융선의 peaks 면적도 가장 넓게 나오는 것을 확인하였다. 추가적으로 프린트 용지에 날인한 잠재지문을 0.5 %와 5 %의 ninhydrin용액으로 현출하여 비교한 결과 2.0 kg.f/5 sec의 조건으로 날인하여 5 %의 ninhydrin용액으로 현출하였을 때 가장 좋은 결과를 갖는 것을 확인하였다. 전반적으로 이미지분석을 통하여 얻은 peaks의 평균면적이 클수록 AFIS를 통해 확인되는 특징점수가 많아진다는 것이 확인되었으며 농도계 이미지 분석을 이용한 지문 평가의 추가적인 연구를 통해 본 방법은 지문 현출 평가에 대한 객관적이고 정량적인 새로운 시험방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.

RSSI 판독 라이브러리 함수 및 옥내 측위 모듈 구현 (Implementation of a Library Function of Scanning RSSI and Indoor Positioning Modules)

  • 임재걸;정승환;심규박
    • 한국멀티미디어학회논문지
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    • 제10권11호
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    • pp.1483-1495
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    • 2007
  • IEEE 802.11 기술 덕분에 학교와 대형 쇼핑몰을 비롯한 사무실, 병원, 역 등지에서도 무선 LAN을 통한 인터넷 접속이 가능하다. 본 논문은 무선 LAN에 현재 가장 많이 사용되는 2.4GHz 대역의 802.11b와 802.11g 프로토콜이 탑재된 액세스포인트(AP: Access Point)로부터 수신한 신호의 세기(RSSI: Received Signal Strength Indicator)를 판독할 수 있는 C# 라이브러리 함수를 제안한다. 위치기반서비스는 사용자의 현재 위치를 실시간으로 측정하여 현재 위치를 기반으로 길을 안내하거나, 현재 위치와 관련한 콘텐츠를 제공하는 등의 유용한 서비스를 제공한다. 옥내에서 위치기반서비스를 제공하려면 옥내에 있는 사용자의 위치를 판정하는 옥내측위가 반드시 선결되어야 한다. 옥내측위 기술로 적외선, 초음파, UDP 패킷의 신호세기 등을 이용하는 방법들이 소개된 바 있다. 이러한 방법들은 측위를 위한 특수 장비를 설비해야만 한다는 단점이 있다. 본 논문은 RSSI를 판독하는 라이브러리 함수를 제공할 뿐만 아니라 제공하는 함수를 이용한 옥내 측위 구현 예도 소개한다. 구현에 적용된 방법들은 이미 널리 알려진 K-NN(K Nearest Neighbors), 베이시안 방법 그리고 삼각측량법이다. K-NN 방법과 베이시안 방법은 일종의 지문방식인데, 지문방식은 준비단계와 실시간단계로 구성되며, 실시간 단계의 처리 과정은 처리속도가 빨라야만 한다. 본 논문은 실시간 단계의 속도를 개선하는 방법으로 판단나무 방법(Decision Tree Method)을 제안하고, 이러한 방법들의 성능을 실험적으로 평가한 결과를 소개한다.

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신생아 비강에서 분리된 황색포도구균의 병원성 인자와 관련 유전자 (Associated-Genes and Virulence Factors of Staphylococcus aureus Isolated from Nasal Cavity of Neonates)

  • 김영부;문지영;박재홍
    • Clinical and Experimental Pediatrics
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    • 제46권1호
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    • pp.24-32
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    • 2003
  • 목 적 : 황색포도구균(S. aureus)은 건강인의 비강이나 피부에 정상 세균총으로 존재하지만, 병원 내 감염과 항생제 내성이 문제가 되고 있다. 본 연구는 신생아의 비강에서 S. aureus을 분리하여 항생제 감수성의 양상과 내성 관련 유전자를 검출하여 내성의 정도와 내성 관련 유전자의 상관관계를 규명해 보고자 하였으며, 병원성 인자의 검출을 실시하고, arbitrarily-primed polymerase chain reaction(AP-PCR)법에 의한 유전자형별을 통하여 역학적 해석을 시도하였다. 방 법 : 2001년 2월에서 5월 사이에 부산대학교병원 신생아 중환자실 및 신생아실에 입원한 28명을 대상으로 이들의 비강에서 총 120회의 nasal swab을 실시하여 51주의 S. aureus를 분리하였다. 분리균에 대한 항생제 감수성 검사, coagulase 검사과형별, plasmid DNA의 양상, mec 관련 유전자의 분포, 장독소의 유전자 및 TSST-1 독소의 유전자 보유 상태, AP-PCR법으로 유전자 형별을 조사하였다. 결 과 : 1) Methicillin 내성이 23주, vancomycin 내성이 6주였고, 3가지 이상의 약제에 대한 내성이 절반 이상을 차지하였다. 2) 42주가 coagulase 양성이었고, 이중 mecA 및 femA 유전 자를 보유한 12주를 대상으로 한 형별 검사에서 8종(coagulase I-VIII형)으로 분류되었다. 3) mecA 유전자가 22주에서, mecR1 유전자가 18주, mecI 유전자가 1주, femA 유전자가 17주에서 발견되었으며, 이들을 4가지의 유전자형으로 분류하였을 때 mecA형이 14주, mecR1형 10주, mecA-mecR1형 7주, mecA-mecR1-mecI형이 1주였다. mecA 및 mecA 관련 유전자와 항생제 다제내성과는 상관관계가 없었다. 4) 16주가 mecA와 femA를 모두 보유하였으며, 이들의 plasmid 양상은 I형이 7주, II형이 6주 그리고 III형이 2주였다. Oxacillin 및 vancomycin에 내성을 보이는 II형과 III형에서는 35.5kb의 plasmid DNA를 보유하였다. 5) 장독소 A, B, D, 및 E의 유전자는 51주 전부에서 검출되지 않았으나 장독소 C의 유전자는 64.7%, TSST-1 유전자는 80.4%가 양성이었다. 6) Coagulase 양성이며 mecA 및 femA 유전자를 보유한 MRSA 12균주에 대한 유전자 형별 검사에서 I형에서 X형으로 분류할 수 있었으며, II형 2주, X형 2주가 동일 유전자형이었고, 나머지는 다른 유전자형이었다. 결 론 : 입원 중인 신생아의 비강 내 S. aureus의 상재률이 아주 높았으며, 이들의 항생제 내성률, 특히 vancomycin의 내성률이 높아 이들에 의한 원내 감염에 대한 특별한 관리가 필요하며, 이들의 병원성 인자 및 관련 유전자에 대한 분석은 원내 감염에 대한 적절한 대책과 효과적인 치료에 많은 도움을 줄 수 있으리라 사료된다.

Rapid and Simultaneous Determination of Ginsenosides Rb1, Rb2, Rc and Re in Korean Red Ginseng Extract by HPLC using Mass/Mass Spectrometry and UV Detection

  • Kwon, Young-Min;Lee, Sung-Dong;Kang, Hyun-Sook;Cho, Mu-Gung;Hong, Soon-Sun;Park, Chae-Kyu;Lee, Jong-Tae;Jeon, Byeong-Seon;Ko, Sung-Ryong;Shon, Hyun-Joo;Choi, Dal-Woong
    • Journal of Ginseng Research
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    • 제32권4호
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    • pp.390-396
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    • 2008
  • For evaluating the quality of ginseng, simple and fast analysis methods are needed to determine the ginsenoside content of the ginseng products. The aim of this study was therefore to optimize conditions for fast analysis of the ginsenosides, the active ingredients in extracts of Korean red ginseng. When tandem HPLC mass spectrometry (HPLC-MS/MS) was used, four forms of ginsenoside, Rb1, Rb2, Rc, and Re, were readily separated in seven minutes using a gradient mobile phase (acetonitrile and water containing acetic acid). This is the shortest separation time reported among the studies of major ginsenoside analysis. When gradient HPLC with UV detection was used, the detection limit was high, but separation of these four ginsenosides required 25 minutes using acetonitrile and water containing formic acid as a mobile phase. HPLC-MS/MS was able to separate ginsenoside Rg1 easily regardless of the mobile phase condition, but the HPLC-UV could not separate Rg1 because acetonitrile concentration in the mobile phase had to be maintained below 20%. Ginsenoside peaks were clearer and had more sensitive detection limits when Korean red ginseng extract was analyzed by the HPLC-MS/MS, but the UV detection was useful for chromatographic fingerprinting of all four major ginsenosides of the extract: Rb1, Rb2, Rc, and Re. Extracts were found to contain 2.17 mg, 1.51 mg, 1.29 mg, and 0.46 mg of ginsenoside Rb1, Rb2, Rc, Re, respectively, per gram weight. The ratios of each ginsenoside in the extracts were 1.0 : 0.7 : 0.6 : 0.2, respectively. Taken together, the results indicate that HPLC-MS/MS spectrometry could be the most useful method for rapid analysis of even small amounts of major ginsenosides, while HPLC with UV detection could also be used for rapid analysis of major ginsenosides and for quality control of ginseng products.

천연염색 폐수처리시설의 세균 군집 (Bacterial Community of Natural Dye Wastewater Treatment Facility)

  • 황영민;김대국;이지희;백근식;박철;성치남
    • 생명과학회지
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    • 제24권4호
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    • pp.393-402
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    • 2014
  • 천연염색폐수시설 폐수의 세균 군집분석을 위해 배양 가능한 세균을 분리하는 방법과 비배양 방법인 denaturing gradient gel electrophoresis 방법을 이용하였다. 3개의 폐수 공정단계로부터 분리된 104개(폐수유입수, 48균주; 접촉포기조, 25균주; 침전조, 31균주) 균주들의 16S rRNA 유전자의 염기서열을 분석하였다. 104개의 분리균들은 Proteobacteria 문이 가장 많은 비율을 차지 하였으며, Actinobacteria, Firmicutes 와 Bacteriodetes 등 4개 문에 속했다. DGGE profile중 각 시료의 우점 군집을 대표하는17개의 band를 선택하여 부분 염기서열 분석 결과 분리균과 동일한 4개의 문에 속했다. 배양기법을 이용한 결과와 배양하지 않고 분석하는 방법인 DGGE결과 모두 Proteobacteria 문이 우점하였으며 Alphaproteabacteria강이 높은 비율을 차지하였다. 천연염색 폐수처리시설의 세균 군집들은 인간을 비롯한 동식물의 기생균, 다당류와 난분해성 화합물을 분해하는 세균 그리고 세포외 다당을 형성하는 세균들이 우점하고 있음을 알 수 있었다.