This study was carried out to establish an effective embryo production system by analyzing several factors ifluencing in vivo embryo production in Hanwoo. The results are summarized as follows : 1. The number of total, fertilized and transferble embryos by gonadotropins were no significant difference among PMSG, FSH and FSH+PMSH. 2. The numbers of recovered and transferable embryos by type of FSH were no significant difference in both FSH-P and FOLLTROPIN-V but significant difference with SUPER-OV(p<0.01). 3. The numbers of recovered and transferable embryos by age of donor were highest in 5 years old. 4. The recovered number of transferable embryos was highest in the cows at the 1 st and 3rd parity but significantly lower in hifers and the cows at more than 6th parities(p<0.01). 5. The numbers of trasferable embryos by postparient were more<270 days than > 270 days in significant difference(p<0.01). 6. Embryo production after treatment of repeated super ovulation was no significant difference. 7. Recovered and trasferable embryos production after treatment of repeated super ovulation interval was highest 81∼100 days and significant difference(p<0.01). 8. The numbers of recovered and transferable embryos by seasons were no significant difference.
FSH는 미성숙 설치류의 난포성장을 촉진하며, 강소형성 난포의 퇴화비율을 감소시킨다. 본 연구는 미성숙 생쥐에 난포성숙호르몬을 투여한 후 유발되는 난포의 조직학적인 변화를 규명하기 위해 시행되었다. 3주령의 ICR생쥐에 10 i.u.의 재조합 난포자극호르몬을 복강주사한 후 1일, 2일, 3일에 좌측 난소의 조직학적 변화를 관찰하였다. 강소형성전 난포의경우 FSH처리 후 시간에 따라 퇴화난포의 비율이 증가하였으나 강소형성 난포의 경우에는 유의한 변화를 보이지 않았다. 퇴화되는 양상은 난포 내 세포자연사하는 과립세포의 증가, 대식세포 및 다형다핵백혈구의 증가 등이 관찰되었다. 이상의 결과로 보아, 과량의 FSH처리 후에 유발되는 난포의 퇴화는 과립세포의 세포자연사뿐 아니라 급성 염증반응을 수반하는 것으로 생각된다.
Golestanpour, Hossein;Javadi, Gholamreza;Sheikhha, Mohammad Hasan
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제47권3호
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pp.207-212
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2020
Objective: Glutamate ionotropic receptor AMPA type subunit 1 (GRIA1) is a subunit of a ligand-gated ion channel that regulates the secretion of follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) by controlling the release of gonadotropin-releasing hormone. Few studies have investigated the association between the GRIA1 gene and human infertility. This study evaluated the association of the GRIA1 rs548294 C > T and rs2195450 G > A polymorphisms with the ovarian response to human menopausal gonadotropin (HMG) in Iranian women. Methods: One hundred women with histories of at least 1 year of infertility were included. On the second day of menstruation, patients were injected with HMG; on the third day, blood samples were collected. After hormonal analysis, the GRIA1 rs548294 C > T and rs2195450 G > A genotypes of samples were identified via the restriction fragment length polymorphism method, and on day 9, the number of follicles was assessed via ultrasound. Results: For the GRIA1 rs548294 C > T and rs2195450 G > A single nucleotide polymorphisms, the subjects with CT and GG genotypes, respectively, displayed the highest mean FSH level, LH level, and number of follicles on day 9 of the menstrual cycle (p< 0.05). Significant positive correlations were observed between LH and FSH (p< 0.01), LH and follicle count (p< 0.01), FSH and age (p< 0.05), follicle count and age (p= 0.048), and FSH and follicle count (p< 0.01). Conclusion: This study showed a significant relationship between GRIA1 polymorphisms and ovarian response to the induction of ovulation. Therefore, determining patients' GRIA1 genotype may be useful for improving treatment and prescribing suitable doses of ovulation-stimulating drugs.
To determine whether hormone analysis of amniotic fluid could be used for accurate determination of fetal sex, we measured testosterone(T) and follicle-stimulating hormone in 19 amniotic fluid samples. The mean T in amniotic fluid of 8 women earring male fetuses was 310 pg. per milliliter and of 11 women earring female fetuses was 150 pg. per milliliter (P<0.05${\ast}$). The mean amniotic fluid FSH of 1.16 mI.U. per milliliter for 7 women with male fetuses was over trifold lower than that for subjects with female fetuses. The mean amniotic fluid FSH of female fetuses was 3.85 mI.U. per milliliter (P<0.01${\ast}$) Measurement of T & FSH in amniotic fluid may be an adjunct method for fetal sex determination.
Follicle-stimulating hormone (FSH) is a pituitary glycoprotein hormone that is encoded by separate alpha- and betasubunit genes. It plays a key role in stimulating and regulating ovarian follicular development and egg production in chicken. FSH signal transduction is mediated by the FSH receptor (FSHR) that exclusively interacts with the beta-subunit of FSH, but characterization of prokaryotic expression of the FSHb gene and its effect on the expression of the FSHR gene in local chickens have received very little attention. In the current study, the cDNA fragment of the FSHb gene from Dagu chicken was amplified using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), and inserted into the pET-28a (+) vector to construct the pET-28a-FSHb plasmid. After expression of the plasmid in E. coli BL21 (DE3) under inducing conditions, the recombination protein, $FSH{\beta}$ subunit, was purified and injected into the experimental hens and the effect on the mRNA expression levels of the FSHR gene was investigated. Sequence comparison showed that the coding region of the FSHb gene in the local chicken shared 99%-100% homology to published nucleotides in chickens; only one synonymous nucleotide substitution was detected in the region. The encoded amino acids were completely identical with the reported sequence, which confirmed that the sequences of the chicken FSHb gene and the peptides of the $FSH{\beta}$ subunit are highly conserved. This may be due to the critical role of the normal function of the FSHb gene in hormonal specificity and regulation of reproduction. The results of gene expression revealed that a recombinant protein with a molecular weight of about 19 kDa was efficiently expressed and it was identified by Western blotting analysis. After administration of the purified $FSH{\beta}$ protein, significantly higher expression levels were demonstrated in uterus, ovary and oviduct samples (p<0.05). These observations suggested that the expressed $FSH{\beta}$ protein possesses biological activity, and has a potential role in regulation of reproductive physiology in chickens.
GnRH는 국부적으로 난소에서 합성되며, 난소내 과립 및 황체세포에 직접적으로 작용하여 난소의 기능을 조절하는 것으로 알려져 있으며, 특히, GnRH는 난소내 과립-황체화 세포의 세포자연사를 유도하는 것으로 보고하고 있다. 그러나 GnRH에 의한 세포자연사가 FSH에 의해 회복될 수 있는지는 명확히 밝혀져 있지 않다. 따라서 본 실험에서 난자 채취시 획득한 사람 과립-황체화 세포를 배양한 후 5, 50, 100 ng/$m\ell$ GnRH와 1 IU/$m\ell$ FSH를 처리하고 세포의 세포자연사 여부와 분비된 progesterone$(P_4)$과 estradiol$(E_2)$ 양의 변화를 조사하였다. DNA 분절화 분석과 TUNEL 방법으로 세포자연사를 평가한 결과, GnRH는 농도 의존적으로 과립-황체화 세포의 세포자연사를 증가시켰고, 특히 100 ng/$m\ell$ GnRH을 처리한 군에서 유의한 차이를 보이며 세포자연사 비율이 증가하였다. 또한 GnRH에 의한 세포자연사의 증가는 FSH에 의해 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 화학발광면역 측정법을 이용하여 배양내 $P_4$와 $E_2$의 양을 측정한 결과, GnRH을 처리한 후 $E_2$의 양은 변화가 없었던 반면 $P_4$의 양은 감소하였다. 이러한 GnRH의 $P_4$ 합성 억제 효과는 세포자연사 결과 마찬가지로 FSH에 의해 회복되는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과는 체외수정 및 배아이식 시술시 사용되고 있는 GnRH 작용제가 난소의 기능을 억제시킬 수 있을 것으로 보이나, 다량으로 투여되는 FSH에 의해 회복될 수 있음을 보여주고 있다. 이러한 실험 결과는 난소에 대한 GnRH의 생리적 기전을 이해하고 향후 새로운 과배란 유도 방법을 개발하는데 필요한 기초 자료로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
The objective of this study was to investigate the responsiveness of hypophysis and gonads to synthetic GnRH among noncycling Murrah buffalo heifers at 24 months of age. The plasma FSH, LH, estradiol and progesterone levels were measured in blood samples collected at 1 hour before and upto 18th day subsequent to the administration of GnRH ($(200 {\mu}g)$) or saline (2 ml). The pretreatment levels of plasma FSH, LH estradiol and progesterone among GnRH treated heifers (N = 6) were $11.55{\pm}0.57ng/ml$, $0.68{\pm}0.06ng/ml$, $19.84{\pm}0.82pg/ml$ and $0.45{\pm}0.07ng/ml$ respectively. A quick elevation of FSH (p < 0.01) and LH (p < 0.05) within 5 min of GnRH administration was observed in all the heifers. The peak FSH ($74.97{\pm}18.63ng/ml$) and LH ($3.09{\pm}0.54ng/ml$) level was obtained at 30 min of GnRH administration. The elevated level of plasma estradiol on 5th to 18th day, FSH on 7th to 9th day (n = 3) and the progesterone on 13th to 18th day (n = 2) of GnRH injection was obtained. The study indicates that gonads of buffalo heifers at 24 months of age are responsive of GnRH induced gonadotropin release for folliculogenesis and luteal tissue formation
The objective of present study was to investigate the effect of seasons on reproductive performance of Hanwoo and Holstein heifers. Heat stress in summer or cold stress in winter stress to Hanwoo and Holstein heifers may bring reproduction failure, which would pose an important economic loss, even around Daegwallyeong region located in high mountainous area. Seasonal differences in the serum levels of LH, FSH and progesterone ($P_4$) in response to environmental factors (hot and cold) out of 20 pubertal Hanwoo heifers in Daegwallyeong, Gangwon Province and 20 non-lactating Holstein heifers in Chonan city of Republic of Korea at 2-3 years of age were compared. Blood samples for hormonal analysis were from jugular vein after detection of estrus repeatedly over four seasons within four-week intervals (Spring: May to June, Summer: July to August, Autumn: October to November and Winter: January to February). In Hanwoo heifer population, averages of LH and FSH concentration in spring and in summer were greater compared to those in winter (p<0.05). LH or FSH levels tended to be greater (p=0.06) in spring and less (p=0.09) in winter compared to the levels in autumn. Only in summer, cattle seemed to show lower LH or FSH secretion (p<0.05). Similar to the results in Hanwoo heifers, the serum concentrations of LH and FSH in Holstein heifers decreased further by heat stress in summer when P 4 levels were high during luteal phase. The results demonstrate significant effect of summer heat on reproduction of Hanwoo or Holstein heifers. Although parameters indicating the extent of heat stress were not measured in this study, we suggest that serum hormone levels could be considered as successful indicators of summer heat stress condition for Hanwoo and Holstein heifers even under rather cool summer climate.
본 연구는 생쥐 preantral follicle 의 체외성장 및 성숙에 있어서 gonadotrophins 인 FSH 와 LH 의 효과를 조사하기 위하여 실시하였으며, 그 결과는 다음과 같다. 1. FSH 첨가군들은 대조군에 비하여 유의하게 높은 생존율과 성숙율을 나타냈으며, 100$m\ell$D/$m\ell$ 의 FSH 농도가 preantral follicle 의 체외배양에 적정한 농도인 것으로 나타났다. 2. HMG 첨가군은 FSH 첨가군보다, 통계적 유의차는 인정되지 않았지만, 높은 생존율과 성숙율을 나타냈다. 3. FSH 와 LH 의 첨가비율이 100$m\ell$U/$m\ell$ 대 10$m\ell$D/$m\ell$(10:1) 에서 가장 높은 생존율과 성숙율을 나타냈다. 4. FSH 혹은 HMG 첨가시, 정상적인 oestradiol 과 progesterone 분비양상을 나타냈으며, HMG 첨가군에서 유의하게 높은 농도의 oestradiol 과 progesterone 을 분비하였다. 이상의 결과를 종합해 볼 때, gonadotrophins 은 preantral follicle 의 체외성장 및 성숙뿐만 아니라 steroidogenesis 에서 중요한 역할을 수행한다는 것을 확인할 수 있었다.
본 연구의 목적은 요를 통해 hFSH를 발현하는 형질 전환 소의 생산이다. 요의 분비와 관련 있는 유전자로서 mUII promoter를 사용하여 hFSH유전자를 구성했다. 태아섬유아세포(KbFF)는 임신 45일령의 태아(male)에서 채취하였다. hFSH gene은 pcDNA3(neo) vector와 같이 KbFF 세포에 electroporation 방법으로 transfection하였다. 유전자를 transfection한 세포는 G-418로 2주 동안 배양하였고, 선발된 colony는 PCR로 확인하였다. 핵이 제거된 난자는 hFSH가 transfection된 세포와 transfection 되지 않은(control) 세포를 이용하여 핵이식하였다. 48시 간 후 hFSH가 transfection된 세포는 68.7%의 수정란이 난할되었으며, 8일 후 15.7%의 수정란이 배반포로 발달하였다. 그러나 대조구에서는 67.6%가 난할되었으며, 24.5%가 배반포로 각각 발달하였다. 이들 배반포에서 apoptosis 분석 결과 hFSH 유전자가 transfection된 또는 transfection되지 않은 대조구에서 유의적인 차이는 보이지 않았다. 배반포는 53두의 수란우에 이식하여 두 마리의 산자가 생산되었으나(1.9%) hFSH가 transfection되지 않은 것으로 나타났다. 이 결과는 선발된 hFSH colony에서 transfection되지 않은 세포가 혼합되어 있었다는 것을 나타내 주고 있으며, colony의 선발과 검증에 더 많은 연구의 필요성이 있음을 나타내준다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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