• 제목/요약/키워드: ELISA method

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목단피의 NF-κB와 MAPKs 억제를 통한 Pro-inflammatory Cytokines 활성에 미치는 효과 (The Effect of Moutan Cortex on Pro-inflammatory Cytokines through NF-κB & MAPKs pathway in HMC-l)

  • 박주호;김경준
    • 한방안이비인후피부과학회지
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    • 제22권2호
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    • pp.1-18
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    • 2009
  • Objective : Moutan Cortex (the root bark of Paeonia suffruticosa Andr.) is widely used in oriental medicine as a remedy for inflammation. However, as yet there is no clear explanation of how MC(Moutan Cortex) affects the production of inflammatory cytokine. This study was to determine the effects of Essence extracted MC on the mast cell-mediated inflammatory responses. Method : We observed the effect of MC on compound 48/80-induced histamine release of rat peritoneal mast cells and the effect of administering MC on PCA in rat. We measured the amount of inflammatory cytokine production induced by the phorbol myristate acetate (PMA) plus calcium ionophore(A23187) in the human mast cell line (HMC-1) incubated with various concentrations of MC. The TNF-$\alpha$ protein levels were analysised by Western blot. The TNF-$\alpha$, IL-6 and IL-8 secreted protein levels were measured by the ELISA assay. The TNF-$\alpha$, IL-6 and IL-8 mRNA levels were measured by the RT-PCR analysis. NF-$\kappa$B, phospho-I$\kappa$B and MAPKs were exmined by Western blot analysis. The NF-$\kappa$B promoter activity was examined by luciferase assay. Result : 1. Enzyme immunoassay indicated that MC suppressed histamine secretion of rat peritoneal mast cells. 2. In PCA dependent on IgE, MC had anti-allergic effect of the internal surface of rat skin. 3. Western blot indicated that MC decreased TNF-$\alpha$ protein levels. 4. ELISA indicated that MC decreased TNF-$\alpha$, IL-6 but MC had no significant effect on IL-8 in HMC-1 cells. 5. RT-PCR indicated that MC decreased TNF-$\alpha$, IL-8 but MC had no significant effect on IL-6 in HMC-l cells. 6. Western blot indicated that MC suppressed the induction of MAPKs, NF-$\kappa$B & phospho-I$\kappa$B activity in HMC-1 cells. 7. Luciferase assay indicated that MC suppressed the PMA plus A23187-induced NF-$\kappa$B promoting activityin HMC-1 cells. Conclusion : In this study, we have found that MC is an inhibitor of NF-$\kappa$B, MAPKs & cytokines on the mast cell-mediated inflammatory responses.

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가지과 종자에서 Ralstonia solanacearum의 검출을 위한 PCR 방법 (Detection of the Causal Agent of Bacterial Wilt, Ralstonia solanacearum in the Seeds of Solanaceae by PCR)

  • 조정희;임규옥;이혁인;백지현;차재순
    • 식물병연구
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    • 제17권2호
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    • pp.184-190
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    • 2011
  • Ralstonia solanacearum은 풋마름병(bacterial wilt)을 일으키는 종자 전염 병원세균으로 한번 발생하면 방제가 매우 어려운 병이다. 따라서 Ralstonia solanacearum는 한국을 비롯한 여러 나라에서 식물검역병으로 지정되어있다. 본 연구에서는 가지과 종자로부터 Ralstonia solanacearum 검출할 수 있는 PCR 방법을 개발하였다. 프라이머 RSJH-F와 RS-JH-R는 오직 Ralstonia solanacearum race 1, 3으로부터 401 bp 크기의 DNA를 증폭하였다. 1차 PCR 증폭산물의 내부에서 디자인 된 nested PCR 프라이머인 RS-JH-F-ne and RS-JH-R-ne는 오직 Ralstonia solanacearum로부터 131 bp 크기의 DNA를 증폭하였다. 이들 프라이머들은 토마토, 고추를 포함한 가지과 종자 추출액으로부터 어떤 비특이적 DNA도 증폭하지 않았다. 인공적으로 병원균을 접종한 가지과 종자를 이용하여 병원균 검출 민감도를 비교하였을 때, 본 연구에서 개발한 nested PCR 방법이 ELISA나 반선택배지보다 100배 높은 민감도를 보여주었다. 따라서, 본 연구에서 개발한 PCR 방법들은 가지과 종자로부터 Ralstonia solanacearum를 검출하는 매우 유용한 방법으로 생각된다.

Monoclonal antibodies to recombinant Der p2, a major house dust mite allergen: specificity, epitope analysis and development of two-site capture ELISA

  • Yong, Tai-Soon;Lee, Sang-Mi;Park, Gab-Man;Lee, In-Yong;Ree, Han-Il;Kim, Kyung-Sup;Oh, Sang-Hwan;Park, Jung-Won;Hong, Chein-Soo
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제37권3호
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    • pp.163-169
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    • 1999
  • House dust mite allergens have been well established as sensitizing agents that are important in the induction of allergic diseases. In order to analyze epitopes of the allergen and to develop a quantitative method of the allergen exposure, monoclonal antibodies against a recombinant Der p 2 (rDer p 2), one of the major allergens of Dermatophogoides pteronyssinus, were produce. Four monoclonal antibodies produced wee species-specific and did not cross-react to the D. farinae crude extract. Two of the monoclonal antibodies were found to be IgG1 and the others were IgM. For the analysis of epitopes, a Der p 2 cDNA encoding 126 amino acids (aa) was dissected into three fragments with several overlapping peptides, A (aa residues 1-49), B (44-93), and C fragment (84-126). Three monoclonal antibodies showed reactivities to the recombinant B fragment and to the full-length rDer p 2, but one monoclonal antibody reacted only with the full-length rDer p 2. Two-site capture ELISA was developed using two different monoclonal antibodies for quantitating Der p2 in house dust. The sensitivity limit was 4ng/ml with rDer p2 and $8{\;}\mu\textrm{g}/ml$ with the d. pteronyssinus crude extract. The result suggested that the assay using monoclonal antibodies against rDer p2 could be useful for the environmental studies and for the standardization of mite allergen extracts.

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심장사상충 감염견에서 Flexible Alligator Forceps을 이용한 외과적 치료 (The Efficacy of Surgical Treatment with Flexible Alligator Forceps in Dogs with Heartworm Infection)

  • 윤헌영;정순욱;김준영;한현정;장하영;이보라;남궁효선
    • 한국임상수의학회지
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    • 제22권4호
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    • pp.309-313
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    • 2005
  • 본 연구는 심장사상충 감염견에 있어서 flexible alligator forceps(FAF)을 이용한 외과적 치료법의 효능을 평가하기 위해 실시되었다. FAF를 이용한 외과적 치료를 위해 평균 연령 $5.3\pm3.0\;(mean{\pm}S.D.)$ 년, 평균 체중 $9.3\pm6.5(mean{\pm}S.D.)kg$인 20마리의 심장사상충 감염견을 실험에 사용하였다 그 중 수컷 10마리, 암컷 10마리였다. 성충 제거를 위한 외과적 치료를 isoflurane호흡 마취 하에 FAF완 투시기를 이용하여 실시하였다 FAF를 이용한 외과적 치료방법의 평가를 위해 제거율과 수술시간을 측정하였고 제거 부위를 확인하였다 제거되지 알고 남아 있을 수 있는 성충 확인을 위해 항원 ELISA kit검사와 부검을 실시하였다. 제거율은 심장사상충이 완전히 제거된 15마리를 포함 전체 심장사상충의 $91.4\%$ 였고 수술에 걸린 평균 시간은 $30.0\pm7.6(mean{\pm}S.E.)$이었다. 또한 심장사상충은 우심실, 주폐동맥, 우폐동맥, 그리고 좌폐동맥에서 제거되었다 결론적으로, FAF를 이용한 외과적 치료법은 높은 제거율, 짧은 수술 시간, 그리고 다양한 제거부위와 같은 장점을 보이는 효과적이 방법이며 심장사상충 감염견에서 적용될 수 있는 좋은 치료법으로 사료된다.

rmIL-5로 유도된 호산구의 활성화 및 성장에서 중루의 천식반응 억제효과 (Inhibitory effects of Paridis Rhizoma in the activation and proliferation of eosinophils: implications on its regulatory roles for asthma)

  • 신미경;길기정;이영철;김진숙;서영배;노성수
    • 대한본초학회지
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    • 제20권2호
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    • pp.159-169
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    • 2005
  • Objectives : This study was carried out for the purpose of knowing the effect from anti-arthma action of the abstraction from a extract of Paridis Rhizoma(EPR). In order to know what the effect of controlling an abstraction from Paridis Rhizoma. and about the expression of B cells and Ig E cells, mast cells it was necessary for it to be activated by ovalbumin. Methods : In order to know what the effect was on the organization of cytokine gene expression from The increase and divorce of the B cells and allergic acting by EPR, we found it necessary to examine the BALF. At the same time, as we examined the histamine release by ELISA method, we also examined the effect of EPR. Results : EPR at $100\;{\mu}g/ml$, the highest concentration examined did not have any cytotoxic effects on mLFCs. In FACS analysis, number of granulocyte/lymphocyte, $CD3e^+/CCR3^+,\;CD4^+\;and\;CD23^+/B220^+$ in asthma-induced lung cells were significantly decreased by EPR treatment compared to the control group. In RT-PCR analysis, mRNA expression for CCR3, eotaxin and histamine in asthma-induced lung cells, which was induced by rIL-3 plus rmIL-5 treatments, was significantly decreased by EPR treatment. In ELISA analysis, production levels of IL-4, IL-13 and histamine in asthma-induced lung cells, which were induced by rIL-3 plus rmIL-5 co-treatment, were significantly decreased by EPR treatment. EPR treatments significantly inhibited the proliferation of eosinohils prepared from asthma-induced mouse lung tissues compared to the non-EPR treated control cells. Immunohistochemical analysis revealed that EPR treatment significantly decreased the levels of eosipnphil activation compared to non-treated cells. Conclusion : The present data suggested that Paridis Rhizoma may have an effects on the inhibition of parameters associated with asthma responses in eosinpophils, and thus implicate the possibility for the clinical application of Paridis Rhizoma.

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서울 경기지역의 공원 연못 및 한강 수계내 조류독소 Microcystin-LR의 분포 (Distribution of Cyanotoxin Microcystin-LR in Han River System and Ecological Park in Seoul and Kyunggi Districts)

  • 서미연;김백호;한명수
    • 생태와환경
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    • 제38권2호통권112호
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    • pp.237-248
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    • 2005
  • 서울 경기지역 공원 연못 및 한강 수계내의 수중 조류독소 Microcystin (MC)의 분포를 파악하기 위하여, 수도권 공원 연못 7개소, 한강수계 4개소, 경안천 1개소, 양수리 육각지 1개소, 대조군 2개소를 포함 총 15개 지점을 대상으로 강우가 적은 저온기 동안, 3차례에 걸쳐 수중내 환경요인, 조류 현존량, 조류 독소량을 조사하였다. 조류독소는 유도체중 가장 독성이 강한 Microcystin-LR (MCLR)만을 대상으로 하였으며 ELISA법으로 분석하였다. 조사기간 동안 수온($0.4\;{\sim}\;21.9^{\circ}C$)을 비롯한 대부분의 환경요인들은 계절성과 지역성이 뚜렷하였다. 조류 현존량은 수온 변화에 민감하였고 (r = 0.307), Microcystis aeruginosa를 포함하여 남조류는 경복궁 경회루, 석촌호수. 양수리 육각지 등에서 우점하였다. 조류독소 MCLR (측정한계 $0.05\;{\mu}g\;L^{-1}$) 는 남조 Microcystis aeruginosa출현이 높았던 지점에서 높게 검출되었으며, 조체성과 용존성을 합한 총 MCLR은 1차조사시 경복궁 경회루 ($1.39\;{\mu}g\;L^{-1}$), 석촌호수($0.55\;{\mu}g\;L^{-1}$), 양수리 육각지 ($0.59\;{\mu}g\;L^{-1}$)에서 각각 높게 나타났으나,2, 3차 조사에서는 양수리 육각지에서만 검출되었다. 남조류 총현존량은 조류 현존량 (r = 0.066)이나 엽록소 a량(r = -0.058)과는 낮은 관계를보였으며, M. aeruginosa 현존량(r = 0.766)과는 매우 높은 관계를 나타냈다. 조류독소 MCLR은 남조 M. aeruginosa 현존량이 높았던 지점에서 높게 검출되었다(조체성: r = 0.526, 용존성: r = 0.433).따라서, 서울, 경기지역 공원 연못이나 한강수계의 조류독소는 주로 정체성 연못에서 남조 Microcystis aeruginosa에 의해 형성되지만, 여가활동이나 상수원 공급에는 위험성이 낮은 것으로 판단되었다.

강낭콩 종자에서 Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola의 검출을 위한 PCR 프라이머의 개발 (Development of PCR Primers to Detect Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola from the Bean Seeds)

  • 조정희;정민정;송민지;임규옥;이혁인;김정희;백지현;차재순
    • 식물병연구
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    • 제16권2호
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    • pp.129-135
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    • 2010
  • 강낭콩 종자로부터 강낭콩(Phaseolus vulgaris L.)에서 halo blight(달무리마름병)을 일으키는 종자 전염 병원세균인 Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola를 검출하는 PCR 방법을 개발하였다. 프라이머 Psp-JH-F와 Psp-JH-R는 오직 Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola로 부터 513 bp 크기의 DNA를 증폭하였다. 1차 PCR 증폭 산물의 안쪽에서 디자인 한 nested PCR 용 프라이머인 psp-JH-F-ne and psp-JH-R-ne는 오직 Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola로부터 169 bp 크기의 DNA를 증폭하였다. 이들 프라이머들은 강낭콩, 완두, 대두 등을 포함 콩과 종자 추출액으로부터 어떤 비특이적 DNA도 증폭하지 않았다. 인공적으로 병원균을 접종한 강낭콩 종자를 이용하여 병원균 검출 민감도를 비교하였을 때, 본 연구에서 개발한 nested PCR 방법이 ELISA나 선택배지 보다 훨씬 높은 민감도를 보여주었다. 본 연구에서 개발한 PCR방법들은 강낭콩 종자로부터 Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola를 검출하는 매우 유용한 방법으로 생각된다.

생체 내 상에서 Candida albicans로 유도한 염증인자에 미치는 스쿠알렌의 효과 (The Effect of Squalene on Inflammation Factors Induced by Candida Albicans in Vivo Studies)

  • 이준행
    • 대한방사선기술학회지:방사선기술과학
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    • 제39권3호
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    • pp.443-449
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    • 2016
  • 본 연구에서는 Candida albicans로 유도한 염증반응에 대해 스쿠알렌의 처치를 통해 염증반응을 경감시키는가에 대해 확인하였다. 실험동물은 (ICR계 생쥐) 각 실험군별 7마리씩을 사용하여 생체 내 실험을 하였다. Candida albicans-유도 염증인자 중 종양괴사인자-알파, 인터루킨-6, 산화질소는 ELISA kits 방법을 이용하여 관찰하였다. 실험을 통해 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. Candida albicans를 감염시킨 군에서 1, 3일째 모두 신장조직 내에서의 산화질소 생성량을 감소시키는 것을 확인할 수 있었다 (p< 0.05). 2. 스쿠알렌 (80ml/kg)을 7일간 1일 1회 전 처치(복강투여)한 다음, Candida albicans를 감염시킨 군에서 3일째 군에서만 신장 조직 내에서의 종양괴사인자-알파 생성량을 감소시키는 것을 확인할 수 있었다(p< 0.05). 3. 스쿠알렌 (80m/kg)을 7일간 1일 1회 전 처치(복강투여)한 다음. Candida albicans를 감염 시킨 군에서 3일째 군에서만 신장 조직 내에서의 인터루킨-6 생성량을 감소시키는 것을 확인할 수 있었다(p< 0.05). 결론적으로 스쿠알렌이 Candida albicans-유도 염증인자들의 억제를 위해서는 예방적 차원에서 스쿠알렌을 공급하는 것이 효과가 있음을 알 수 있었다. 따라서 스쿠알렌 처치가 Candida albicans-유도 면역억제에 대해 회복 효과를 기대할 수 있을 것으로 사료된다.

에볼라 바이러스 진단법과 개발 동향에 관한 고찰 연구 (Study on Laboratory Diagnosis of the Ebola Virus and Its Current Trends)

  • 정혜선;강윤정
    • 대한임상검사과학회지
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    • 제47권3호
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    • pp.105-111
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    • 2015
  • 2013년 12월 말, 에볼라 바이러스는 서아프리카에서 발발했다. 기니를 시작으로 라이베리아, 시에라리온으로 빠르게 퍼지게 되었다. 에볼라 바이러스(자이르형 에볼라 바이러스)는 외피, 비분절, 음성단일가닥 RNA바이러스이다. 에볼라 바이러스는 인수공통 전염병이다. 바이러스는 처음 감염된 야생동물과 접촉 한 후, 혈액, 땀, 소변, 정액, 모유 등의 체액과의 직접적인 접촉을 통해 사람 대 사람으로 전염된다. 그러나 공기로 전염되지는 않는다. 잠복기는 2~21일이다. 에볼라 바이러스는 내피세포, 단핵 식세포, 간세포를 감염시킨다. 감염 후 바이러스가 숙주의 면역 시스템을 회피하기 위해 여러 메커니즘을 사용한다. 이것은 혈관, 간 등의 내부 조직 및 기관에 막대한 피해를 주어 죽음에 이르게 한다. RNA 바이러스에 대한 대부분의 실험은 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)라 기술에 의존한다. 이 방법은 매우 민감하지만 숙련된 과학자, 전원 공급 장치 요구하며 비싸다. 스트립 분석기법(효소면역분석법, ELISA)은 에볼라 바이러스 항원 또는 항체를 검출한다. 이 기법은 저렴하며, 전기, 냉장 장치가 필요하지 않다. 실험적인 치료 및 백신 개발에 관한 지속적인 노력에도 불구하고, 에볼라 바이러스 질환은 현재 치료법에 제한이 있다. 그러므로 신속하고 정확한 진단이 환자관리, 감염예방, 관리대책에 있어서 매우 중요하다.

TGF-β1에 의하여 유도된 인간자궁내막의 탈락막화(Decidualization)에 있어서 ERK (Extracellular Signal Regulated Kinas)와 PPARγ (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma)의 역할 (Role of ERK (Extracellular Signal Regulated Kinas) and PPARγ (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma) on TGF-β1 Induced Human Endometrial Stromal Cell Decidualization)

  • 장혜진;이재훈;김미란;황경주;박동욱;민철기
    • Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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    • 제33권2호
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    • pp.105-113
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    • 2006
  • 목 적: 본 연구를 통해 $TGF-{\beta}1$에 의해 유도된 인간자궁내막의 탈락막화 과정에서 ERK와 $PPAR{\gamma}$의 역할을 규명하고자 하였다. 연구방법: 자궁내막 기질세포는 DMEM/F12 (10% FBS, 1 nM E2 and 100 nM P4) 조건에서 배양하였다. 연구 목적에 따라 $TGF-{\beta}1$ (5 ng/ml), Rosiglitazone (50 nM)와 PD98059 ($20{\mu}M$)를 배양액에 첨가하였다. Trypan-Blue와 hematocytometer를 이용하여 현미경하에서 세포의 개수를 측정하였다. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)와 western blotting 방법을 사용하여 단백질의 발현 정도를 관찰하였다. 결과 및 결론: 배양액에 $TGF-{\beta}1$을 첨가하여 세포의 증식 정도를 측정한 결과 $TGF-{\beta}1$이 세포의 증식을 억제하는 것을 알 수 있었다. 또한 배양된 세포로부터 PGE2 및 prolactin의 발현을 유도하는 것을 알 수 있었다. 이러한 $TGF-{\beta}1$의 작용은 Smad 및 ERK의 활성화를 통하여 일어남을 알 수 있었다. $PPAR{\gamma}$의 기질인 rosiglitazone을 배양액에 첨가한 결과 $TGF-{\beta}1$에 의한 세포 증식의 억제가 역전되는 것을 알 수 있었다. 뿐만 아니라, 세포 내 ERK의 활성 역시 억제 시켰으며 이 결과 PGE2와 prolactin의 발현이 억제 되는 것을 관찰할 수 있었다. 따라서 본 연구를 통해 $TGF-{\beta}1$에 의한 자궁내막 기질세포의 탈락막화는 Smad와 ERK의 활성화를 통하여 이루어지며 이러한 과정은 $PPAR{\gamma}$에 의해 억제됨을 알 수 있었다.