A unique biophysical membrane which surrounds the milk fat globules is called the milk fat globule membrane (MFGM). Various researches were studied about origin, composition, structure and bioactive components of MFGM. Bioactive protein components of MFGM play an important beneficiary function such as defense mechanism in new born. Among the bioactive lipid components from MFGM phospholipids showed health enhancing functions. The phospholipids also help in the production of certain dairy product from deterioration. MFGM phospholipids also showed antioxidant activity in some dairy products such as butter and ghee produced from milk of buffalo. Based on the beneficial effects, researchers developed MFGM as functional ingredients in various food products. This current review focuses on health enhancing function of MFGM and its components in various dairy products.
우유 지방구막의 고밀도 표피에 결합된 지질의 조성을 분석하기 위하여 지방구막의 고밀도 표피부분을 여러 농도의 비이온성 세제 Triton X-100으로 처리하였고 세제에 용해되지 않는 물질, 즉 지방과 결합된 성분을 분석하였다. 유지방구막의 단백질, 인지질, 콜레스테롤과 ganglioside의 양은 Triton X-100의 농도가 증가함에 따라 감소하였다. 불용성 표피물질로서 butyrophilin(band 12), xanthine oxidase (band 3)와 band 16이 SDS-polyacrylamide gel을 이용한 전기영동에서 나타났다. Phosphatidyl ethanolamine, phosphatidyl choline, phosphatidyl serine, phosphatidyl inositol 및 spingomyeline 함량은 처리되지 않은 원래의 막의 것과 큰 차이가 있어 표피물질의 주요 인지질로 규명되었다. 전체 지질에서 지방산은 myristate, palmitate, stearate(주요 포화지방산), oleate, linoleate(주요 불포화지방산)이었다. 단백질에 결합된 콜레스테롤은 다른 성분에서보다 단백질에 더 견고하게 부착되어 있었다. Ganglioside의 함량은 Triton X-100의 농도가 증가함에 따라 비례 감소하였다.
We here analyzed and proposed the structures of the N-linked sugar chains of PAS-7 from bovine milk fat globule membrane. The N-linked sugar chains were liberated from PAS-7 by hydrazinolysis and, after modifying the reducing ends with 2-aminopyridine (PA), were separated into one neutral (7N,55%) and two acidic (7M mono-, 43%; 7D, di-, 2%) sugar chain roups. The latter were converted into neutral groups (7MN and 7DN) by sialidase digestion. The structure of each of these PA-neutral sugar chains was determined by sugar analysis, sequential exoglycosidase digestion, partial acetolysis, and 1H-NMR spectroscopy. The results show that the 10 sugar chains were of the biantennary complex type with and without fucose. The structure of 7N2A one of the major sugar chains, was proposed as; [structure: see text] A structural comparison between PAS-6 and -7 indicated that although they shared the same protein core, their sugar moiety was markedly different, involving the existence of a different pathway during the post-transcriptional modification.
Lactadherin은 모유의 유지방구막의 당단백질의 하나로 mucin, butyrophilin과 결합된 복합체이다. 특히 모유중의 mucin과 lactadherin은 출생 직후 면역력이 약한 유아를 병균의 침입으로부터 효율적으로 방어하여 초기 유아의 생존과 성장 및 발달에 매우 중요한 역할을 수행한다. Lactadherin은 유아 설사의 원인이 되는 rotavirus의 번식과 성장을 억제한다. 아울러 이 단백질은 새로운 혈관의 형성을 촉진하는 주요한 단백질로 알려져 있으며, 이 단백질의 결핍이 치매의 발생과 관련되는 것으로 보고되고 있다. 본 연구는 이처럼 중요성이 강조되는 lactadherin에 대한 생화학적 및 생리학적인 연구를 하기 위한 기초연구를 진행하였다. 한국 여성의 유선조직에서 mRNA를 분리하였고, 1.2 kb lactadherin cDNA 유전자를 cloning하여 염기서열과 아미노산 배열을 결정하였다. 이 cDNA를 pET vector에 삽입하여 E. coli에서 43 kD 단백질을 발현시켰으며 Western blot으로 확인하였으며, 이 단백질을 정제하여 토끼에서 항체를 생산하여, 한국 여성의 모유에서 발현되는 70, 55, 46, 30 kD의 band를 확인하였다. 아울러 백인 여성의 lactadherin 유전자와 한국 여성의 정상 및 유방암 조직의 유전자 비교에서 다양한 SNP가 관찰되었고 변이의 다형성이 관찰되었다.
Milk fat globule membrane (MFGM) is a lipid carrier in mammals including humans that consists mainly of polar lipids, like phospholipids and glycolipids. In this study, a process to enrich polar lipids in commercial butter and whey powder, including polar lipids of MFGM, was developed. WPC (whey protein concentrate) 60 was selected as the most suitable raw material based on the yield, phospholipid, protein, and lactose content of the polar lipid fraction obtained by ethanol extraction of two WPC (WPC60 and WPC70) and two buttermilk (A and B). After fractionation under optimum conditions, the polar-lipid enriched fraction from WPC60 contained 38.56% phospholipids. The content of glycolipids, cerebroside, lactosylceramide, ganglioside GM3, ganglioside GD3, was 0.97%, 0.55%, 0.09%, and 0.14%, respectively. Rancimat results showed that the oxidation stability of fish oil increased with an increase in the polar-lipid fraction by more than 30 times. In addition, the secretion of IL-6 and TNF-α decreased in a concentration-dependent manner after treatment of RAW 264.7 cells with 0.1 to 100 ppm of the polar lipid fraction. In this study, polar lipid concentrates with antioxidant and anti-inflammatory activity, were prepared from milk processing by-products. The MFGM polar lipid concentrates made from by-products are not only additives for infants, but are also likely to be used as antioxidants in cooking oils and as active ingredients for functional foods.
MFGM 당단백질의 하나인 PAS-7을 GPC 및 affinity chromatography에 의해 정제하여 2-AB로 형광 표식한 후, anion-exchange column 및 reversed-phase column을 이용해 5개의 성분을 분리하였다. 그 중 가장 상대량이 많은 성분 e에 대하여 RAAM2000을 이용한 당쇄구조 해석을 실시하여, 성분 e는 RAAM2000 GPC에 의하여 4개의 성분으로 분리되어 각각 calibration standard 12.10, 8.88, 5.84 및 4.86GU의 용출위치에 검출되었다. 이 용출위치와 당쇄구조는 livrary의 component-7457과 일치하며, 12.2GU의 크기로 분자량은 1788로 판단되며 library의 당쇄와 약 85%의 확률로 일치했다. 그 결과 성분 e의 당쇄구조는 환원말단에 $\alpha$1-6결합된 fucose를 1개 함유하며, core부분의 비환원말단에 N-acetyllactosamine branch를 2개 함유한 전형적인 biantennary 당쇄구조인 것으로 추축되어, 이전 HPLC, acetolysis, sequential exoglycosidase 소화, NMR분석에 의해 보고된 성분 7N1A의 구조와 일치함으로써, OGS RAAM2000을 이용한 PAS-7의 당쇄구조 해석의 유용성이 증명되었다.
Lactadherin (formerly known as BA46), a major glycoprotein of the human milk fat globule membrane, is abundant in human breast milk and breast carcinomas and may prevent symptomatic rotavirus infections. In this study, under the control of mouse whey acidic protein (WAP) promoter, the expression pattern of lactadherin (Ltd) in lactogenic hormone-dependent mouse mammary epithelial cell line HC11 were tested. pLNWLtd construct containing 2.4 kilobases of the WAP promoter and 1.5 kilobases of human lactadherin gene was stably transfered into HC11 cells using retroviral vector system. Integration and expression level of the transgene was estimated using PCR and RT-PCR, respectively. Prominent induction of Ltd gene under the WAS promoter was accomplished in the presence of insulin, hydrocortisone and prolactin, while induction with insulin alone resulted in lower expression. Our results demonstrate that the expression of the transgene is increased by synergistic effect of several lactogenic hormones, including insulin, hydrocortisone, and prolactin.
본 연구는 VSV-G glycoprotein을 envelope으로 하는 pseudotyped retrovirus vector system을 이용하여 쥐의 유방상피세포인 HC11에서 human Lactadherin 유전자의 발현을 확인하고자 하였다. 실험에 사용한 vector는 개체내에서의 외래 유전자의 지속적인 발현에 의한 생리적인 부작용을 최소화하기 위한 구조로, 조직특이적이며 lactogenic hormone에 의해 유도적인 활성을 가지는 것으로 알려진 WAP promoter의 통제하에 도입하고자 하는 외래 유전자를 위치하도록 하였다. WAP promoter의 대조군으로 지속적인 활성을 나타내는 $\beta$-actin promoter를 사용하였으며, 이 각각의 promoter와 marker gene으로 E. coli LacZ gene을 재조합한 후 retrovirus vector system을 이용하여 HCll에 도입하였다. 세포의 genome 내로의 유전자의 전이는 PCR을 통해 확인하였고, RT-PCR의 수행으로 유전자의 발현을 확인하였다. Lactadherin 유전자를 이용한 실험도 동일한 과정으로 수행하였으며, RT-PCR의 결과에서 HCll 세포에서 Lactadherin 유전자의 발현이 insulin을 단독으로 처리한 군에 비해 insulin, hydrocortisone, prolactin을 동시에 처리한 군에서 우월하게 나타나는 것으로 확인되었다. 그러나 insulin 단독 처리군에서 유전자의 발현이 약하게 나타나는 것으로 관찰되어 WAP promoter의 leakiness에 대한 재고의 필요성이 요구되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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