We isolated and identified a strain of Eurotium rubrum from Meju that has not been reported in Korea. This fungus is yellowish brown; reverse dark brown on CYA and PDA while yellow on 2% MEA at $25{^{\circ}C}$. Cleistothecia are first bright yellow and gradually turned brown. Mycerial growth on CYA attained a diameter of 30 mm at $20{^{\circ}C}$, 37 mm at $25{^{\circ}C}$ and 32 mm at $30{^{\circ}C}$ after 15 days. The isolate grew slower on 2% MEA ($<$ 20 mm 15 days at $25{^{\circ}C}$) compared to CYA and PDA ($<$ 40 mm 15 days at $25{^{\circ}C}$). Cleistothecia are superficial, yellow to light brown, globose to subglobose, 40~75 ${\mu}m$ in diameter. Asci are 8-spored and globose to subglobose 8~11 ${\mu}m$. Ascospores are disciform, 4.0~5.0 ${\mu}m$ in length and 4.2~4.5 ${\mu}m$ in width. Conidia are ovate or bacillar, finely roughened to densely spinulose, 4.6~6.0 ${\mu}m$ in length and 3.0~4.3 ${\mu}m$ in width. Compared to known Eurotium rubrum, the Korean isolate showed 99% sequence similarity in ITS rDNA (554 bp) and calmodulin (750 bp) gene and 100% in $\beta$-tubulin (1016 bp) gene. The E. rubrum isolate also had weak $\beta$-glucosidase and protease activities.
There is considerable interest in the isolation of potent radical scavenging compounds from natural resources to treat diseases involving oxidative stress. In this report, four new fungal metabolites including one new bisdihydroanthracenone derivative (1, eurorubrin), two new seco-anthraquinone derivatives [3, 2-O-methyl-9-dehydroxyeurotinone and 4, 2-O-methyl-4-O-(${\alpha}$-D-ribofuranosyl)-9-dehydroxyeurotinone], and one new anthraquinone glycoside [6,3-O-(${\alpha}$-D-ribofuranosyl)-questin], were isolated and identified from Eurotium rubrum, an endophytic fungal strain that was isolated from the inner tissue of the stem of the marine mangrove plant Hibiscus tiliaceus. In addition, three known compounds including asperflavin (2), 2-0-methyleurotinone (5), and questin (7) were also isolated and identified. Their structures were elucidated on the basis of spectroscopic analysis. All of the isolated compounds were evaluated for 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity.
The effect of water activity ($a_w,\;0.9{\sim}0.995$) and temperature ($18{\sim}30^{\circ}$C) on in vitro growth and interactions between ochratoxin-producing Aspergillus ochraceus and six other fungi (Alternaria alternata, Aspergillus candidus, A. flavus, A. niger, Eurotium amstelodami, E. rubrum) isolated from maize grain were investigated. A. ochraceus and each six other species were paired and their interactions given a numerical score to obtain an index of dominance ($I_D$) for each species. Generally A. ochraceus was very competitive and dominant against other fungi. It was, however, dominanted by Alternaria alternata and A. niger at high $a_w\;(0.995\;a_w)$, and mutually antagonistic when paired with E. amstelodami and E. rubrum at low $a_w\;(0.9\;a_w)$. The growth rates of each species were also calculated under the same range of environmental conditions. They were markedly influenced by aw and temperature. At high temperature ($30^{\circ}C$), A. ochraceus grew most rapidly under slightly drier conditions ($0.95\;a_w$), while A. alternata, A. flavus and A. niger did at high water availability level ($0.995\;a_w$). At $18^{\circ}C\;and\;25^{\circ}C$, and high $a_w$ level ($0.995\;a_w$), A. alternata grew fastest, while A. candidus, E. amstelodami and E. rubrum grew very slowly. Using Biolog plates the effect of $a_w$ and temperature on utilization patterns of carbon sources in maize was evaluated. The niche overlap index (NOI) relative to A. ochraceus was determined and compared with that of each interacting species. Under high water available condition ($0.995\;a_w$). the NOI of A. ochraceus was often >0.9, indicative of the coexistence with other interacting species. However, against E. amstelodami and E. rubrum at $18^{\circ}C$, the species had NOI <0.8, indicative of occupation of different niches. At low $a_w\;(0.95\;a_w)$, NOI for A. ochraceus was <0.8 when paired with A. alternata and A. niger also suggested the occupation of different niches.
Aspergillus is an important fungal genus used for the fermentation of Asian foods; this genus is referred to as koji mold in Japan and China. A. oryzae, A. sojae, and A. tamari are used in the production of miso and shoyu in Japan, but a comprehensive taxonomic study of Aspergillus isolated from Meju, a fermented soybean starting material for traditional soy sauce and soybean paste in Korea, has not been conducted. In this study, various Aspergillus species were isolated during a study of the mycobiota of Meju, and the aspergilli were identified based on phenotypic characteristics and sequencing of the ${\beta}$-tubulin gene. Most strains of Aspergillus were found to belong to the following sections: Aspergillus (n = 220), Flavi (n = 213), and Nigri (n = 54). The most commonly identified species were A. oryzae (n = 183), A. pseudoglaucus (Eurotium repens) (n = 81), A. chevalieri (E. chevalieri) (n = 62), A. montevidensis (E. amstelodami) (n = 34), A. niger (n = 21), A. tamari (n = 15), A. ruber (E. rubrum) (n = 15), A. proliferans (n = 14), and A. luchuensis (n = 14); 25 species were identified from 533 Aspergillus strains. Aspergillus strains were mainly found during the high temperature fermentation period in the later steps of Meju fermentation.
A home-made meju sample contaminated naturally with aflatoxins was used for isolation of fungal strains. Overall, 230 fungal isolates were obtained on dichloran rosebengal chloramphenicol (DRBC) and dichloran 18% glycerol (DG18) agar plates. Morphological characteristics and molecular analysis of a partial ${\beta}$-tubulin gene and the internal transcribed spacer (ITS) of rDNA were used for the identification of the isolates. The fungal isolates were divided into 7 genera: Aspergillus, Eurotium, Penicillium, Eupenicillium, Mucor, Lichtheimia, and Curvularia. Three strains from 56 isolates of the A. oryzae/flavus group were found to be aflatoxigenic A. flavus, by the presence of the aflatoxin biosynthesis genes and confirmatory aflatoxin production by high-performance liquid chromatography (HPLC). The predominant isolate from DRBC plates was A. oryzae (42 strains, 36.2%), whereas that from DG18 was A. candidus (61 strains, 53.5%). Out of the 230 isolates, the most common species was A. candidus (34.3%) followed by A. oryzae (22.2%), Mucor circinelloides (13.0%), P. polonicum (10.0%), A. tubingensis (4.8%), and L. ramosa (3.5%). A. flavus and E. chevalieri presented occurrence levels of 2.2%, respectively. The remaining isolates of A. unguis, P. oxalicum, Eupenicillium cinnamopurpureum, A. acidus, E. rubrum, P. chrysogenum, M. racemosus, and C. inaequalis had lower occurrence levels of < 2.0%.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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