The cultivation for development of Ascaris suum from the second-stage larvae($L_2$) embryonated egg and the third-stage of rat-derived larvae($L_3$) recovered from lung of rats were performed to use the screening test of anthelmintics in vitro. The preparations of larvae for cultivation were that the artificially-hatched $L_2$ incubated the embryonated eggs of Ascaris suum in 0.1% formalin solution at $25^{\circ}C$ for 28 days and the rat-derived larvae($L_3$) recovered from the lung of rat infected with the embryonated eggs of Ascaris suum on 7 days after infection(DAI). The cultivation for development of Ascaris suum from the embryonated eggs($L_2$) and the rat-derived larvae($L_3$) for 14 days in RPMI medium 1640(with 5% bovine calf serum) were as follows : 1. The sizes of the liberated larvae($L_2$) which were artificially hatched from embryonated eggs with glass beads(diameter 5mm) were $190{\sim}250{\mu}m$ on 1 days in culture(DIC). The second-stage larvae were molted into third-stage larvae(early $L_3$; $250{\sim}300{\mu}m$) and the features of these larvae were first observed such as cephalic cuticle, esophageal lumen and anus etc. on 5 DIC and the sizes of late third-stage larvae were $250{\sim}450{\mu}m$ on 10 DIC. The sizes of early fourth-stage larvae($L_4$) were $500{\sim}700{\mu}m$ and the features of these larvae were more pronounced in internal organs on 15 DIC. 2. The sizes of third-stage larvae($L_3$) recovered from the lung of rats were $1,340{\sim}1,370{\mu}m$ and the feartures of cephalic cuticle, esophageal lumen, intestine, rectum, anus were visualized by inverted microscope on 1 DIC. The fourth-stage larva($L_4$) completed by third ecdysis were recognizable and sizes of early fourth-stage larvae were developed as $1,400{\sim}2,200{\mu}m$ on 5 DIC. The sizes of middle fourth-stage of larva were $1,900{\sim}2,300{\mu}m$ and the thickened epithelial rectum was observed on 10 DIC. The rectum and anus of late fourth-stage larva($L_4$$2,500{\sim}3,200{\mu}m$) had developed completely in RPMI medium 1640 on 15 DIC.
중국산 수입 미꾸리로부터 획득한 악구충 유충의 형태학적 특징을 관찰하고 종 동정하고자 하였다. Early third-stage larva($EL_3$)는 중국산 미꾸리의 내장에서 분리 수집하였고 advanced third-stage larva($AdL_3$)는 $EL_3$를 마우스에 실험감염시킨 후 4주에 회수하였다 미꾸리 및 마우 스로부터 획득한 충체들을 10% formalin으로 고정하였고 alcohol-glycerin 용액을 거쳐 glycerinfelly로 봉입한 후 관찰 및 계측하였다. 총 9 493마리의 중국산 미꾸리를 조사하였던 바 총 369마리의 $EL_3$가 검출되었다. $EL_3$는 평균 0.624{\;}{\times}{\;}0.101 mm 크기이었고 체표면에 약 190 줄의 가로주름(transverse striation)이 나 있었으며 각 주름에는 미세한 가시(cuticularspine)들 이 일정한 간격으로 배열되어 있었다. 충체의 전단에는 1쌍의 구순이 돌출되어 있었고 그 뒤로 근 육성의 인두(평균 0.229 mal)와 갈색의 장이 이어졌으며 후단 근처의 복측에 항문이 개구하였다 특징적인 head bulb(평균 0.034{\;}{\times}{\;}0.071 mm)에는 소구(hooklets)가 평균 36 7개, 39.5개, 41.6개 및 44.3개씩 4줄 배열되어 있었고 head bulb 바로 뒤에는 2쌍의 cervical sac(평균 0.133 mm)이 인두를 따라 길이로 배열되어 있었다. AdLB는 평균 $2.660{\;}{\times}{\;}0.346{\;}mm$ 크기이었고 충체 전단의 구순 특징적인 head bulb(평균 $0.097{\;}{\times}{\;}0.193{\;}mm$), 근육성의 인두(평균 0.755 mm), 2쌍의 cewicalsac(평균 0.355 mm). 갈색의 장 등을 가지고 있었다 대부분의 충체 head bulb에는 소구가 평균 39.0개, 41 9개, 43.9개 및 45.6개씩 4줄 배열되어 있었으나 몇 몇 충체에서는 5번째 줄에 3~7개의 소구가 배열되어 있었다. 이상의 형태학적 특징 및 계측치를 토대로 하여 중국산 수입 미꾸리와 실험감염 마우스로부터 획득한 악구충을 돼지악구충 (Gnathostoma hispidum)의 제3기 유충으로 동정하였다.
우리나라에서 약용으로 가장 많이 활용되고 있는 흰점박이꽃무지의 형태와 생육특성에 관하여 조사하였다. 성충은 야외에서 7월 상순 하순부터 출현하였으며 출현빈도가 가장 높은 시기는 8월 상순이었다. 또한 소수의 개체는 성충으로 월동하였다. 유충은 부엽토속에서 서식하며 11월까지는 모두 3령이 되어 월동하였다. 실내에서 암컷 1마리당 평균 152개를 산란하였고, $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$에서 사육한 결과 알, 유충, 번데기 기간은 모두 높은 온도에서 발육기간이 짧았다. 성충수명은 암컷이 수컷보다 길었고, 집단사육 시보다는 개별사육 시 길었고, 높은 온도보다는 낮은 온도에서 길었다.
중국산 수입 미꾸리에서 검출한 돼지악구충(Gnnthostoma hispidum)의 early third-stage larva($EL_3$)와 $EL_3$를 마우스에 실험감염시킨 후 4주에 회수한 advanced third-stage larva($AdL_3$)의 표피 미세구조를 주사전자현미경으로 관찰하였다 미꾸리 및 마우스로부터 획득한 충체들을 0.1 M cacodylate buffer로 몇 차례 씻고 2.5% glutaraldehyde 용액으로 고정하였으며 탈수. 건조. 표면처리 등의 과정을 거친 후 한국 ISI사의 DS-l30C 주사전자현미경으로 관찰하 였다. 충체의 전단에는 반달 모양의 구순이 구강을 중심으로 좌우에 1쌍 돌출되어 있었으며 각 구 순에는 한 개의 작은 amphid를 중심으로 양쪽에 labial papillae가 한 개씩 존재하였다 Head bulb에 배열되어 있는 모든 소구들은 끝이 날카롭고 후방으로 휘어져 있었으며 갈고리 모양이었다. ELB의 전 체표면에는 가로주름(transverse striation)이 나 있었고 각 주름에는 피극(cuticular spine)들이 일정한 간격으로 배열되어 있었다. 충체의 앞 부위 체표면에는 길이 약 $1.8{\m\textrm{m}}$의 둔단인 피극이. 중간부위와 후반부의 체표면에는 약 0.75Mn 길이의 피극이 배열되어 있었다. AdL3의 앞 부위 체표면에는 길이 약 4.5 pm의 끝이 뽀족한 피극이, 중간 부위에는 약 $1.75{\m\textrm{m}}$ 길이의 피극이 배열되어 있었으며 됫 부위 체표면에는 벨벳형의 체표주름(velvety cuticular folds)과 미세한 피극이 분포하였다. 충체의 정중면 7번과 8번 가로주름 사이에 한 개의 cewicalpapilla가 분포하였고 후방 약 114지점에서 한 개의 bodypapilla가 관찰되었다. 타원형 와 배설공은 17번과 18번 가로주름 사이에서 개구하였다. 이상에서 $EL_3$와 AdL3 간에 성장 발육 에 따른 미세구조의 차이는 인정되나 근본적인 것은 대동소이하다. 그러나 관찰된 특징적인 SEM 소견들이 악구충의 유충 감별에 도움을 줄 수 있을 것으로 생각된다.
1992년 3월에 부산시 중구 남포동 소재 자갈치시장에서 구입한 중국산 미꾸리 376마리에서 6마리의 악구충 유충을 검출하였다. 유충들은 크기가 평균 $674{\;}{\times}{\;}114{\;}\mu\textrm{m}$이었고 특징적인 head bulb와 2쌍의 cervicalsac(평균 $188{\;}\mu\textrm{m}$)을 가지고 있었으며 전체표면에는 미세한 가시가 질서정연하게(평균 229열) 배열되어 있었다. 충체의 전단에는 구순이 돌출되어 있었고 그 뒤로 식도(평균 $306{\;}\mu\textrm{m}$)와 장이 이어졌으며 충체 후단 근처의 복측에 항문이 개구하였다. Head bulb에는 소구 (hooklet)가 평균 34.5개. 36.7개 및 39.7개씩 3열로 배열되어 있었다. 충체의 계측치 및 형태학 적 특징을 근거로 Gnakhostoma nipponicum의 제3기 유충으로 동정하였으며 중국산 미꾸리가 이 선충의 제2중간숙주임을 확인하였다. 이러한 수입 식용동물들이 국내에는 없는 새로운 기생충 질환의 감염원이 될 수 있을 것으로 판단된다.
초파리에서 정상 발생동안 HSP23의 합성과 생리적 기능이 20-hydroxyecdysone과 어떤 연관을 가지는지를 조사하였다. HSP23 유전자의 발현을 Northern blotting과 Western blotting으로 조사하였고, 20HE의 분비 양상은 radioimmunoassay 법으로 조사하였다. HSP23은 3령기 초기부터 발현이 시작되어 pupariation 시기에 급격한 증가를 보인 후 감소하였다. HSP23과 20HE의 합성을 비교하였을 때, 3령기-초기 pupa 시기에 두 분자가 모두 합성의 최고치를 보이며 유사한 합성 양상을 보였지만 그 외 시기는 일치하지 않았다. 따라서 20HE는 larva에서 pupa로의 변태 시기에 HSP23 유전자의 발현을 조절하며, 또 HSP23을 이용하여 변태과정의 일부를 조절하는 것으로 보인다.
초파리 발생과정에서 세포사멸에 관여하는 유전자인 reaper(rpr), grim, dcp-1, diap1, diap1, diap2의 발현양상을 경제적 RT-PCR 방법으로 분석하였다. 세포사멸 유도 유전자인 rpr, grim의 발현양상은 발생단계에 따른 ecdysone titer 변화 양상과 매우 유사하였다. Effector caspase인 dcp-1 전사체는 초기 배와 암컷 성체에서 높은 발현을 보였다. 반면에 세포사멸 억제인자인 diap1과 diap2 전사체는 세포사멸 유도 인자인 rpr과 girm 전사체와 서로 상반적인 양상으로 발현되었다. 또한, 유주 3령 유충의 발생단계 별로 침샘조직과 성체원기조직에서 rpr, diap2, dcp-1의 전사체의 양적 변동을 분석하였다. rpr, diap2의 전사체양은 두 조직에서 서로 상반적으로 변화하였다. 이 결과는 정상 발생과정에서 세포죽음 관련유전자들의 발현이 ecdysone 신호에 의해 조절됨을 암시해 주었다.
이 연구는 꼼치(Liparis tanakae)의 난발생 과정, 자치어의 발육에 따른 형태를 관찰하여 어획량이 급격히 감소하고 있는 꼼치의 자원 회복을 위한 연구에 도움이 되고자 한다. 여수시 돌산 인근 해역에서 채집된 어미로부터 자연 산란시킨 난을 대상으로 난발생 및 자치어 형태발달을 관찰하였고, 사육 과정 중 수온은 12.3~13.5℃(평균 12.7℃)를 유지하였다. 수정란의 난경은 1.57~1.79 mm(평균 1.71 mm, n=100)이었고 형태는 구형이었으며, 침성점착난이었다. 수정 후 4시간 35분에 2세포기에 달하였고, 수정 후 74시간 10분에는 배체가 형성되기 시작하였다. 수정 후 106시간에 꼬리 끝부분에 쿠퍼씨포가 생겼으며, 수정 후 176시간에는 쿠퍼씨포가 소실되었다. 수정 후 526시간에 부화가 시작하였고 이포가 발달되어 눈 바로 뒤쪽에 위치하였다. 부화 직후의 전기자어(전장 5.70~6.24 mm(평균 5.98 mm, n=20))는 입과 항문이 열려 있었고, 부화 후 3일째 자어(전장 5.89~6.42 mm 평균 6.13 mm, n=20))는 아래턱 안쪽과 꼬리에 흑색소포가 나타났다. 부화 후 16일째 자어(전장 6.43~7.38 mm(평균 7.13 mm, n=20))는 난황과 유구가 대부분 흡수되었고, 머리 부분에 흑색소포가 나타났으며, 부화 후 63일째 치어(전장 11.95~13.02 mm(평균 12.16 mm, n=20))는 머리 부분이 현저히 발달하였고, 체형이나 반문이 성어와 닮아 있어 치어기로 이행하였다. 이 연구는 꼼치의 난발생 및 자치어 형태를 통해 어류의 종 보존 및 복원을 위한 양식 기술 확보 자료로 사용될 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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