The effects of chlorination on the elimination of three estrogenic chemicals such as $17{\beta}$-estradiol (E2), nonylphenol (NP) and bis-phenol A (BPA) were investigated using yeast two-hybrid assay (YTA), estrogen receptor competition assay (ER-CA), and high-performance liquid chromatography/mass spectrometer (LC/MS). Results of YTA, ECA and the analysis of LC/MS indicated that the estrogenic activity of above mentioned three endocrine disruptors were significantly reduced as the result of chlorination. The decrease in estrogenic activity paralleled with decrease in estrogenic chemicals under the influence of free chlorine. One common characteristic of estrogenic chemicals is the presence of a phenolic ring. Considering that a phenolic ring is likely to undergo some sort of transformation in aqueous chlorination solution, the above mentioned results may be applied to the rest of the other estrogenic chemicals in natural waters.
In this study, sixty chemicals including 47 pesticides were screened for estrogenic activity using E-screen assay. MCF-7 cell, used in E-screen assay, is known to be proliferated by addition of estrogenic chemicals. Eight of the measured pesticides showed estrogenic activity at the concentration range of 100-10,000nM. Their relative proliferative effect (RPE) and the relative proliferative potency (RPP) were 20-65% and 0.01-1.0%, respectively, when compared with 1.0nM of $\beta-Estradiol-17-acetate(E_{2}).$ DDVP and diazinone showed most strong estrogenic potency(RPP; 1.0%) and effect(RPE; 65%) of the eight pesticides. These results are in agreement with estrogenic activity of bisphenol A is known as a positive endocrine disrupter. Also, in this study, paraquat, DDVP, 4-chloro-3-methylphenol, 2,4,6-trichlorophenol and diazinon of the measured pesticides are estimated to estrogenic chemical.
The major protocol features of the rodent uterotrophic assay have been evaluated using a range of reference chemicals. The protocol variables considered include the selection of the test species and route of chemical administration, the age of the test animals, the maintenance diet used, and the specificity of the assay for estrogens. The rodents were ovariectomized under general anesthesia via bilateral flank incisions and randomly assigned to groups of 5 animals. Chemicals were DEHP, DBP, BPA and NP, were injected sc once daily with combinations of chemicals treatments for 3 days. In the results, the reported estrogenic chemicals DEHP and DBP were both negative in the single dose treatments. But, in the combinations of chemicals treatments, DEHP and DBP increased in bud number of mammary gland. Treatment of ovariectomized mice with combinations of other chemicals resulted in uterine and vaginal hyperplasia. The additive estrogenic effects were seen with the combinations of $17{\beta}$-Bestradiol and DBP treatment. the competitive estrogenic effects were seen with the combinations of $17{\beta}$-Bestradiol and nonylphenol, $17{\beta}$-Bestradiol and bisphenol-A treatments. These results offers a sysmatic and mechanistically informative approach to assessing estrogenicity. it provides a useful profile of activity using a reasonable amount of resources and is compatible with the study of individual chemicals as well as the investigation of interactions among combinations of chemicals. The results described illustrate the intrinsic complexity of evaluating chemicals for estrogenic activities and conform the need for rigorous attention to experimental design and criteria for assessing estrogenic activity.
The Ministry of Health and Welfare of Japan has set up six research groups concerning the endocrine disrupting chemicals. One of these projects was "A study on development of testing methodology for health effects due to exposure of environmental endocrine disruptors". In this paper, three topics are described. In OECD collaboration for pre-validation of uterotrophic assay, the most sensitive response to ethnyl estradiol was noted in the ovarectomized rats treated subcutaneously for 7 days. Secondly, it was suggested that changes of the serum $\alpha_{2u}$-globulin level may be a sensitive parameter for detecting the estrogenic activities of chemicals. Finally, development of the sexually dimorphic nucleus of preoptic area in the brain oj male rats was inhibited by the treatment with estrogenic chemicals, and their masculine behaviors and reproductive abilities were impaired after sexual maturation. In conclusion, these parameters are considered to be sensitive endpoints for testing estrogenic chemicals.chemicals.
It is well known that diesel exhaust particulate matter contains mutagenic PAHs, such as benzo[${\alpha}$]pyrene, benz[${\alpha}$]anthracene, chrysene, etc. Therefore it is suspected that these chemicals act on estrogen receptor and reveal endocrine-disrupting effects. Recent attention has focused on causative chemicals of endocrine-disrupting effects. We examined the estrogenic activity of respirable diesel exhaust particulate matter derived from diesel powered vehicle. PM2.5 diesel exhaust of vehicle was collected using a high volume sampler equipped with a cascade impactor. Diesel exhaust samples were fractionated according to EPA methods. The presence of estrogenic and antiestrogenic chemicals in PM 2.5 diesel exhaust was determined using E-screen assay. To quantitatively assess the estrogenic and antiestrogenic activities in diesel exhaust particulate matter, estradiol equivalent concentration (bio-EEQ) was calculated by comparing the concentration response curve of the sample with those of the estrogen calibration curve. Weak estrogenic activities and strong antiestrogenic activities were detected in the crude extract and moderately polar fractions. Higher antiestrogenic potency was observed with higher EROD activities in aliphatic and aromatic compounds fraction. In conclusion, estrogenic/antiestrogenic-like activities were present in diesel exhaust particulate matter. However, the health consequences of this observation was unknown, the presence of these activities may contribute to and exacerbate adverse health effect evoked by diesel exhaust particulate matter.
Gene expression levels of choriogenin, vitellogenin and estrogen receptor were determined using Reverse transcription (RT)-PCR technique after exposure to estrogenic chemical bisphenol A in the Korean wild medaka (Oryzias sinensis). These genes have been known to be induced in male test fish when the fish are exposed to estrogenic chemicals. Therefore they can be suggested as a possible biomarker of endocrine disruption in fish, however, relatively little has been known about these genes expression by estrogenic chemicals in Korean wild fish. Mature male Oryzias sinensis were treated with bisphenol A at nominal concentrations of 0.02, 0.2 and 2 mg/L for 6 days and total RNA was extracted from the livers of treated fish for RT-PCR. When the five biomarker genes were amplified by RT-PCR in the same condition, mRNA induction level of each gene was elevated with different sensitivities. Conclusively, the results of this work indicated that measurement of vitellogenin and choriogenin using RT-PCR is effective as a simple tool for the screening of estrogenic chemicals and suggested that O. sinensis would be a suitable model fish for the environmental risk assessment of potential endocrine disruptors.
In this study, degradation of estrone (E1) and $17{\alpha}$-ethynylestradiol (EE2) by gamma-irradiation and subsequent reduction of estrogenic activity as a function of absorbed dose were conducted using the yeast two-hybrid assay. Relative potency of E1 and EE2 compared to estrogenic activity of $17{\beta}$-estradiol (E2) was found to be 0.0144 and 0.1605, respectively. More than 90% of E1 and EE2 (both $5.0{\times}10^{-6}M$) was removed at an absorbed dose of 5 kGy, but more than 40% of estrogenic activity still remained. The addition of $TiO_2$ catalyst appeared to improve the removal efficiency of E1 and decrease estrogenic activity while there was no significant effect for EE2. Additionally, the calculated estrogenic activity of E1 and EE2 based on a regression model was well correlated with the observed activity.
Park, Hyo-Joung;Lee, Ho-Sa;Lee, Kilchul;Ryu, Jae-Chun
한국환경독성학회:학술대회논문집
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한국환경독성학회 2001년도 춘계심포지움 및 학술발표회
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pp.126-126
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2001
Over the last few years, an increased awareness of endocrine disrupting chemicals (EDCs) and their potential to affect wildlife and humans has produced a demand for practical screening methods to identify endocrine activity in a wild range of environmental and industrial chemicals. It is clear that in vivo methods will be required to identify adverse effects produced by these chemicals. (omitted)
The rodent uterotrophic assay is currently recommended as one of the primary in vivo assays far endocrine disrupting chemicals by the Organization for Economic Cooperation and Development (OECD) and Endocrine Disruptor Screening and Testing Advisory Committee (US EPA EDSTAC). Generally, this assay relies on the rapid increase in uterus and vagina weights when exposed to estrogenic compounds. Phthalate esters have been used extensively as a plasticizer in the manufacture of plastic products such as PVC films and medical devices. Recently, phthalate esters have been shown to induce endocrine system mediated responses. However, a flew studies have been conducted for the screening of their estrogenic activity. In this study the estrogenic activity of seven phthalate esters, butyl benzyl phthalate (BBP), di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP), di-n-butylphthalate (DBP), diethylphthalate (DEP), di-n-pentylphthalate (DPF), di-n-propylphthalate (DPrP) and dicyclohexylphthalate (DCHP), was examined in uterotrophic assay. Phthalate esters dissolved in corn oil were administered to ovariectomized (OVX) female Sprague-Dawley rats by sub-cutaneous injection for three consecutive days. fiats were sacrificed 24h after final treatment, and then uterus and vagina weights were deter mined. All phthalate esters tested in this assay did not change talc uterus and vagina weights at dosage levels up to 200 mg/kg/day treatment. These results demonstrated that phthalate esters did not exhibit estrogenic activity in vivo uterotrophic assay.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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