• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제57권2호
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• pp.137-140
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• 2014

A gene encoding thermostable pectinase (TmPec) was isolated from hyperthermophilic microorganism, Thermotoga maritima. The open reading frame (ORF) of TmPec gene is 1,104 bp long and encodes 367 amino acid residues with a molecular weight of 40,605 Da. To analyze the enzymatic activity and biochemical properties, the ORF of TmPec gene excluding putative signal sequence of 27 amino acids was introduced into the E. coli expression vector, pRSET-B, and overexpressed in E. coli BL21. Protein concentration of purified recombinant TmPec was 1.1 mg/mL with specific activity of 56 U/mg protein on pectin. The recombinant TmPec showed the highest activity at around $85-95^{\circ}C$, and at around pH 6.5. It was stable at temperature below $85^{\circ}C$. In the presence of $Ca^{2+}$, the activity of recombinant TmPec was increased to 146.3% of normal level. In contrast, $Ba^{2+}$ and Mn2+ showed strong inhibition to the recombinant TmPec.

• 한국잠사학회:학술대회논문집
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• 한국잠사학회 2004년도 제47회 춘계 학술연구 발표회
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• pp.76-77
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• 2004

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.370-378
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• 1989

토양으로부터 역가높은 CGTase를 분비하는 호알칼리성 미생물을 분리하였으며, 동정 결과 Bacillus circulans로 판정되었다. 배양액 중의 CGTase를 ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex 그리고 Sephadex G-100 column chromatography로 분리, 정제하여 단일 단백질 band를 얻었다. 정제된 CGTase의 분자량은 약 93,000, 최적 pH와 온도는 6.0, $50^{\circ}C$였으며, pH와 온도안정성은 5.5-11, $65^{\circ}C$까지였다. Soluble starch를 기질로 할 때의 $V_{max}$ 와 $K_{m}$ 값은 각각 0.16$\mu$mole $\beta$-CD/min, 14.3mg soluble starch/mi이였고 24시간 반응액의 $\alpha$-：$\beta$-:${\gamma}$-CD 의 생성비율은 1：8.1：1.9로서 $\beta$-CD를 우선적으로 합성하였다. 기질로 glucose와 maltose를 사용하였을 때 CD합성작용이 없었으며, sweet potato 그리고 cornstarch를 사용하였을 때 가장 높은 CD합성작용을 보였다. 어느 수준 이상의 과다한 CGTase 첨가경우에는 $\alpha$-CD생성이 급격히 증가하였다. 또한 정제된 CGTase는 stevioside에로의 당전이성을 갖고 있었다.

• 미생물학회지
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• 제37권3호
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• pp.214-220
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• 2001

축산 분뇨의 퇴비화에 관련되는 세균들을 분리하고 이들이 생산하는 효소들 중 퇴비화에 관련되는 것으로 사료되는 amylase, cellulase, protease 및 lipase의 특성을 연구하였다. 발효 중에 있는 축산 분뇨로부터 24주의 균주를 분리하여 이중 protease, cellulase, amylase, 그리고 lipase의 활성을 모두 가진 6개의 균주들을 선별하였다. 분리한 6개의 균주들을 동정해본 결과 Corynebacterium varibilis, Bacillus spp., Pseudomonas spinosa, Acetobacter calcoaceticus 및 Athrobacter cumminsii 등으로 밝혀졌다. 이들이 분비하는 효소들의 특징은 중성에서 알칼리성에 이르는 광범위한 pH에서 효소들이 높은 활성을 보였으며, cellulase를 제외한 대부분의 효소들의 최대 활성 온도가 $60^{\circ}C$ 정도 였으나, cellulase의 경우 $37^{\circ}C$가 최적 활성 온도였다. 이는 발효가 진행되어 축산 분뇨에 고온의 열이 발생할 때, 이 환경하에서 유기물을 분해함으로써 발효과정을 원활히 진행시키는 것으로 생각된다. 다만 cellulase 생산 세균의 경우 축산 분뇨의 초기 발효시에 관여하여 균주의 성장 및 유기물의 분해에 관여하는 것으로 사료된다. 이와같은 결과는 축산분뇨 발효초기와 발효후기의 온도가 상승된 환경에서 작용하는 세균의 균총이 다름을 암시하고 있다.

• 한국어병학회지
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• 제19권3호
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• pp.243-251
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• 2006

패류의 방어시스템에서 순환 haemocytes는 중요하다. 참굴, Crassostrea gigas haemocytes의 형태적 특징을 이해하기 위해서 광학현미경적 특징과 전자현미경적 특징을 관찰하였다. 그 결과 4종류의 haemoctyes type을 확인하였다: type Ⅰ small hyalinocytes, type Ⅱ large hyalinocytes, type Ⅲ large granulocytes, type Ⅳ small granulocytes. 또한, 면역세포학적 방법으로 haemocytes의 alkaline phosphatase (ALP), acid phosphatase (ACP), peroxidase (POD), α-naphthyl acetate esterase, β-glucuronidase, PAS, sudan black B와 oil red O의 활성을 조사하였다. 그 결과, 조사한 모든 효소의 활성이 granulocytes에서 hyalinocytes에 비하여 높게 나타났다.Haemoctyes와 Vibrio FKC를 incubation 후 식균지수와 식균율을 조사하였다. 그 결과, 식균지수와 식균율은 배양 15분째부터 증가하여 120분까지 높게 나타났다. 또한, ALP, ACP, α-naphthyl acetate esterase와 β-glcuronidase의 효소활성도 대조구에 비하여 높게 나타나 이와 같은 효소는 참굴의 식작용에 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제48권1호
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• pp.16-22
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• 2005

키토산분해효소(Chitosanases, EC 3.2.1.132)는 당질가수분해효소군의 하나로, 아미노당인 D-glucosamine polymer인 chitosan의 ${\beta}-1,4-glycoside$ 결합을 가수분해하는 효소이며, 세균, 곰팡이, 식물 등에 널리 분포한다. 본 논문에서는 chitosanase의 N-말단 아미노산의 서열과 입체구조에 근거한 family 및 clan 분류, 작용모형, 절단 유형, subclass 분류, 및 family-subclass 상관성을 검토하였다. 아미노산 서열과 입체구조와 기질의 분해패턴 사이에는 깊은 상관이 있음을 확인 제시하였다. 다양한 종 유래 chitosanase의 1차구조의 해명과 진화적 상관 규명, 나아가 보다 정교한 chitosanase의 정의와 다양한 산업적 응용에의 가능성도 검토하였다.

• Food Science and Biotechnology
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• 제16권6호
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• pp.928-934
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• 2007

Physiochemical properties, such as yield and molecular weight distribution of polysaccharide fractions, of polysaccharides in the enzymatic hydrolysates of purslane were investigated and characterized. A higher amount of micro nutrients, such as potassium (9,413 mg/100 g), phosphorus acid (539 mg/100 g), leucine, alanine, lysine, valine, glycine, and isoleucine, was present in whole purslane. The yield of water soluble polysaccharides (WSP) was 0.29, 7.01, and 7.94% when extracted using room temperature water (RTW), hot-water (HW), and hot temperature/high pressure-water (HTPW), respectively, indicating that HW or HTPW extraction may be effective to obtain WSP from purslane. The average ratio of L-arabinose:D-galactose in the WSP was 37:49, 34:37, and 27:29, when extracted using RTW, HW, and HTPW, respectively. These results indicate that water was a suitable extraction solvent for preparation of the arabinogalactan component of whole purslane. A higher yield and total carbohydrate content was obtained by using Viscozyme L instead of Pectinex 5XL during extraction of the WSP, which indicates that enzymatic treatment of purslane may be an effective method to control the Mw of polysaccharides. Finally, it was confirmed that Viscozyme L is a suitable enzyme for the hydrolysis and separation of polysaccharides obtained from purslane.

• 한국수산과학회지
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• 제43권5호
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• pp.391-399
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• 2010

This study was conducted to improve the antioxidative activity of instant noodles containing enzymatic extracts from Ecklonia cava (EEC). EEC has relatively better antioxidative activity than extracts from other indigenous plants in Jeju Island. The EEC (2.5 mg/mL) had 82.5% for the hydroxy radical, 78.4% for the DPPH radical, and 64.9% for the superoxide anion radical scavenging activities, and 65.2% for the cell viability (100 ${\mu}g/mL$). According to the texture of the dough, the DPPH free radical scavenging of uncooked instant noodles, sensory evaluation of cooked instant noodles, and turbidity of the cooking drip, the optimal EEC concentration was 1.8% for the instant noodles. The major amino acids in the instant noodles with EEC were glutamic acid (24.2%), proline (10.2%), valine (10.0%), and isoleucine (12.3%). The zinc and iron in the instant noodles were enhanced by adding 1.5-1.8% EEC. The antioxidant activity of instant noodles with EEC was 75.4% for the hydroxy radical, 74.1% for the DPPH radical, and 51.2 % for the superoxide anion radical scavenging activities.

• 약학회지
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• 제45권1호
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• pp.46-54
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• 2001

Protein carboxyl Ο-methylation is a kind of enzymatic reaction producing carboxyl methylester catalyzed by protein carboxyl Ο-methyltransferases at the carboxyl group of amino acid residues in polypeptide. Since the finding of carboxyl methylesterl many studies have been focused on the under-standing of biological functions in eukaryotes but still not clear except for roles in Ras attachment to membrane and protein repair. In this study, we investigated the protein carboxyl methylation in porcine liver and testis in respect of identification and characterization of carboxyl methylesters and natural proteinous substrates using pH stability of the esters and electrophoresis under acidic and basic conditions. We detected several kinds of methyl esters, 3 kinds each in cytosolic fractions from liver and testis. Under the treatment of strong acid and base, the ratio between base-stable substrates and unstable ones in liver (4 : 6) was different from the ratio obtained in testis (6 : 4). The methyl accepting capacities were affected by enzymatic proteolysis between the range of 55 to 65% in liver and of 35 to 45% in testis. Separation of the methylated proteins by acidic electrophoresis in the presence of urea and SDS revealed distinctively natural substrates of 26, 33 and 80 kD in the cytosol from liver and of 14, 25, 32 and 86 kD from testis. Most of the labelling, however were lost following electrophoresis under moderate alkaline condition, except for molecules of newly detected 7 and 17 kD in livers and 15, 29, 40 and 80 kD in testis. From these results, it was proposed that protein carboxyl Ο-methylation in each organs may be catalyzed by different classes of protein carboxyl Ο-methyltransferases. In addition, it is suggested that the protein carboxyl methylation in liver and testis may have different patterns in respect of natural substrates.

• 한국식품과학회지
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• 제36권2호
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• pp.211-216
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• 2004

회분식 반응기(stirred-tank batch reactor)를 사용한 DAG, MAG 함유 기능성유지를 비용매계(solvent-free system) 조건에서 효소적 반응을 이용하여 합성하였다. 48시간 동안 합성된 지질을 HPLC를 사용한 TAG, 1,3-DAG, 1,2-DAG 및 MAG 함량 분석결과 각각 45.05, 16.27, 23.05 및 14.98%로 분석되었으며 체중개선 기능성 유지의 지방산 조성 분석결과 palmitic, palmitoleic, stearic, oleic, linoleic 및 linolenic acid가 13.21, 0.15, 2.02, 34.36, 49.12 및 1.14 mol%로 분석되었다. 합성된 지질의 ${\alpha},\;{\gamma}$ 및 ${\delta}-tocopherol$ 함량을 분석한 결과는 각각 0.014, 0.029 및 0.010%로 분석되었으며 총 tocopherol 함량은 0.053%로 나타났다. 또한 재구성된 지질을 사용하여 산가, 비누화가, 요오드가를 측정하였으며 융점 및 결정화점을 살펴보고 이를 통하여 옥수수유로 유래된 DAG, MAG를 함유한 체중개선 기능성 유지의 이화학적, 물리적 특징을 규명하였다. 체중개선 기능성 유지의 산화 안정성 실험을 시행한 결과 체중개선 기능성 유지가 원료유인 옥수수유보다 높은 과산화물가와 p-anisidine가를 보였으며 각기 달리 혼합한 rosemary추출물(100, 200 및 300ppm)이 체중개선 기능성 유지와 옥수수유의 산화를 감소 시켰다.