A laboratory jar fermenter was modified to measure the duration for cooling water supply and the temperatures of the coolant at the inlet and outlet of water jacket. Successful operation of temperature control and on-line measurement was achieved by adjusting optimum parameters of the Proportion-Integral-Derivative temperature controller. The variables measured on-line were used to estimate cooling rates from empirical equations comprised of the time period of cooling water supply and the temperatures of coolant. The measured cooling rate showed a good correlation to the specific growth rate during batch cultivation of E. coli. Cooling rate was measured and applied to programmed cell growth in a fed-batch cultivations. Three fed-batch cultivations were demonstrated by feeding substrate to follow the programmed cooling rates increasing exponentially.
A kinetic model incorporating cell morphology in cephalosporin C biosynthesis by Cephalosporium amemoniurn was developed. The double-substrate Double-substrate kinetic model was used to describe cell growth. Methionine controlled the rate of growth while glucose ultimately controlled the extent of growth. The changes in specific product formation rate were associated with morphologenesis, especially cell differentiation. To increase the productivity of cephalosporin C, the proposed model equations were applied to a fed-batch culture. The algorithm to optimize the fed-batch culture consists of two steps; cell growth was maximized in the growth phase and then cephalosporin C production was maximized in the production phase. The increase of about 33% in the cephalosporin C titre was obtained by the optimal feeding scheduling in comparison with that of batch culture.
$1.85\times 10^{-10}$ (mmole/cell/h) of specific glucose consumption rate was obtained under fed-batch cultivation of recombinant mamalian ce11s with maintaining $4.7\times 10^{-7}(\mu g/ceil/h)$ of average specific erythropoeitin production rate. Higher maximum cell density was also achieved than for both cases of batch and perfusion cultivations. It proves that glutamolysis dominates metaboiic pathways at latter period of cultivation where quasi steady state was maintained. Substrate limitation of glucose concentration was estimated as 13 (mmole/l) under fed-batch conditions. while specific product production rate was decreased according to cultivation time, erythropoeitin production was increased as glucose concentration in the media increased up to 13.2 (mole/l).
The gene encoding yeast pro-carboxypeptidase Y (pro-CPY) has been cloned and expressed in Escherichia coli. Most of the expressed pro-CPY was accumulated as cytoplasmic insoluble aggregates. In our previous study, active CPY was obtained by renaturation of entirely denatured pro-CPY followed by in vitro proteolytic processing with proteinase K along with the activation process. The same refolding process was performed to produce an active CPY from pro-CPY inclusion bodies with renaturation buffers containing proteinase K at different concentrations. The refolding efficiency decreased from $25\%\;to\;2\%$ in the renaturation buffers containing proteinase K at concentrations of $60{\mu}g/ml\;and\;0.6{\mu}g/mi$, respectively. In an attempt to increase the refolding efficiency with a lesser amount of proteinase K, a novel fed-batch refolding process was developed. In a fed-batch refolding, 99 ml of the renaturation buffer containing pro-CPY was gradually added into 1 ml of the renaturation buffer containing $60{\mu}g/ml$ of proteinase K to give a final proteinase K concentration of $0.6{\mu}g/ml$. The fed-batch refolding process resulted in a refolding efficiency of $18\%$, which corresponded to a 9-fold increase over that ($2\%$) in the batch process.
KIM, SU-JIN;GEUN-JOONG KIM;DON-HEE PARK;YEON-WOO RYU
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.13
no.2
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pp.175-181
/
2003
The production of a carotenoid astaxanthin, a growth-associated principal pigment, is limited in a batch cultivation, because a high glucose concentration severely inhibits the cell growth and also influences the carotenoid production. Therefore, a fermentation strategy including effective chemicals for the high-level production of cells and astaxanthin by a mutant strain Phaffia rhodozyma AJ-6-1 was developed in a fed-batch culture. First, a production medium for maximizing the cell and astaxanthin yields was formulated and optimized. Using this optimized medium, the highest cell and astaxanthin concentrations obtained were about 38.25 g/1 and 34.77 mg/1, respectively. In addition, an attempt was made to increase the amount of astaxanthin using effective chemicals such as ethanol and acetic acid, which are known at an inducer and/or precursor of carotenoid synthesis. When either 10g/1 ethanol or 5 g/1 acetic acid was added to investigate the resulting astaxanthin content, a relatively high astaxanthin concentration or 45.62 mg/l and 43.87 mg/1, respectively, was obtained, and the cell concentrations also increased slightly under these conditions. Therefore, these results imply that a fed-batch culture of the mutant strain P. rhodozyma AJ-6-1 could be effectively employed in the commercial production of astaxanthin, although the factors affecting the productivity remain to be elucidated.
Production of poly-$\beta$-hydroxybutyrate (PHB) in fed-batch fermentation was studied. Utilization of carbon for PHB biosynthesis was investigated by using feeding solutions with different ratios of carbon to nitrogen (C/N). It was observed that at a high C/N ratio carbon source was more preferably utilized for PHB accumulation while its consumption for cellular metabolism appeared to be more favored at a low C/N value. A high cell concentration (184 g/l) was achieved when ammonium hydroxide solution was fed to control the pH, which was also utilized as the sole nitrogen source. For the mass production of PHB, two-stage fed-batch operations were carried out where PHB accumulation was observed to be stimulated by switching the ammonium feeding mode to the nitrogen limiting condition. A large amount of PHB (108 g/l) was obtained with cellular content of 80% within 50 hrs of operation.
Characteristics of ${\beta}$-agarase production of Agarivorans sp, JA-1 isolated from north-eastern sea of Jeju marine environment was studied. Optimal cell growth was definite that the medium containing agar is 0.2%. The decreasing pattern of viscosity and agar concentration was same and they reached almost zero after 15 hours. Fed-batch culture was studied to improve agarase productivity by Agarivorans sp. JA-1 in marine broth containing 2.0 g/L agar with intermittent addition of 0.8 g agar two times. The hydrolysis products were identified oligosaccharide of degrees of polymerization 6.
A study was carried out to select a nitrogen source and the optimize the C/N ratio for the maximum cell growth of Phaffia rhodozyma in fed-batch culture. The yeast extract was the best organic nitrogen source. In the batch culture experiments, the highest cell yield was obtained 0.575 g-cell/g-glucose from 10 g/L and 10 g/L yeast extract. In the fed-batch experiments, the maximum cell concentration was obtained 33.1 g/L from the C/N ratio of 2:1 while the astaxanthin concentration of cell was Increased by increasing the C/N ratio, of feed medium.
In order to obtain high density seed cells for biofiltration, we studied batch and fed-batch culture of P. putida. Studies were carried out to find optimum fermentation conditions such as pH, concentration of glucose and agitation speed. Specific growth rate of P. putida was dependent on agitation speed and a high rpm of 300 was necessary to carry out the efficient aerobic growth of P. putida. Specific growth rate was highest at pH 7. Feeding glucose and yeast extract continuously at the initial growth phase was the most effective way to get high cell density of P. putida.
Zoogloea ramigera 115 was selected for the production of viscous microbial polysaccharide for bioflocculants usage. Batch, fed-batch, and continuous culture processes were examined with regard to the high biopolymer production. Several carbon sources were tested, including glucose, lactose, molasses, and cheese whey. The C/N ratio of 90 was most effective for biopolymer production from glucose, while the C/N ratios of 30 for lactose and 60 for both molasses and cheese whey substrate gave a maximum production. Fed batch culture proved more effective to increase final biopolymer concentration than batch culture. Continuous fermentation with two stages modifying C/N ratio increased the productivity. The production rates were a maximum at dilution rate of 0.048 $hr^{-1}$ for molasses and at 0.096 $hr^{-1}$for cheese whey.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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