• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제11권1호
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• pp.1-11
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• 2007

착상기 이전 자궁에서 특이적 자궁내막 준비가 진행되어야 하는데, 이는 자궁 내막의 점진적 분화로 배아의 착상과 성공적 임신에 절대적으로 필요하다. 배아 발생 동안에 관찰되는 조직의 재구성은 세포외 기질을 포함한 다양한 요인에 의해 조절된다. 임신 동안에 관찰되는 극적인 변화로는 배아의 이동, 탈락막 반응, 태반의 분화를 그 예로 들 수 있다. 배아와 자궁간의 성공적 착상을 위한 변화들은 배아와 자궁의 착상을 위한 능력 갖출 수 있도록 한다. 이러한 변화과정 중에, 콜라겐이 주성분인 세포외 기질의 극적인 변화가 진행된다. 이러한 변화는 매우 복잡하여 그 기작을 밝히는 것은 쉽지 않으나, 최근 들어 PCR-select cDNA subtraction 방법, microarry 방법 등 대단위 유전자 동정 방법들을 이용하여 많은 후보 유전자가 동정되었다. 스테로이드 호르몬은 임신과 임신 유지에 중요한 역할을 수행하며, 세포외 기질의 재구성을 엄격하게 성스테로이드 호르몬에 의한 유전자 네트워크를 통하여 조절한다. 자궁의 세포외 기질의 병리적 조절이 당뇨병 등에서 보고되고 있다. 세포외 기질의 재구성은 착상과 태아와 자궁의 발달을 이해하는 데 중요하고, 또한 생식과 관련된 질병을 극복하는 데 중요하다. 비록 세포외 기질의 구성성분이 매우 다양하고 복잡하여 논의할 것이 무척 많으나, 본 종설에서는 착상기를 전후한 시기에 콜라겐의 변화를 중심으로 논하였다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제10권3호
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• pp.183-191
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• 1995

This experiment was carried out to study the determination of survival of vitrified and thawed mammal follicular oocytes by FDA-test. Oocytes were divided into 3 groups according to attachment of cumulus cell. Group A oocytes were tightly surrounded by cumulus cell, group B oocytes were partially surrounded by cumulus cell, and group C oocytes were poorly surrounded by cumulus cell. Vitrification solution developed by our previous study (Kim et al, 1992) which consisted of permeable agent (20 % glycerol + 10 % ethylene glycol) and nonpermeable agent (30 % Ficoll + 10 % sucrose). Oocytes (7~10) loaded into 0.25 ml straw after 10 min equilibration were plunged into liquid nitrogen (- 196$^{\circ}C$) directly. The FDA-score of vitrified and thawed group A oocytes was higher in rat (4.2) than in rabbit (3.9), cow (3.8), mouse (3.4) and porcine (2.4), however that of cumulus cell was higher in rabbit (4.7) than in rat (4.1), cow (2.9), porcine (2.6) and mouse (1.4). The FDA-score of vitrified and thawed group B oocytes were 3.1 (cow), 2.9 (rabbit), 2.9 (mouse), 2.6 (rat) and 2.5 (porcine), respectively. However that of cumulus cell was higher in rabbit (3.7) than in porcine (2.6), rat (2.3), cow (1.7) and mouse (0.3). The FDA-score of vitrified and thawed group C oocytes was higher in mouse (4.1) than in cow (2.9), rabbit (2.6), rat (1.3) and porcine (1.1). As shown in the above results, The survival rates of oocytes were higher in group A than in group B and C except in mouse and cow. These results suggest that the survival of cumulus cell as well as follicular oocytes can be reliably judged by their fluorescence with FDA-test.

• 한국수정란이식학회지
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• 제10권1호
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• pp.45-51
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• 1995

In order to determine the optimum condition and timing for in vitro maturation of oocytes to metaphase of meiosis II (M II), the immatured follicular oocytes were recovered by puncturing the large(1.0~1.5 mm in diameter) and small(<1.0 mm in diameter) follicles in the ovaries of rabbits treated intramuscularly with a single dose of 100 TU PMSG 68 hours previously. The follicular oocytes were classified into three grades by the attachment of cumulus cells. The Grade I and II follicular oocytes from large follicles were cultured in BO-DM medium with 10% FCS, 35 $\mu$g /nl of FSH, 10 $\mu$g /ml of LH and 1 $\mu$g /ml of estradiol-17$\beta$ at 39t in a 5% $CO_2$ incubator for 11 to 23 hours. In 3 hours interval during the culture period, the oocytes were harvested and their cumulus cells were removed with hyaluronidase. The denuded oocytes were stained with Hoechst 33342 dye and their meiotic status and extrusion of the first polar body (PB) were examined under a fluorescence microscope. Also the fragmentation of the first PB and the distance between the first PB and nucleus were examined. The results obtained were as follows: 1. The mean recovery rate of follicular oocytes from the large and small follicles was 59. 9 and 31.3%, respectively. The mean number of oocytes recovered per rabbit and the Grade I percentage were 14.6 and 94.4% in large follicles, but 2.1 and 61.1% in small follicles, respectively. All the parameters examined were different significantly (p<0.05) between both the folliclular size. 2. Most of the follicular oocytes(86.8%) were matured in vitro to M II phase in 14 hours in Grade I oocytes, but the significantly(p<0.05) less oocytes(45.5%) were matured in Grade II oocytes. 3. The first PB was extruded in most of the oocytes(94.7%) in 14 hours of culture with the fragmentation rate of 29.6%, but the fragmentation rate of the first PB increased significantly (p<0.05) as the culture period for maturation was longer to 20 hours(63.5%). 4. The distance between the first PB and nucleus was increased linearly (p<0.05) as the maturation time passed from 14(7.1$\mu$rn) to 23 hours(58.4$\mu$m). 5. From the above results it was concluded that the optimum time for in vitro maturation culture might be 14 hours in the follicular oocytes from rabbit primed with PMSG for 68 hours, expecially when these follicular oocytes were used for recipient cytoplasms in embryo cloning.

• Toxicological Research
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• 제35권4호
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• pp.343-351
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• 2019

Many in vitro developmental toxicity assays have been proposed over several decades. Since the late 1980s, we have made intermittent attempts to introduce in vitro assays as screening tests for developmental toxicity of inhouse candidate products. Two cell-based assays which were developed two decades apart were intensively studied. One was an assay of inhibitory effects on mouse ascites tumor cell attachment to a concanavalin A-coated plastic sheet surface (MOT assay), which we studied in the early days of assay development. The other was an assay of inhibitory effects on the differentiation of mouse embryonic stem cell to beating heart cells (EST assay), which we assessed more recently. We evaluated the suitability of the assays for screening in-house candidates. The concordance rates with in vivo developmental toxicity were at the 60% level. The EST assay classified chemicals that inhibited cell proliferation as embryo-toxic. Both assays had a significant false positive rate. The assays were generally considered unsuitable for screening the developmental toxicity of our candidate compounds. Recent test systems adopt advanced technologies. Despite such evolution of materials and methods, the concordance rates of the EST and MOT systems were similar. This may suggest that the fundamental predictivity of in vitro developmental toxicity assays has remained basically unchanged for decades. To improve their predictivity, in vitro developmental toxicity assays should be strictly based on elucidated pathogenetic mechanisms of developmental toxicity.

• 한국패류학회지
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• 제26권2호
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• pp.157-163
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• 2010

원유의 WSF가 북방전복의 유생 및 치패 발생에 미치는 영향을 알아보기 위하여 발생소요시간, 발생률 및 부착률, 생존율, 유생 및 부착치패의 각성장 그리고 수온에 따른 치패의 생존율 및 아가미의 조직학적 변화를 조사하였다. 발생 소요시간은 대조구에 비해 노출구에서 느리게 나타났다. 발생률 및 부착률은 0.4 mg/L 이상의 농도에서 대조구에 비해 유의적인 감소를 보였다 (P < 0.05). 북방전복 유생의 생존율은 0.4 mg/L 이상에서, 부착치패는 2.4 mg/L 이상에서 유의적인 감소가 나타났다 (P < 0.05). 각성장은 2.4 mg/L 이상의 농도에서 대조구에 비해 감소하였다 (P < 0.05). 수온에 따른 치패의 생존율은 $17^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$ 모두 노출농도에서 감소하였으며, 특히 고수온에서 전체적인 생존율이 낮게 나타났다. 또한 아가미에서 나타난 조직학적 변화는 주로 새엽 상피세포 핵의 위축 및 상피세포의 공포화 그리고 상피층의 괴사를 동반한 붕괴 등이 관찰되었으며, 이는 $17^{\circ}C$에 노출된 개체들 보다는 고수온인 $25^{\circ}C$에 노출된 개체들에서 심하게 나타났다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제20권1호
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• pp.71-77
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• 2005

Relaxin과 insulin이 돼지 난포 과립막세포의 스테로이드 호르몬 분비에 미치는 영향을 연구하기위하여 체외에서 황체화된 과립막세포에서 prosesterone과 $17{\beta}-estradiol$의 생산을 조사하였다. 돼지난포 과립막세포를 혈청 존재하에 배양접시에 부착 후 48시간 동안 체외배양하고 무혈청 배지에서 24시간 배양하였다. Relaxin과 insulin의 용량의존성을 확인하기 위하여 다양한 농도 (10, 100, 1,000 ng/ml)를 각각 무혈청 배지에 첨가하였다. 병합 효과를 알아보기 위하여 100 ng/ml relaxin과 100 ng/ml insulin을 단독 혹은 병합하여 처리하였는데 황체호르몬 (100 ng/ml)을 처리한 경우와 처리하지 않은 경우 모두를 조사, 분석하였다. 최종 배양이 끝난 배양액을 수집하여 RIA법으로 proses-terone과 $17{\beta}-estradiol$의 농도를 조사하였다. Relaxin과 insulin은 용량이 증가될수록 progesterone의 생산을 증가시켰으나 $17{\beta}-estradiol$의 생산에는 아무런 영향이 없었다. 병합실험에서는 relaxin과 insulin 단독 또는 병합시 황체호르몬 존재 하에서 progesterone의 생산을 증가시켰으나 $17{\beta}-estradiol$의 생산에는 아무런 영향이 없었다. 결론적으로 relaxin과 insulin은 돼지 황체화 과립막세포의 progesterone 분비를 증가시키지만 $17{\beta}-estradiol$의 생산에는 효과가 없었으며 병합에 의한 상승효과는 없었다. Progesterone 생산에 미치는 relaxin과 insulin의 효과는 황체호르몬의 존재에 의해 증대되었다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제13권3호
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• pp.227-233
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• 1998

난관상피세포와 그 배양액에서 분비된 고분자 분획이 소정자의 수정능력에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 실시한 실험에서 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 난관상피세포배양액으로부터 MW 5 kDa cut-off bucket을 사용하여 탈염 및 농축을 실시, 단백질/고분자분획을 회수하고 이를 체외수정용 배양액에 첨가하고 난관상피세포 monolayer와 공배양을 통해 체외수정을 실시한 결과 고분자분획첨가 및 난관상피세포 공배양(OM+OEC)군이 고분자분획첨가(OM) 군에 비하여 유의적으로 높은 분할율을 나타내었으며 난관상피 세포 공배 양(OEC)군 및 OM 군 모두 대조군에 비해서는 유의적으로 높은 분할율을 나타내었다(p〈0.01). 2. 난관상피세포와 전배양한 정자의 체외수정능을 조사한 결과 정자와 OEC를 4시간 동안 전배양한 후 체외수정한 군이 난자와 정자를 동시에 배양한 군에 비하여 유의적으로 높은 분할율을 나타내었다(p〈0.01). 이상의 결과에서 소 정자의 체외수정능은 난관 상피세포와의 접촉 및 분비액유래 고분자단백분획의 공동효과에 의한 것으로, 난관상피세포와의전배양은 체외에서 수정능획득을 유도하는 것으로 판단된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제24권7호
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• pp.919-928
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• 2011

The pig exhibits true epitheliochorial placentation, where the fetal membrane maintains attachment throughout pregnancy but does not invade into the maternal uterine endometrium. Accordingly, the expression and function of cell adhesion molecules are very important for embryo implantation and the establishment of pregnancy. In our recent microarray analysis, we found that activated leukocyte cell adhesion molecule (ALCAM) was expressed in the uterine endometrium during pregnancy in pigs. To better understand the roles of ALCAM in the establishment and maintenance of pregnancy, we examined ALCAM expression in the uterine endometrium during the estrous cycle and pregnancy in pigs. Real-time RT-PCR analysis showed that ALCAM was differentially expressed in the uterine endometrium during the estrous cycle and pregnancy, with the highest levels on D12 of pregnancy. ALCAM mRNA was localized to the luminal and glandular epithelial cells and to the trophectoderm of conceptuses during early pregnancy. The steroid hormones estrogen and progesterone had no effect on ALCAM expression in an endometrial explant culture study. Further, we found that ALCAM expression in the uterine endometrium from gilts with somatic cell nuclear transfer-derived embryos was not different from that in gilts with embryos from natural mating. ALCAM was expressed in a pregnancy stage- and cell type-specific manner in the uterine endometrium and conceptuses during pregnancy. These findings suggest that ALCAM may play a role in the establishment of pregnancy. Further analysis of ALCAM will provide insight into the implantation process and establishment of pregnancy in pigs.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제22권3호
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• pp.243-248
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• 1999

Sialic acids are key determinants for biological processes, such as cell-cell interaction and differentiation. Sialyltransferases contribute to the diversity in carbohydrate structure through their attachment of sialic acid in various terminal positions on glycolipid and glycoprotein (N-linked and O-linked) carbohydrate groups. Gal$\beta$ 1,3(4)GlcNAc $\alpha$2,3-sialyltransferase (ST3Gal III) is involved in the biosynthesis of $sLe^{X}$ and sLe^{a}$ known as selection ligands and tumor-associated carbohydrate structures. The appearance and differential distribution of ST3Gal III mRNA during mice embryogenesis [embryonic (E) days; E9, E11, E13, E15] were investigated by in situ hybridization with digoxigenin-labeled RNA probes coupled with alkaline phosphatase detection. On E9, all tissues were positive for ST3Gal III mRNA expression whereas ST3Gal III mRNA on E11 was not detected throughout all tissues. On E13, ST3GAl III mRNA was expressed in different manner in various tissues. In this stage, ST3Gal III mRNA was positive only in the liver, pancreas and bladder. On E15, specific signal for ST3GAl III was detected in the liver, lung and forebrain. These results indicate that ST3Gal III is differently expressed at developmental stages of mice embryo, and this may be importantly related with regulation of organogenesis in mice.

• 한국환경생태학회지
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• 제31권6호
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• pp.485-491
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• 2017

개미가 종자를 분산시키는 춘계단명식물 깽깽이풀과 현호색의 전파체 특성, 종자분산 및 발아특성을 밝히고자, 2014년 4월부터 2015년 6월까지 열매 수집, 전파체의 전처리에 따른 포장발아율을 조사하였다. 깽깽이풀의 전파체는 5mm 정도의 황갈~암갈색의 장타원형 종자에 부정형의 백색 지방체가 붙어 있고, 전파체는 15.86mg, 종자는 13.46mg, 지방체는 2.40mg 등의 평균값을 보였으며 지방체의 중량비는 15.13% 였다. 현호색 전파체는 지름이 1.2mm 정도의 광택이 나는 검은색 난형의 종자에 주걱형의 백색 지방체가 붙어 있고, 전파체는 2.58mg, 종자는 2.05mg, 지방체는 0.53mg 등의 평균값을 보였으며, 지방체의 중량비는 20.54% 였다. 털왕개미와 곰개미가 깽깽이풀 전파체를 물어가고, 곰개미와 고동털개미가 현호색 전파체를 물어갔다. 깽깽이풀의 발아율은 지방체 제거 유무에 무관하며, 전처리와 파종 시기 간에는 1% 유의수준에서 통계적 유의성이 인정되었다. 6월 20일에 파종에서, 깽깽이풀은 평균 발아율은 65%, 8월 19일 파종에서는 17.50%, 10월 20일 파종에서는 전혀 발아하지 않았다. 현호색의 발아율은 지방체 제거 유무간에 5%, 파종시기 간에는 1% 유의수준에서 통계적 유의성이 인정되었다. 무처리구에서 평균 54.17%가 발아하였고, 지방체를 제거한 처리구에서 평균 35.0%가 발아하였다. 6월 20일에 파종에서 발아율은 75%, 8월 19일 파종에서 53.75%, 10월 20일 파종에서 5.0%가 발아하였다. 개미가 종자를 분산시키는 춘계단명 식물종의 발아는 성숙하여 종자가 낙하하는 시기에 개미들이 개미집으로 부지런히 물어가는 것을 고려할 때 채종 후 곧바로 파종하는 것이 이들 식물종들이 진화해온 특성에 적합한 방법이며, 가장 높은 발아율을 확보할 수 있는 방법이라 판단된다. 개미가 종자를 분산시키는 춘계단명 식물종들은 개미와의 상리공생을 위하여 지방체를 생산하여 종자에 부착하고, 개미에 의하여 적온 적습한 환경조건, 개미집,으로 이동되어 배가 충분히 자라서 이듬해 봄에 발아에 성공하는 것이라 판단된다.