• 생명과학회지
• /
• 제17권1호
• /
• pp.132-136
• /
• 2007

E. coli에서 Pseudoalteromonas elyakovii 유래의 alginate lyase유전자(aly)를 발현시킬 때, 대부분의 단백질이 불용성 내포체 형태로 발현됨을 확인하였다. Alginate lyase를 가용성 활성형으로 생산하기 위해 aly와 DnaK/DnaJ/GrpE 또는 aly와 GroEL/ES을 공발현하는 형질전환체를 얻었다. 공발현 결과, 단백질의 올바른 접힘을 도와주는 DnaK/DnaJ/GrpE chaperone이 가용성 및 활성형의 alginate lyase 생산에 매우 효과적임을 알 수 있었다. DnaK/DnaJ/GrpE chaperone의 발현에 유도제인 L-arabinose 최적 농도는 0.05 mg/ml이었으며, 이러한 공발현에 의해 약 34%의 alginate lyase가 가용성 분획에서 생산되었다. 또한 10%의 cetylpyridinium chloride를 첨가함으로써, 공발현 콜로니 주위에 투명환이 형성됨을 확인할 수 있었고, 이는 활성형 alginate lyase 효소에 의해 alginate가 분해되었음을 시사하였다.

• 한국정보통신학회논문지
• /
• 제8권4호
• /
• pp.926-932
• /
• 2004

1981년부터 2002년까지의 적조 발생에 대한 변화를 보면, 1995년 이후로 매년 적조가 발생했으며 특히 강우량이 많은 7∼8월에 집중하였다. 다중회기분석에서 적조발생건수와 기상인자 (수온, 강우량, 일조시수 그리고 풍속) 간의 상관성은 대체로 높게 나타났다 (R ＝ 0.856). 단, 수온은 15∼$30^{\circ}c$의 범위 내에서 적조 성장에 제한 인자로 작용한다는 것을 알 수 있었다. 수온이 $15^{\circ}c$되는 날로부터 적조가 발생하는 날까지 걸리는 일수는 78∼104일 정도이며, 해역에 따라 다소 약간의 차이를 보였다. 일반적으로 남해중부 및 남해동부해역이 남해서부 및 동해남부해역에 비해서 적조 발생 빈도가 높게 나타났는데, 주로 적조경보의 범주에 들어간다. 이때 대체로 두 해역은 24.$5^{\circ}c$∼$25^{\circ}c$의 높은 수온과 1000 Cells/ml 이상의 높은 밀도를 보였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
• /
• 제36권4호
• /
• pp.311-319
• /
• 2009

목 적: 인간 배아줄기세포 (human embryonic stem cells; hESCs)는 미분화 상태로 무한 증식할 수 있는 자가 증식(self-renewal) 능력과 인체의 모든 세포로 분화할 수 있는 전분화능 (pluripotency)의 특징을 가진 세포로, 손상된 세포를 건강한 세포로 대체하고자 하는 세포치료 (cell therapy) 연구에 활용하기 위한 세포 공급원 (cell source)으로 제시되고 있다. 그러나 인간 배아줄기세포는 확립된 초기에 세포를 안정적으로 배양하고 유지하는 과정이 쉽지 않으며, 특히 동결보존되어 있던 세포를 해동한 후 배양할 때 자연 발생적 분화가 높기 때문에 세포주의 유지에 많은 어려움이 따른다. 본 연구에서는 동결보존되어 있던 초기 계대의 인간 배아줄기세포를 해동하여 다시 배양할 때 자연 발생적 분화 부분을 기계적 분리 방법으로 제거하여 미분화 상태의 세포를 보다 빠르게 확보하기 위한 효율적인 방법에 대해 알아보고자 하였다. 연구방법: 인간 배아줄기세포를 계대 배양한지 4일이 되는 날, 50% 이상의 자연 발생적 분화가 나타난 세포군에서 분화된 부분만을 절개용 유리 피펫 (drawn-out dissecting pasture pipette)을 사용하여 기계적인 방법으로 제거하였다. 이후 지속적으로 배양액을 교환해 주며 세포군의 제거된 부분을 7일째 되는 날까지 관찰하였다. 결 과: 기계적 분리 방법을 사용하여 인간 배아줄기세포의 자연 발생적인 분화 부분을 제거한 빈 공간에 미분화상태의 인간 배아줄기세포가 분열하여 채워지는 것을 관찰하였다. 또한, 이 실험 방법을 연속 두 번 적용하여 배양했을 때 미분화 세포로 회복되는 세포군의 비율이 조금 더 높아지는 것을 확인할 수 있었다. 결 론: 동결되어 있던 초기 계대 인간 배아줄기세포의 해동 후, 자연 발생적 분화에 의해 미분화 상태를 유지하는 세포의 수가 적어 계대를 유지 하기가 어려울 때 이와 같은 기계적 분리 방법을 사용하여 자연 발생적 분화 부분을 제거한 후 배양을 지속하는 것이 단기간 내에 미분화 상태를 유지하는 인간 배아줄기세포의 양적 확보를 위한 효율적인 방법이라고 사료된다.

• Animal cells and systems
• /
• 제6권3호
• /
• pp.227-232
• /
• 2002

GroESLx proteins of symbiotic X-bacteria were overproduced in Escherichia coli and their structural characteristics were assayed after simple purification. The GroESx and GroELx were heat-stable at 8$0^{\circ}C$ and 5$0^{\circ}C$, respectively. After heat-treatment, GroESx was purified by DEAE Sephadex A-50 chromatography and GroELx was purified by step- and linear sucrose density gradient ultracentrifugation. Molecular masses of GroESx and GroELx were 50-80 kDa and 800 kDa, respectively, as estimated by sucrose density gradient ultracentrifugation. In chemical cross-linking analysis, subunits of GroESx were mostly cross-linked by incubation for 3 h in 0.4% glutaralde-hyde and GroESx was found to be composed of homo-heptamer subunits. Those of GroELx were cross-linked within 10 min in 0.3% glutaraldehyde and GroELx was in two stacks of homo-heptamer subunits. On the other hand, GroESx and GroELx proteins in a solution could not be cross-linked even after incubation for 3 h in 0.5% glutaraldehyde. GroELx was stable at 4-37$^{\circ}C$. In the presence of both GroESx and ATP, GroELx$_{14}$ was stable at 37$^{\circ}C$ but not at 4$^{\circ}C$ or 24$^{\circ}C$. Thus, we confirmed the oligomeric properties of GroESx$_{7}$ and GroELx$_{14}$ and their stability to heat and in the interaction with GroESx.x.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제23권3호
• /
• pp.133-139
• /
• 2008

DNA methylation is one of the reasons for poor survival of clone animals. The OCT-4 gene is essential for maintaining pluripotency of embryonic stem (ES) cells and early embryos. We previously reported that the 5'-promoter region of Oct-4 gene was a target of DNA methylation and the methylation status was changed variously during embryonic development in bovine. The study conducted to examine the expression and methylation pattern of tissue-dependent differentially methylated region (T-DMR) of Oct-4 gene in bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT) and in vitro fertilization (IVF) blastocysts. The Oct-4 gene expression was evaluated by RT-PCR and fluorescence immunocytochemistry. The methylation pattern of T-DMR was analyzed using restriction mapping and bisulfite sequencing methods. The Oct-4 transcripts were highly expressed in IVF, while they were not expressed in SCNT. The Oct-4 protein was not detected or expressed at very low level in SCNT, the intensity of Oct-4 protein, however, was strong in IVF. On the other hand, the T-DMR of Oct-4 gene was hypermethylated in SCNT compared to that of IVF. These results suggested that expression and the failure of demethylation of Oct-4 gene was closely associated with incomplete development of SCNT embryos.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제9권3호
• /
• pp.255-260
• /
• 1994

원시생식세포(primordial germ cell; PGC)는 성성숙 이후에 기능을 갖는 생식세포의 근원이 되는 세포로서, 다능성을 갖고 있는 것으로 알려져 있다. 그러므로 chimera 및 유전자 변환동물 생산을 위해 널리 사용되어 온 배아주(embrynic stem; ES)세포를 대신할 다른 세포계라고 생각되어져 많은 연구가 진행되고 있다. 본 실험은 체외배양을 통하여 원시생식세포의 증식과 확립을 위해 배양조건을 구명하고, 또한 성장인자의 효과를 검증하기 위하여 실시되었다. 원시생식세포는 12.5일째의 ICR 생쥐태아의 원시생식선 융기조직으로부터 추출하였으며, DMEM + 20% FCS + nucleosides + antibiotics로 조성된 sDMEM 배양액을 사용하여 mitomycin C로 전처리한 되먹임세포단층(feeder layer)위에서 체외배양하였다. bFGF 및 LIF를 20, 40ng/ml농도로 각각 또는 함께 첨가하여 성장인자의 효과를 검토하였다. 원시생식세포는 성에 따라 유의적인 colony 형성율을 보였고(♂:1.9 colonies / genital ridge, ♀:1.3 colonies / genital ridge), bFGF 및 LIF의 첨가 및 첨가농도에 따라서도 유의성 있는 결과를 보였다(0.3~1.9 colonies / genital riege). 그러나 3회 이상 계대배양을 할 경우, 원시생식세포의 colony를 4% prarformaldehyde로 20분간 고정한 후, tris-maleate buffer(pH 9.0)로 10분간 3회 세정하였다. Fast Red로 염색을 실시한 결과, 대부분의 colony가 염색반응을 보여 다능성을 갖는 원시생식세포의 colony임이 입증되었다. 그러나 대부분의 colony가 3회 이상의 계대배양시 생종율이 급격히 떨어지는 것을 감안하면, 또 다른 미지의 성장인자나 보다 적절한 배양조건이 요구된다고 생각된다.

• 한국식물병리학회:학술대회논문집
• /
• 한국식물병리학회 1997년도 Proceedings of special lectures on Recent Research Trend of Plant Pathology
• /
• pp.5-21
• /
• 1997

Unique virus-like particles were associated with five eriophyid mite-borne plant diseases of unknown etiology; fig mosaic, redbud yellow ringspot, rose orsette, thistle mosaic, and high plains disease of corn and wheat. Quasi-spherical, double membrane-bound particles (DMPs), 120 - 200 nm in diameter, were observed in the cytoplasm of all cell types in symptomatic leaves of infected plants. No DMPs were observed in symptomless plants. The DMPs in symptomatic thistles were associated with two types of inclusions, electron-dense amorphous material and tubular aggregates. Similar amorphous inclusions were also found in corn and wheat with high plains disease, while tubular inclusions were observed in figs with mosaic symptoms. The particles and inclusions were similar in some aspects to immature particles associated with viroplasms of animal and insect poxviruses and also to the double-enveloped particles of tomato spotted wilt virus associated with viroplasms during early stages of infection, but were unique and unlike any known plant viruses. The DMPs and associated viroplasm-like inclusions in the high plains disease were specifically immunogold labeled in situ with the disease-specific antiserum. Thread-like structures, similar to tenuivirus particles, present in the partially purified virus preparations were also immunogold labeled with the antiserum. It is suggested that the thread-like structures are derived from the DMP. In many cells of symptomatic corn and wheat samples, DMPs occurred together with flexuous rod-shaped particles and cylindrical inclusions of wheat streak mosaic potyvirus (WSMV), suggesting that the disease is caused by a mixed infection of WSMV and the agent represented by the DMPs. Based on cytopathology, symptomatology and mite and/or graft-transmissibility, the five diseases described in this paper are potentially caused by virus(es) and the DMPs associated with these diseases may represent virus particles. If the DMPs are indeed viral in nature, they would comprise a new group of plant viruses.

• 한국식품과학회지
• /
• 제22권2호
• /
• pp.192-198
• /
• 1990

콩(단엽콩, 광교, $ES_2)을 조리 $(100-135^{\circ}C)$하는 과정에서 일어나는 텍스쳐, 고형물 및 단백질의 변화를 분석하였다. 콩의 텍스쳐는 Instron을 이용하는 Puncture test로써 측정하였으며 조직의 변화과정을 주사전자현미경 (SEM)을 이용하여 미세구조를 관찰한 결과 수화가 되면서 세포벽이 허물어지고 protein body가 드러남을 관찰할 수 있었고 일정온도에서 조리 시간이 길어짐에 따라 세포벽이 서로 분리되고 그 구조가 흐트러짐을 알 수 있었다. 침출액 중의 고형물은 조리시간이 길어질수록 많이 용출되었으며 $100^{\circ}C$. 80분에서 11.5-13.2% 정도가 되었다. 용출된 총 고형물 중 11-21%는 단백질이었으며 단백질 용출 비율은 조리시간에 따라 증가하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제28권5호
• /
• pp.739-747
• /
• 2018

The low solubility and high-cost recovery of Propionibacterium acnes polyunsaturated fatty acid isomerase (PAI) are key problems in the bioproduction of high value-added conjugated linoleic acid (CLA). To improve the solubility of recombinant PAI, six chaperone proteins were coexpressed with PAI. Introduction of GroELS proteins dramatically improved the PAI solubility from 29% to 97%, with increased activity by 57.8%. Combined expression of DnaKJ-GrpE and GroELS proteins increased the activity by 11.9%. In contrast, coexpression of DnaKJ-GrpE proteins significantly reduced the activity by 57.4%. Plasmids pTf16 harboring the tig gene and pG-Tf2 containing the tig and groEL-groES genes had no visible impact on PAI expression. The lytic protein E was then introduced into the recombinant Escherichia coli to develop a cell autolysis system. A 35% activity of total intracellular PAI was released from the cytoplasm by suspending the lysed cells in distilled water. The PAI recovery was further improved to 81% by optimizing the release conditions. The lipase from Rhizopus oryzae was also expressed in E. coli, with an extracellular activity of 110.9 U/ml. By using the free PAI and lipase as catalysts, a joint system was established for producing CLA from sunflower oil. Under the optimized conditions, the maximum titer of t-10,c-12-CLA reached 9.4 g/l. This work provides an effective and low-cost strategy to improve the solubility and recovery of the recombinant intracellular PAI for further large-scale production of CLA.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
• /
• 제13권5호
• /
• pp.2409-2414
• /
• 2012

Objective: Traditional Chinese herbal medicines have a very long history. Rosa roxburghii Tratt and Fagopyrum cymosum are two examples of plants which are reputed to have benefits in improving immune responses, enhancing digestive ability and demonstrating anti-aging effects. Some evidence indicates that herbal medicine soups containing extracts from the two in combination have efficacy in treating malignant tumors. However, the underlying mechanisms are far from well understood. The present study was therefore undertaken to evaluate anticancer effects and explore molecular mechanisms in vitro. Methods: Proliferation and apoptosis were assessed with three carcinoma cell lines (human esophageal squamous carcinoma CaEs-17, human gastric carcinoma SGC-7901 and pulmonary carcinoma A549) by MTT assay and flow cytometry, respectively, after exposure to extract from Rosa roxburghii Tratt (CL) and extract from Fagopyrum cymosum (FR). $IC_{30}$ of CL and FR were obtained by MTT assay. Tumor cells were divided into four groups : control with no exposure to CL or FR; CL with $IC_{30}$ CL; FR with $IC_{30}$ FR; CL+FR group with 1/2 ($IC_{30}$ CL + $IC_{30}$ FR). RT-PCR and Western blot analysis were used to detect the expression of Ki-67, Bax and Bcl-2 at mRNA and protein levels. Results: Compared with the CL or FR groups, the combination of CL+FR showed significant inhibition of cell growth and increase in apoptosis; the mRNA and protein expression levels of Ki-67 and Bcl-2 in CL+FR group were all greatly decreased, while the expression of Bax was markedly increased. Conclusions: These results indicate that the synergistic antitumor effects of combination of CL and FR are related to inhibition of proliferation and induction of apoptosis.