• 한국식품과학회지
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• 제20권6호
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• pp.856-861
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• 1988

본 실험은 Staphylococcus aureus의 한 균주로부터 A와 C, 두 종류의 toxin이 동시에 생성될 때 이들의 동시분리를 위하여 각종 분리방법을 연구하였다. 혼합된 toxin A와 C는 CM-column chromatography를 이용하여 pH-gradient법으로 용출했을 때 2개의 분획이 나타났으나 서로 완전히 분리되지 않아 다량의 서로 다른 toxin이 함유되어 있었고 Sephadex G-75, Sephacryl S-300, 그리고 ultro gel을 사용한 gel filtration에서는 하나의 분획을 나타내 상호분리가 불가능 하였으며 정제도와 분리도에서 가장 뛰어난 gel column을 이용한 FPLC도 toxin A와 C를 상호분리할 수 없었다. 그러나 CM-column을 이용한 FPLC에서는 enterotoxin A는 pH 6.8에서 그리고 enterotoxin C는 pH 8.6에서 각각 분리되었으며, immunodiffusion test 결과 enterotoxin A의 분획에서는 toxin C가 전혀 검출되지 않았고 enterotoxin C의 분획에서도 toxin A가 검출되지 않았다. 용출방법에 있어서는 CM-column을 이용한 FPLC에서 pH-stepwise법이나 pH-gradient법으로 enterotoxin A와 C type을 쉽게 동시에 분리할 수 있었다.

• BMB Reports
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• 제28권4호
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• pp.306-310
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• 1995

A Mono Q HR 5/5 anion-exchange column with a FPLC system was used to separate exogenously expressed calmodulin from endogenous tobacco calmodulins. Transgenic tobacco calmodulins were purified by fractionation with ammonium sulfate, precipitation with sulfuric acid and hydrophobic chromatography on phenyl-Sepharose CL-4B. The purified calmodulins were chromatographed in the FPLC using the column. This method was selected because of the slight differences in the net charge of foreign and endogenous plant calmodulins due to amino acid sequence differences. By this approach, the exogenously expressed calmodulin was isolated from endogenous tobacco calmodulins. The isolated calmodulin was characterized by amino acid composition analysis as well as methylation analysis.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제50권4호
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• pp.659-665
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• 2012

동물 혈청 중의 IgG (Immunoglobulin G)에 해당되는 난황에 포함된 면역 단백질 IgY (Immunoglobulin Yolk)는 식품 단백질로 장내 면역 물질로 중요하다. IgY를 정제하기 위해 신선란의 노른자에 카리지난이나 아라빅검을 전처리 물질로 사용하였다. 전처리 후 FPLC (Fast Protein Liquid chromatography)의 DEAE (Diethylaminoethyl) Sepharose 칼럼에서 이온교환법에 의해 불순물을 제거하여 IgY를 얻고, GF HPLC (Gel Filtration High Performance Liquid Chromatography)로 IgY의 분자량을 측정하고 표준 IgY와 비교하여 IgY 단백질을 동정하였다. GF HPLC에서 IgY의 다양성을 발견하였고 IgY 단백질 군의 다양성을 IE HPLC (Ion Exchange High Performance Liquid Chromatography)에서 AX, CX, SCX 칼럼을 사용하여 pH, NaCl 농도를 바꾸어 조사하였다. AX를 사용하여 0.5M NaCl, pH=8 조건에서 3개의 IgY 피크를 분리하였고, SCX를 이용했을 때 0.5M NaCl, pH=5 조건에서도 3개의 IgY 피크를 분리할 수 있었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제41권6호
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• pp.410-413
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• 1998

Gel filtration과 ion exchange chromatography, reversed-phase 및 ion exchange FPLC를 이용하여 고려인삼 뿌리에서 subunit 분자량 약 25 kDa의 주요단백질(이하 GMP)을 분리하였다. PAS 염색을 통하여 GMP는 carbohydrate moiety를 갖는 당단백질일 가능성을 보여주었고, 이는 glycosidase 처리후 protein band shift 실험으로 확인되었다. GMP는 native polyacrylamide 전기영동 및 gel permeation FPLC를 통해 native form은 약 63 kDa의 분자량을 갖는 dimer로 판단된다. GMP의 생리활성 측정결과, inflammation mediator의 기능탐색에 쓰이는 anticomplementary activity를 보여주었다.

• 한국식품과학회지
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• 제20권6호
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• pp.780-786
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• 1988

본 실험은 Staphylococcus aureus로부터 생성되는 enterotoxin A의 분리를 위하여 각종 분리방법을 조사하였고 그 특성들을 상호 비교하였던 바 다음과 같은 결과를 얻었다. Amberlite 수지는 배지로부터 처음 toxin을 분리 하는 데에는 간편한 수지이나 정제도에 있어서는 약 70%수준으로 다른 방법들에 비해 낮은 편이었다. CM-cellu-lose수지는 0.2M phosphate buffer로 용출했을 때 75% 정도의 정제도를 가진 toxin을 분리할 수 있었으나 stepwise법으로 용출했을 때에는 80% 이상으로 정제도를 높일 수 있었고 Amberlite 수지와 함께 사용했을 때에는 90%정도의 toxin을 얻을 수 있었다. Amberlite나 CM-cellulose수지로 정제한 후 gel filtration을 실시하면 정제도를 더 높일 수 있었다. FPLC는 분리도와 정제도에서 가장 우수하였으며 FPLC의 결과에 따라 Amberlite 수지는 toxin 분획을 중심으로 앞의 분획을 그리고 CM-cellulose 수지는 뒤의 분획을 주로 제거 하는 특징을 가진다. 따라서 위의 column중 하나만 사용한 후 FPLC를 사용하면 95%이상의 toxin을 분리하는 것이 가능하였다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제3권2호
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• pp.75-81
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• 1988

본 실험은 Staphylococcus aureus 로부터 생성되는 enterotoxi B 의 분리 및 정제를 위하여 각종 분리방법을 비교 조사하였다. 배지로부터 Entrotoxin B를 추출하는 방법중 Amberlite CG-50 수지가 가장 간편하고 빠른 방법이었고 CM 수지는 Amberlite 수지에 비해 용출력이 떨어졌으며 분리할 수 있는 toxin의 양은 적었으나 정제도에 있어서는 약 75%로 toxin을 분리하는 처음 단계로서는 높은 편이었다. CM column을 Gradient 용출법으로 사용했을 때에는 하나의 column을 사용해 분리한 분리물 중 정제도가 85%로 가장 높았고, 용출 buffer의 농도 폭을 넓히는 것이 정제도를 높이기 위한 바람직한 방법이었다. 이 실험에 사용한 Sephadex G-50 , 75, 100, Sephacryl, Ultro gel 등의 gel filtration 방법 중 Ultro gel 에 의한 분리방법이 정제도에 있어서는 가장 우수했으며, 이온 교환 수지를 먼저 사용한 분리물에서는 모두 90% 이상의 toxin을 얻을수 있었지만, 한번의 분리도 거치지 않은 배지는 분리도와 정제도에서 현저히 떨어졌고, Sephadex G-50 은 gel colunm중 정제도가 가장 낮았다. FPLC는 위의 분리 ·정제 방법중 가장 빠른 방법이며, 적은 양의 시료로도 측정이 가증하였고, 정제도는 95% 이상이었다.

• 한국작물학회지
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• 제42권2호
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• pp.134-140
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• 1997

수도의 내염성 품종 안나프르나에 NaCl 50 mM을 처리하여 유도된 단백질의 분리정제를 수행하여 한 개의 새로운 단백질을 분리 정제하였다. 그 결과는 다음과 같다 1. 10일된 유묘에 50mM NaCl을 48시간 처리하여 유도된 단백질의 존재를 전기영동을 통하여 확인하였다. 2. FPLC를 이용한 DEAE와 phenyl column을 이용하여 순수한 정제가 가능하였고, 이 과정을 통하여 전기영동상에서 단일 밴드를 나타내는 하나의 단백질을 정제하였다. 3. 이 단백질의 분자량이 64,000이라는 것을 Se-phdex-G 100 column chromatography를 통하여 확인하였다. 4. 이 단백질에 대한 단일 항체를 조제하여 고역가 항체를 분비하는 hybridoma 세포주 3개를 작성하고 isotype등 특성을 조사하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권5호
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• pp.379-386
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• 1998

본 연구에서는 천연 항균물질의 개발 이용을 위해 황기 종자로부터 인체에 무해한 천연 항균 단백질을 ion exchange chromatography 및 gel filteration을 이용하여, 순수 분리하고 특성을 조사하였다. 황기종자로부터 추출한 천연 항균 단백질은 Aspergillus ocraceus, Penicillium expensum, P. digitatum, Botrytis cineria의 포자 발아 및 효모인 Candida albicans의 생육을 현저하게 저해하였으며 ammonium sulfate 포화도가 0.4일 때 단백질의 침전량이 122.6 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$로 가장 많았고 항균력도 15.2 mm로 가장 높게 나타났다. 강력한 cation exchange chromatography인 Mono-S를 이용하여 FPLC에서 단백질을 분획하였을때 첫번째 peak에서 분획된 단백질군이 항균력을 보였으며 Superose 12HR gel filteration column을 이용하여 2차 분획 하였을 때 분자량이 19 kDa되는 단일 단백질만을 순수분리 할 수 있었다. 전기 영동한 polyacrylamide gel위에 곰팡이 포자를 중층하는 bio autography로 19 kDa 단백질 band의 항균력을 직접 확인하였으며 분리된 항균 단백질의 아미노 말단의 아미 노산 22잔기를 sequencing하고 thaumatin 및 zeamatin 유사 단백질들과 상동성을 측정한 결과 50%내외의 homology를 나타내었다. 분리된 항균 단백질은 곰팡이 균사가 성장하는 선단부위에 가장 먼저 침투하여 channel을 형성함으로 osmolysis를 일으켜 곰팡이의 생육을 억제하는 것으로 추측할 수 있었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제16권1호
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• pp.1-6
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• 1992

These experiments were undertaken as a basic study to understand the role of cumulus cell on in vitro maturation and fertilization process with identifying the cumulus cell-secreted proteins. By sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) and fast protein liquid chromatography(FPLC), the proteins of cumulus cells were identified. The results obtained in these experiments were summarized as follows ; 1. When the proteins secreted from cultured cell for 30 hours were separated by SDS-PAGE, there were a major band (>94,000) and other minor 2 bands with molecular weight ranging 30,000∼67,000 dalton. 2. In addition, the fractionations of these proteins by FPLC were idirectly shown that three bands were hyaluronic acid, chondroitin sulfate, and heparin.

• Applied Biological Chemistry
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• 제40권5호
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• pp.375-379
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• 1997

리보즘불활성화 단백질(Ribosome-inactivating protein, RIP)을 생성하는 식물을 탐색하여 그중 호박$(Cucurbita\;moschata\;D_{UCHESNE})$ 잎에서 ammonium sulfate 침전, DE 52-Cellulose, S-Sepharose, FPLC Superose 12 HR, FPLC Mono-S column chromatography에 의하여 ribosome-Inactivating 활성이 있는 단백질(PR 1, PRIP 2)을 분리하였다. 정제된 단백질의 분자량은 SDS-PAGE에서 약 31,000과 30,500인 염기성 단백질로서, 특히 PRIP 1은 열에도 안정하여 $50^{\circ}C$에서 30분간 처리한 경우에도 활성이 유지되었다. 이 단백질들의 ribosome-inactivating 활성을 in vitro translation system에서 측정한 결과 50% 활성저해농도 $(IC_{50})$는 PRIP 1은 0.82nM, PRIP 2은 0.79 nM이었다. PRIP 1과 PRIP 2의 N-말단부분의 아미노산 서열을 분석하여, 이미 밝혀진 리보즘불활성화 단백질들과 아미노산서열의 유사성을 분석해 본 결과, PRIP 1은 Luffa cylindrica에서 분리된 Luffin B 및 Trichosanthes kirilowii Maximowicz에서 분리된 Trichokirin과, PRE 2은 Momordia charantia에서 분리된 Momordin II 및 MAP 30과 유사성이 매우 높았다.