The recombinant alanine dehydrogenase (ADH) from E. coli containing Thermus caldophilus ADH was purified to homogeneity from a cell-free extract. The enzyme was purified 38-fold with a yield of 68% from the starting cell-free extract. The purified enzyme gave a single band in polyacrylamide gel electrophoresis, and its molecular weight was estimated to be 45 kDa. The pH optimum was 8.0 for reductive amination of pyruvate and 12.0 for oxidative deamination of L-alanine. The enzyme was stable up to $70^{\circ}C$. The activity of the enzyme was inhibited by 1 mM $Zn^{2+}$, 20% hexane, and 20% $CHCl_3$. However, 10 mM $Mg^{2+}$ and 40% propanol had no effect on the enzyme activity. The Michaelis constants ($K_m$) for the substrates were $50\;\mu\textrm{M}$ for NADH, 0.2 mM for pyruvate, 39.4 mM for $NH_4+$, 2.6 mM for L-alanine, and 1.8 mM for $NAD^+$.
전통식품(고추장, 된장, 쌈장, 젓갈류, 김치)으로부터 혈전 용해능이 있는 미생물을 분리한 후 그 중 fibrin용해능이 가장 우수한 균주 KJ-23을 최종 선발하였다. 최종 선별한 균주 KJ-23을 Microbial identification system(MIS)의 Sherlock 95 program을 이용하여 동정한 결과 Bacillus brevis KJ-23으로 동정하였다. Bacillus brevis KJ-23균주의 최대혈전용해 생산을 위한 최적배지화 조건을 검토한 결과 nutrient broth, D-ribose 0.5%, malt extract 0.5%, $K_2$HPO$_4$ 0.3% 첨가시 최고의 활성을 보였으며, 금속염을 첨가했을 경우에는 오히려 활성이 감소하는 경향을 보여 금속원은 최적 배지화 조건에서 첨가하지 않았다. 또한 pH7.0, 3$0^{\circ}C$에서 진탕배양했을 경우 최대활성을 보였으며, 시간별 경시효과에서는 24시간에서 혈전용해능이 최대를 나타내었다.
Lard 와 Alcohol을 섭취시킨 흰쥐 혈청중의 효소 활성에 인삼추출물이 미치는 영향을 검토하기 위해서 흰쥐에 Lard 와 Alcohol 및 인삼추출물을 첨가한 식이를 10주간 급여하여 성장시킨 후 체중, 각종 장기 중량, 혈청중 AST, ALT, ALP, LDH의 활성을 측정하였을 때 다음과 같은 결과를 얻었다. Lard 와 Alcohol 첨가 식이군에서는 체중과 식이섭취량은 감소하였으나, 인삼추출물의 투여에 의한 식이효율은 증가하였다. lard의 첨가 식이로 성장시킨 실험군에서는 간장, 신장, 비장의 무게는 증가하였으나 다른 식이 군에서의 중량변화는 없었다. 혈청중 AST, ALT, LDH, ALP 활성은 lard , alcohol을 첨가한 식이군(II, III군)에 비해 유의한 감소를 나타내었다. 이상의 실험 결과로 보아 Lard 와 Alcohol의 만성적인 섭취는 실험동물의 간기능에 손상을 유발하여 혈청 중 AST, ALT, ALP, LDH활성이 증가하였으나 인삼추출물을 첨가한 실험군에서는 위와 같은 효소의 활성이 유의적으로 감소하였다. 따라서 인삼추출물은 고지방식이로 인한 고지혈증을 개선함으로써 간조직의 손상을 예방하여 줄것으로 생각되어 진다.
Effect of single pre-administration of Cordyceps militaris(Cm) extract on the survival ratio, body weight and organ weight changes and blood cell counts after whole-body ${\gamma}-irradiation$ were investigated. The single pre-administration of Cm extract at 24 hrs before ${\gamma}-irradiation$ increased the 40-day survival ratio of irradiated mice from 60.1% to 71.4%. The administration of Cm extract completely prevented weight reductions of spleen and thymus produced by ${\gamma}-irradiation$ (P<0.01, P<0.05). Similar but somewhat less radioprotective effect was also found In the testis of the Cm treated mice. The administration of Cm extract retarded the reduction of both leukocyte and lymphocyte counts occured during the first 7 days and accelerated the recovery of the counts thereafter. The exrtract also acclerated the recovery of the erythrocyte counts occured after the day 21th. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of the soluble proteins extracted from various organs did not reveal differences to any extent in all groups except in the livers of the irradiated and extract treated groups, in which some proteins were missing or less present. Also, the result of general intra and extra mycelial enzyme assays with Cm, extramycelial enzyme activity was relatively higher than the intramycelial enzyme, Cm appeared to indicate that ${\alpha}-amylase$ was the highest among the enzymes and gluosidase and chitinase were followed. Since the spleen, thymus and testis have been well known as radiosensitive organs, the protective action of Cm extract on irradiated mice may be responsible for its enhancing recovery of these organs. Although the exact mechanism in protective effect of Cm extract on irradiated mice is not clear yet, the present study is the first report regarding the Cm which was tested and found to be a potential radioprotective agent.
Dhillon, Gurpreet Singh;Brar, Satinder Kaur;Kaur, Surinder;Valero, Jose R.;Verma, Mausam
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권12호
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pp.1312-1321
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2011
Enzyme extracts of cellulase [filter paper cellulase (FPase) and carboxymethyl cellulase (CMCase)], chitinase, and chitosanase produced by Aspergillus niger NRRL-567 were evaluated. The interactive effects of initial moisture and different inducers for FP cellulase and CMCase production were optimized using response surface methodology. Higher enzyme activities [FPase $79.24{\pm}4.22$ IU/gram fermented substrate (gfs) and CMCase $124.04{\pm}7.78$ IU/gfs] were achieved after 48 h fermentation in solid-state medium containing apple pomace supplemented with rice husk [1% (w/w)] under optimized conditions [pH 4.5, moisture 55% (v/w), and inducers veratryl alcohol (2 mM/kg), copper sulfate (1.5 mM/kg), and lactose 2% (w/w)] (p<0.05). Koji fermentation in trays was carried out and higher enzyme activities (FPase $96.67{\pm}4.18$ IU/gfs and CMCase $146.50{\pm}11.92$ IU/gfs) were achieved. The nonspecific chitinase and chitosanase activities of cellulase enzyme extract were analyzed using chitin and chitosan substrates with different physicochemical characteristics, such as degree of deacetylation, molecular weight, and viscosity. Higher chitinase and chitosanase activities of $70.28{\pm}3.34$ IU/gfs and $60.18{\pm}3.82$ to $64.20{\pm}4.12$ IU/gfs, respectively, were achieved. Moreover, the enzyme was stable and retained 92-94% activity even after one month. Cellulase enzyme extract obtained from A. niger with chitinolytic and chitosanolytic activities could be potentially used for making low-molecular-weight chitin and chitosan oligomers, having promising applications in biomedicine, pharmaceuticals, food, and agricultural industries, and in biocontrol formulations.
동해에서 분리된 Pseudoalteromonas donghaensis HJ51는 체외분비 단백질 분해효소를 생산하는 신종 미생물로 보고되었다. 체외 단백질 분해효소의 특성과 최적 생산 조건을 결정하기 위해 crude supernatant을 사용하여 단백질 분해효소의 최적 활성 온도와 pH를 조사한 결과 $40^{\circ}C$와 pH 7.5-10.5이었으며, pH 11에서도 88%의 높은 상대적인 효소 활성을 나타내었다. 효소의 금속 요구성을 조사한 결과, $Fe^{3+}$를 10 mM로 첨가하였을 때 최대 효소활성 증가를 보였다. 최대의 효소생산 조건을 탐색한 결과, 기본배지인 PY-ASW (peptone 0.5%, yeast extract 1.0%, artificial seawater)에 탄소원을 첨가하지 않는 것이 가장 높았으며, 질소원으로는 peptone 보다 beef extract, tryptone, casmino acids을 각각 첨가했을 때 활성이 21, 7, 4% 증가하였다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 P. donghaensis HJ51이 생산하는 효소는 알칼리성 pH 환경 및 저온환경에서 활성이 필요한 분야에 응용이 가능할 것으로 사료된다.
대청의 이용성 향상을 위한 자료 확보 측면에서 식물체 부위 및 추출 용매별에 따른 항산화 효소 활성 및 항균효과를 조사하였다. APX(Ascorbate Peroxidase) 활성은 줄기의 에탄올 추출물, 잎의 메탄올 추출물, 잎의 증류수의 추출물 순으로 높아 각각 1601.7, 1133.7 및 524.3(Unit/mg protein)을 나타냈다. CAT(Catalase) 활성은 꽃의 에탄올 추출물, 잎의 메탄올 추출물, 꽃의 증류수 추출물 순으로 높았는데, 각각 177.1, 120.8 및 55.4(Unit/mg protein)를 나타냈다. POD(Ascorbate Peroxidase) 활성은 꽃의 에탄올 추출물, 꽃의 메탄올 추출물, 줄기의 증류수 추출물 순으로 높았으며, 각각 27.1, 14.6 및 10.4(Unit/mg protein)를 나타냈다. SOD(superoxide dismutase) 활성은 뿌리의 증류수 추출물, 꽃의 메탄올 추출물, 뿌리의 에탄올 추출물 순으로 높았으며, 각각 90.8, 80.1, 75.5%를 나타냈다. 대청의 꽃 추출물은 Vibrio parahaemolyticus에 대해서만, 뿌리는 Staphy lococcus aureus에 대해서만, 줄기 추출물은 Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphy lococcus aureus에 대해서만 용매에 관계없이 항균활성을 나타냈다. 특히 대청 잎의 증류수 추출물은 Bacillus subtilis, Escherichia coli에 대해 높은 항균활성을 나타내어 저해환 직경이 각각 30.0 및 24.0 mm이었다. 이와 같은 결과는 약용식물로서 대청의 가치가 높음을 시사해 주었다.
In order to study the mechanism of the parts of omiza (Schizandra chinensis baillon) on metabolism in normal rats, the metabolites and enzyme activities both in serum and liver were determined. The rats were treated with water extract of the parts of omiza and the results showed a significant decrease of GOT, Glucose (excepted for water extract of fruits), Urea nitrogen, and increase of LDH in serum. Free fatty acid level tended to decrease in serum of rats treated with water extracts of fruits and endocarps and increase in seeds extract treated group. Serum GPT level was unchanged. The level of hapatic metabolites and enzyme activity showed a significant increase, but Pyruvate level was not significantly decreased.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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