In the indeterminate chronic period of Chagas disease (ChD) the treatment has not been conclusive, because the serological negativization requires many years. This study aims to evaluate the efficacy of nifurtimox (NF) in the treatment of chronic ChD in prolonged follow-up by serological techniques of indirect immunofluorescence assay (IFA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) IgG comparing 2 groups of patients, treated and non treated. Mann-Whitney test was performed for ELISA and IFA, with significant difference between the groups (P<0.05). IgG levels were lower in individuals treated compared with untreated patients, indicating chemotherapeutic efficacy in prolonged follow-up.
Cockroaches have been recognized as a major cause of asthma. Bla g 4 is one of the most important German cockroach allergens. The aim of this study is to investigate IgE reactivity to the recombinant Bla g 4 (rBla g 4) in the sera of allergic patients and identify linear IgE binding epitope. For protein expression, full-length Bla g 4 (EF202172) was divided into 5 overlapping peptide fragments (E1: aa 1-100, E2: aa 34-77, E3: aa 74-117, E4: aa 114-156, and E5: aa 153-182). The full-length and 5 peptide fragments of Bla g 4 was generated by PCR and over-expressed in E. coli BL21 (DE3). The IgE binding reactivities of the full-length and peptide fragments were measured by ELISA using 32 serum samples of cockroach allergy. The sera of 8 patients (25%) reacted with rBla g 4. Four sera (100%) showed IgE-binding reactivity to full-length and peptide fragment 4, and 2 sera (50%) reacted with peptide fragment 2. One (20%) serum reacted with peptide fragment 3. The results of ELISA using overlapping recombinant fragments indicated that the epitope region was located at amino acid sequences 34-73 and 78-113, and major IgE epitope of Bla g 4 was located at amino acid sequences 118-152 of C-terminal. B-cell epitope analysis of German cockroach allergen Bla g 4 could contribute to the strategic development of more specific and potentially efficacious immunotherapy.
폐츱충(Paragonimus westermani) 감염시 탈낭유충은 숙주내 여러조직을 거친 후 폐에 기생하게 되는데 이때 조직반응과 더불어 혈액내 호산구와 IgE 항체가의 변등이 일어난다. 이 실험에서는 백서에 폐흡충을 감염시키고 혈청내 총 IgE와 특이 IgG 항체값을 시간 경과별로 측정하여 감염후 혈청내 항체가의 변증을 관찰하였다. 폐흡충 퍼낭유충 20개를 백서에 경구 감염시키고 시기별(0,1,2,3,4,0,8주)로 IgE의 변동을 avidin-biotin을 이용하여 효소표식 면역검사법 (enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA)으로 측정하였으며 IgG는 통상적인 ELISA 방법을 이용하여 측정하였다. 실험군의 혈청내 총 IgE치는 감염 3주와 3주 후에 흡광도가 각각 0.18±0.042, 0.18±0.081이었으나, 4주에 0.28±0.151로 급격히 중가하었으며 8주까지 지속적인 상승(0,43±0,055)을 보였다. 반면 대조군의 경우 전 실험기간을 통해 0.07∼0.12로 낮은 항체가가 유지되었다. 또한 실험군의 혈청내 IgG 항체는 감염 3주 후에 흡광토 0.20±0,032로 증가하기 시작하여 8주에 0.31±0.067을 보였으나 대조군에 비해 크게 증가되지 않았다. 이상의 결과로 보아 비호적숙주인 백서에서 폐흡충의 감염이 IgE 및 IgG 항체를 증가시킴을 알 수 있었다.
목 적 : 청소년기의 홍역 특이 IgG 항체의 혈중 농도를 측정하여 연령 증가에 따른 흥역 특이 IgG 항체 양성를 및 항체 역가를 알아보고, 홍역 유행 예방을 위한 자료를 제시하고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 1996년 5월부터 7월까지 12세~17세의 서울 시내 3개 중,고등학교 학생 216명 (남:110, 여:106)을 대상으로 혈액을 채취하여 효소결합면역흡착검사(ELISA)로 흥역 특이 IgG를 측정하였다. 홍역 특이 IgG 농도는 정해진 방법에 따라 110AU/m1이상인 경우 항체 양성으로 판정하였다. 결 과 : 홍역 특이 IgG 양성률은 전체적으로 91.2%였으며, 12세 94.7%, 13세 82.8%, 14세 83.8%, 15세 91.8%, 16세 95.8%, 17세 100%였고, 연령별로 유의한 차이는 없었다. 항체 양성자들의 평균 흥역 항체 역가(펑균${\pm}$표준펀차 AU/ml)는 전체적으로 $256{\pm}90$이었으며, 12세 $281{\pm}119$, 13세 $248{\pm}86$, 14세 $263{\pm}93$, 15세 $249{\pm}86$, 16세 $270{\pm}88$, 17세 $225{\pm}78$이었고, 연령별로 유의한 차이는 없었다. 결 론 : 청소년기에 홍역 특이 IgG 양성율은 91.2%로 청소년중 상당수가 홍역 유행시 이환이 가능한 상태임을 보여주었다. 이에 대한 대책으로 청소년에 대한 재접종을 고려해야하며 향후 재접종의 효과에 대한 연구가 필요할 것으로 생각된다.
hybridoma cells producing IgM anti-pneuococcal 6B polysaccharide antibodies were induced to switch to IgG-producing cells in vitro by treating with acridine orange. Treating 0.5 $\mu\textrm{g}$/ml of acridine orange for 24 hours generated maximal number of variant cells. The maximal isotype switch frequency was 3${\times}$10-5, which is about 30-fold higher than the frequency of spontaneous switching. Resulting IgG-producing variants were enriched by sib selection and ELISA spot assay. Two IgG3-producing variant cells were finally cloned by limiting dilution. The variant cells produced similar amounts of antibodies as their parental cells did. The two switched antibodies had similar reactivity to pneumococcal 6B polysaccharide. When compared to their parental IgM antibodies, the switched IgG3 than that of IgM antibody. The antibodies will be useful as essential tools for comparative study of the role of heavy chain isotypes in protection against Streptococcus pneumoniae.
The enzyme-linked immunosorbent assay using the so-called "double-sandwich"technique was applied to determine Clostridium botulinum type F toxin. Polystyrene tubes were coated with horse anti-type F toxin serum and then toxin sample was added. The tubes were subsequently treated with rabbit anti-type F toxin IgG and sheep anti-rabbit serum IgG-horseradish peroxidase conjugate. By this technique, about 10 mouse intraperitoneal 50% lethal doses (ip LD/50/) of type F toxin could be detected. Low back-ground reading was achieved with the use of phosphate-buffered saline containing 0.05% Tween 20 and 1% bovine serum albumin as diluents of rabbit IgG and conjugate. Addition of EDTA in the diluents of toxin increased ELISA extinction value significantly. No cross-reaction was observed with botulinum type A and B toxin, but type E toxin gave sleight cross-reaction.
본 연구는 버섯성분을 함유한 두부의 면역조절물질로의 가치를 평가하고자 수행하였다. 표고버섯(Letino edodes)과 민자주방망이버섯(Lepista nuda)의 자실체와 균사체를 두유에 첨가하고 응고제로 $CaSO_4{\cdot}2H_2O$ 또는 젖산발효추출물을 사용하여 두부를 만들었다. 두부와 버섯성분이 함유된 두부의 영양성분을 분석하였다. Sandwich ELISA를 이용하여 비장세포 배양액에서의 IFN-${\gamma}$와 IL-4및 TNF-${\alpha}$농도를 분석하였으며, 또한 혈장과 비장세포 배양액에서 IgG1, IgG2a 및 IgE등의 농도를 측정하였다. 조단백과 조지질은 버섯성분을 함유한 두부에서 감소되었으나, 인은 유의적으로 증가하였다. IFN-${\gamma}$는 자실체나 두부를 투여한 생쥐에서 유의적으로 감소하였으며, IL-4는 표고버섯 자실체가 함유된 두부를 투여한 생쥐에서 크게 감소하였다. TNF-${\alpha}$는 표고버섯 성분을 함유한 두부를 투여한 생쥐에서 유의적으로 증가하였다. 혈장의 IgG1은 거의 모든 실험군에서 증가되었으나, IgG2a는 대조군에 비해 큰 변화가 없었다. 비장임파구 배양액에서 측정한 IgG1 와 IgG2a의 농도는 자실체나 균사체를 첨가한 두부의 대부분의 그룹들에서 현저하게 높게 나타났다. IgE의 혈장농도는 두부나 표고버섯을 투여한 생쥐에서 크게 증가하였으나 버섯 성분을 첨가한 두부 투여 생쥐그룹에서는 그 생성이 억제되었다. 이러한 결과들은 버섯 성분을 함유한 두부들이 면역활성에 영향을 준다는 것을 나타내며, 면역활성의 관점에서 두부와 표고버섯의 혼합물은 개발가치가 있는 것으로 사료된다.
The mRNA expression of several cytokines was evaluated in splenocytes and mesenteric lymph node (MLN) cells of rats infected with Capillaria hepatica by reverse-transcription (RT)-PCR until week 12 after infection. IgG1 and IgG2a, which are associated with Th1 and Th2 response, respectively, were also assessed by ELISA. The results indicated that the majority of cytokines, including the Th1 (IL-2 and $IFN-{\gamma}$ and Th2 cytokines (IL-4, IL-5 and IL-10) were expressed at maximal levels during the early stage of infection (after week 1-2), and the ELISA data also evidenced a similar pattern of changes in IgG1 arid IgG2a. Th1 and Th2 cytokines responded in a similar fashion in this rat model. The expression of cytokines in splenocytes was significantly higher than that in MLN cells, thereby indicating that cytokine production is controlled more by spleen than by MLN. In addition, the observation that $IFN-{\gamma}$ expression increased unexpectedly at the time of maximal egg production (6 weeks after infection) indicated that $IFN-{\gamma}$ is a cytokine reacting against egg production. However, increased IL-5 expression occurring in tandem with worm activity indicated that the activity of C. hepatica might be controlled by IL-5 expression.
Specific polyclonal and/or monoclonal antibodies (MAbs) to immunoglobulins (Igs) and their subunits have proved to be valuable tools in immunological research and in immunological assays. In this study, we developed and characterized MAbs against flounder serum Igs. To obtain the pure flounder serum Igs, mouse IgG (mIgG) was immunized to flounder. Flounder Igs were purified by using mIgG-agarose affinity column chromatography. The structure of purified flounder Ig was observed, on denatured SDS-PAGE, to be composed of two heavy chains (77 and 72 kd) and two light chains (28 and 26 kd). MAbs were produced by fusion of myeloma cells (SP2/0) with Balb/c mouse spleen cells previously primed with the flounder Igs. Finally, three hybridoma clones, FIM 511, FIM 519 and FIM 562 were established to recognize both 2 heavy chains, 26 kd of light chain and 28 kd of light chain, respectively. On the other hand, the flounder immune sera collected on the weekly basis were tested on ELISA and immunoblot analysis whether boosting effect is present in flounder humoral immune system. As a result, the secondary immune response in flounder was ascertained on ELISA, but not on immunoblot analysis. Further, we observed an alteration of serum protein levels following immunization. Our MAbs and basic information on flounder humoral immune system obtained in this study will be helpful to control and monitor the efficiency of fish vaccines and therapeutic process of flounder diseases.
여러가지 방법으로 난백을 처리하고 난백 중 주요한 알레르겐인 OM의 알레르기성 변화를 계란 알레르기 환자의 IgE 항체를 이용한 간접경합 ELISA로 조사하였다. 12종의 효소를 이용한 가수분해, 방사선조사, succinic anhydride 처리는 OM의 알레르기성을 효과적으로 감소시키지 못 하였다. OM의 당쇄를 제거하는 TFMS의 처리는 OM의 알레르기성을 1/20 정도로 감소시켰다. $100^{\circ}C$에서 10분간의 열처리는 알레르기성을 감소시키지 못하였으나 $121^{\circ}C$(10분)의 처리는 난백 중 OM의 알레르기성을 1/100정도로 감소시켰다. NaOH 단독 처리는 3%(w/v) 이상에서 알레르기성이 대부분 사라졌고, NaOH(0.3%(w/v) 이상)와 열($70^{\circ}C$,15 min)의 복합처리는 알레르기성을 1/10,000 이하로 낮춤으로써 가장 효과적인 감소를 보였다. 본 연구에서 환자의 IgE 항체를 이용한 ELISA 분석결과와 동일 시료에 대한 토끼 IgG 항체의 ELISA 결과는 대체적으로 비슷한 결과를 보였지만, TFMS 처리물에 대한 반응성은 후자에서 훨씬 많이 감소되어(1/10,000) 대조적이었다. 이는 식품의 항원성과 알레르기성 간에는 약간의 차이가 있음을 시사하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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