Fed-batch culture was designed to increase cell concentration and astaxanthin content by mutant AJ-6 of Phaffia rhodozyma. Fed-batch culture was performed in the continuous feeding with manual adjustment of flow rate to control glucose concentration. When the final glucose concentration was 100 g/L, the cell and astaxanthin were 38.3 g/L, 34.8 mg/L, respectively. Addition of ethanol(10 g/L), when glucose was depleted, the cell and astaxanthin concentration were 37.2 g/L and 45.6, respectively, 5 g/L of acetic acid supplied, 40.6 g/L, 43.9 mg/L were obtained. Ethanol and acetic acid enhanced the astaxanthin content act as precursor of carotenoid synthesis.
The influence of glucose concentration on cell growth rate and on the expression level of the strong promoter obtained from alkali-tolerant Bacillus sp. YA-14 chromosomal DNA was studied. In fed-batch culture, the promoter activity could be maximized by maintaining a very low level of glucose concentration in the broth and glucose consumption rate below 1.08g/g cell-h. The induction of the promoter was possible by addition of sporulation medium after the cell was grown in growth medium with only low level of CAT activity.
The production of vinegar containing high acetic acid concentration was carried in a single stage fed-batch culture. The initial and residual ethanol concentration were 50.0g/l and 5.0g/l, respectively, and the ethanol concentration was maintained from 5.0g/l to 10.0g/l during fedbatch culture. The fermentation temperature was decreased by 1C for every increase of 2.0% in acidity. The maximum productivity was 2.53g/l-hr and the acidity was 16.08% after 40 hours of acetic acid fermentation.
Guggulsterone, a hypolipidemic natural agent, is produced in resin canals of the plant Commiphora wightii. In this study, the stimulatory effects of growth retardants [ALAR (N,N-dimethylaminosuccinamic acid) and CCC (chlormequat chloride)] and fungal elicitor on guggulsterone accumulation in cell cultures of C. wightii are reported. CCC at $1\;mg\;l^{-1}$ enhanced guggulsterone content (${\sim}123\;{\mu}g\;l^{-1})$ when added on the fifth day after inoculation, while ALAR at $2.5\;{\mu}g\;l^{-1}$ increased guggulsterone content (${\sim}116\;{\mu}g\;l^{-1}$) when added on the tenth day. In a two-stage fed-batch process, combined treatment with fungal elicitor and growth retardant caused a significant increase (${\sim}353\;{\mu}g\;l^{-1}$) in guggulsterone content in cell cultures after 17 days of growth. This represents an approximately fivefold increase over the guggulsterone contents in initial cultures of this plant.
The optimization of fed-batch yeast fermentation process has been performed using genetic algorithm(GA). Three strategies were designed and applied to obtain the optimal feed rate profiles. Genes in the chromosome (input variables for optimization) included feed rates on fixed time intervals (strategy I), or swiching times $t_s1\;and\;t_s2$, and feed rates on singular arc (strategy II), or feed rates and the length of time interval (strategy III). Strategy III showed the best results for all initial conditions due to efficient utilization of genetic information. Simulation results using GA showed similar or better performance compared with previous results by variational caculus and singular control approach.
The artificial gene coding for anticoagulant hirudin was placed under the control of the GAL 10 promoter and expressed in the galactokinase-deficient strain (Δgal1) of Saccharomyces cerevisiae, which uses galactose only as a gratuitous inducer in order to avoid its consumption. For efficient production of recombinant hirudin, a carbon source other than galactose should be provided in the medium to support growth of the Δgal1 strain. Here we demonstrate the successful use of glucose in the fed-batch fermentation of the Δgal1 strain to achieve efficient production of recombinant hirudin, with a yield of up to 400 mg hirudin/L.
Methylobacillus sp. SK1, an obligate methylotroph, was cultivated in a fed-batch culture using DO as a methanol feeding indicator with a micro computer-aided control system. While 2.07g/l of cell density was obtained after 13 hr in the batch culture (initial methanol concentration: 1.0%(v/v)),45.3g/l of cell density was obtained after 17 hr by feeding methanol and metal ions in the fed-batch culture with oxygen supply. The high-density biomass was obtained in short cultuivation time by fed-batch culture with feedback control, and consequently the biomass productivity was significantly increased. It was mainly due to extension of logarithmic growth period by methanol feeding without methanol inhibition and intensive aeration without DO limitation with microcomputer-aided control system.
A plasminogen kringle domain 1 to 3, rKl-3, was expressed in Escherichia coli under the control of T7 promoter. For the cost-effective production of rKl-3, the induction process was analyzed and optimized. Induction characteristics with lactose were analyzed in terms of induction time and inducer concentration in various culture conditions including batch and high-cell-density fed-batch cultures. In the fed-batch culture, the induction around 6 h after initiation of the DO-stat fed-batch culture resulted in the highest expression level of rKI-3 among the induction points examined. The highest demand of oxygen at this point was crucial for the maximum expression level of rKI-3. As the lactose concentration increased, the expression level also increased, though the expression level showed a plateau above a concentration of 14 mM of lactose. Lactose acted less specifically than IPTG since most of it was hydrolyzed to glucose and galactose. However, using lactose, the cell growth and the maximum expression level of rKl-3 increased by 20% and 24%, respectively, compared with those using IPTG in the fed-batch culture. The lactose seemed to be hydrolyzed by intracellular and extracellular $\beta$-galactosidase liberated by cell lysis at the same time. Residual concentration of glucose was maintained to a a limit of detection by high performance liquid chromatography, and galactose was not consumed by the host strain Escherichia coli BL2l(DE3).
The influences of impeller types on morphology and protein expression were investigated in a submerged culture of Aspergillus oryzae. The impeller types strongly affected mycelial morphology and protein production in batch and fed-batch fermentations. Cells that were cultured by propeller agitation grew in the form of a pellet, whereas cells that were cultured by turbine agitation grew in a freely dispersed-hyphal manner and in a clumped form. Pellet-grown cells showed high levels of protein production for both the intracellularly heterologous protein (${\beta}$-glucuronidase) and the extracellularly homologous protein (${\alpha}$-amylase). The feeding mode of the carbon source also influenced the morphological distribution and protein expression in fed-batch fermentation of A. oryzae. Pulsed-feeding mainly showed high protein expression and homogeneous distribution of pellet whereas continuous feeding resulted in less protein expression and heterogeneous distribution with pellet and dispersed-hyphae. The pellet growth with propeller agitation paralleling with the pulsed-feeding of carbon source showed a high level of protein production in the submerged fed-batch fermentation of recombinant A. oryzae.
The optimum conditions for the production of tryptophan using a recombinant Klebsiella pnuemoniae phe A tyr A trp R/pSC 101-$trp^{+}$ and its plasmid stability during tryptophan production were studied. The optimum temperature was $37^{\circ}C$ and the specific growth rate was 1.05$h^{-1}$ at $37^{\circ}C$. Tryptophan production was increased by glucose fed-batch culture, and tryptophan was accumulated to 0.175 g/l after 36 hrs. This amount was about 1.2 and 1.6 times greater than that obtained from batch culture and flask culture, respectively. The stability of the strain in fed-batch cu1ture was greatly different from that in repeated flask culture. After 6 generation, 95% of total cells was stable in repeated flash culture, but in fed-batch culture only 50% was stable.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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