The combined effects of EDTA-Tris and eighteen antimicrobial agents have been evaluated in eight clinically isolated methicillin-resistant bacteria (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Streptococcus uberis and Streptococcus agalactiae) from bovine mastitis. The antimicrobial activity was evaluated by measuring the minimal bactericidal concentration (MBC) for the antibiotics alone or in combination with EDTA-Tris in Mueller-Hilton broth and milk. Combined use of EDTA-Tris and antibiotics potentiated or antagonized activity of antibiotics against mastitic pathogens. Milk increased the antibiotic potency of erythromycin and spiramycin on S. aureus. Culture in milk changed patterns of EDTA-Tris combinational effects compared with that in standard Mueller-Hilton broth. Combined with EDTA-Tris in milk, synergic effects were observed in colistin, dihydrostreptomycin, kanamycin, erythromycin, gentamycin, oxytetracycline, streptomycin to E. coli, Str. uberis, and Str. agalactiae. However, significant antagonistic effects of milk on antibiotic susceptibility in combination with EDTA-Tris were noted in neomycin, streptomycin, penicillin, roxithromycin, and amoxicillin. This study indicates that combination therapy of EDTA-Tris with antibiotics in bovine mastitis should be used with caution because of the possible antagonistic effects of antibiotic combination with EDTA-Tris on mastitic pathogens. In addition, antibiotic susceptibility test in combination with EDTA-Tris in milk culture condition can be benefit in search of effective treatment regimen for some antibiotic-resistant bacteria of mastitis.
Combinations of EDTA-Tris and gentamicin, oxytetracycline in normal bovine milk were examined for synergistic activities aganist Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium Pyogenes, Escherichia coli, Salmonella dublin, Pseudomonas aeruginosa, and proteus spp. isolated from the milk of acute clinical bovine mastitis. The results were summarized as follows: 1. The minimal inhibitory concentrations of EDTA-Tris and gentamicin, oxytetracycline on Escherichia coli, Salmonella dublin, proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, and Streptococcus agalactiae were markedly reduced. 2. The significant synergistic effects observed when the microorganisms were reacted with EDTA-Tris and gentamicin, oxytetracycline. These findings were respectively verified by kinetic studies of microbial death, using one-fourth minimal inhibitory concentrations of EDTA-Tris, gentamicin, and oxytetracycline.
본 연구는 독자 개발한 돼지액상정액희석제 Kp(한국생명과학연구소)에 pH를 안정화하여 보존 중 정자의 운동성을 유지시킬 수 있도록 EDTA, Tris, Citrate buffer의 적정 첨가농도를 결정하고자 실시하였다. Basic Kp와 BTS (Mini-tube, Germany; BT-Sg), BTS (Tri-bio, USA; BTSa), Modena (SGI, USA)를 17$^{\circ}C$ 에서 각각 보관한 경우 모든 희석액에서 시간 경과에 따라 pH가 증가하였고, Basic Kp 는 희석 당일의 pH가 다른 희석액에 비해 높게 나타났는데 이것은 돼지액상정액의 생리적인 pH인 6.8~7.5에 비해서도 높은 수준이었다. 정액내의 pH 저하를 방지해 주고 정액의 생리적인 pH를 유지하기 위하여 Basic Kp에 EDTA, Tris, Citrate buffer를 단계적으로 첨가하면서 시간 경과에 따른 pH 변화를 살펴 본 결과 1.25g /L EDTA, 1.42g /L Tris, 1.00g /L Citrate를 첨가한 경우 (Modified Kp) pH는 l일째 6.88에서 6일째 7.33으로 유지되었다. 특히, Modified Kp에 첨가된 buffer 의 농도는 Modena와 다른 희석제에 첨가된 농도에 비해 1/2 에서 1/4 정도로 낮은 수준이었다. Modified Kp 와 Basic Kp, BTSg, BTSa 및 Modena로 냉동-융해된 돼지 정자를 희석하여 보존한 경우 정자의 운동성은 Modified Kp가 다른 희석액에 비해 유의하게 높게 나타났다(87.0% vs. 71.0~48.0% in day 1; 13.3% vs. 6.3~0% of day 6), 이상의 결과를 종합해 볼 때, Modified Kp는 낮은 농도의 EDTA, Tris, Citrate buffer 첨가에도 불구하고 돼지정자의 생리적인 pH 수준을 잘 유지할 수 있었으며, 수입되어 냉동-융해된 돼지 정자에 사용하는 희석제 BTSg, BTSa, Modena 보다도 정자의 운동성에 효과적이었다.
About 8 year-old castrated male Yorkshire terrier was presented for evaluation of dysuria, stranguria, hemtauria, and pollakiuria. On history taking, dysuria first was observed three months ago and these signs were waxed and waned. Physical examination revealed mild left perineal swelling. On routine laboratory examination, no significant findings were identified. Positive contrast urogram identified peritoneal herniation of urinary bladder. Urinalysis showed proteinuria and hematuria. Urine sediment revealed epithelial cells, white blood cells and rod-shaped bacteria. Pseudomonas aeroginosa was isolated from urine obtained through cystocentesis, and had resistance against fourteen antibiotics. Cystitis caused by P. aeruginosa concurrent with cystolithiasis and perineal hernia was diagnosed. Cystotomy, herniorrhaphy and EDTA-Tris solution lavage of bladder were performed. The patient was recovered to normal condition 2 days after treatment. Two weeks later, bacterial culture of urine was negative and any abnormality in ultrasonogram and urinalysis was not observed except calcium oxalate dihydrate crystals.
효모를 먹이로 하는 filter-feeder들의 소화력을 높이고자, algae의 대용물로서 가치가 있는 Kluyveromuces fragilis효모를 화학적 처리방법에 의해 세포벽을 바괴시켰다. 화학적 처리방법의 최적조건은 0.2 M Tris-buffer에 용해시켜 만든 1M 의 $Na_2EDTA$와 0.3 M의 2-mercaptoethanol을 처리한 후 $30{\circ}C$배양기에서 1시간 배양하는 조건에서 얻어졌다. 이때, 약 30%의 protoplast yeast를 실시함으로써, 그 생성률을 약 2배이상 올릴 수 있었다.
Regenerated cellulose was prepared from Buckeye wood pulp V60 via dissolution in N-methylmorpholin N-oxide (NMMO) solvent system. The effect of antioxidants such as, n-propylgallate (PG), tris(nonylphenyl) phosphite (TRIS), ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt (EDTA), and magnesium sulfate on the properties of regenerated cellulose was studied using X-ray diffraction, copper index calculation, and viscometry. Only addition of more than 0.01% of PG into NMMO solvent was effective to avoid the reduction of the degree of polymerization(DP) of regenerated cellulose during dissolution at $110^{\circ}C$. However, the early stage(within 0.5h of dissolution process) degradation of cellulose was not prevented eventhough up to 0.5% PG was appled to hot NMMO system. In addition, to recover the expensive NMMO after cellulose regenerating process, the washing filtrate was studied using simple techniques, such as refractive index, pH, and conductivity measurements. Through conductivity measurement result, 4-time of washing was enough to remove the NMMO completely from regenerated cellulose.
면봉을 사용한 샘플링 방법은 의학, 생태학, 생명공학, 법의학 및 오염 정도 모니터링 시스템과 같은 다양한 연구 분야에서 유용하다. 샘플링에서 채취 시약은 중요한 요소 중 하나이다. 시료를 장기간 보관해야 하는 경우에는 시료 채취 키트와 시료 보관 온도가 매우 중요하다. 이 연구의 목적은 별도의 배지 없이, 세 가지 채취 시약과 세 가지 보관 온도가 살아있는 세균의 생균 수에 미치는 영향을 확인하는 것이다. 대표적인 환경 세균으로 E. coli와 S. aureus를 선정하였다. 증류수(DW), 멸균된 인산염 완충액(PBS), Tris-EDTA (TE) 버퍼를 채취 시약으로 사용하여 샘플링한 후, 22, 4, -70℃에서 보관을 진행했다. 각 채취시약 및 보관 온도가 시료에 미치는 영향은 RLU와 CFU로 결과로 비교하였다. -70℃ 보관 온도와 TE 버퍼를 사용할 때 CFU와 RLU 값은 다른 조건에서보다 일정하게 유지되는 경향이 보였다. 따라서 이 연구는 시료가 채취 직후 -70℃에서 보관되어야 하며, 채취 시약으로 TE 버퍼와 함께 사용하는 것이 좋다는 것을 시사한다.
A more rapid and efficient method to extract RNA from Ecklonia cava Kjellman (Laminariales, Phaeophyceae) was introduced in this study. Each step of the procedure was evaluated and the optimal concentration of each chemical in the lysis solution was determined. Tissue pulverization with PVPP and β-mercaptoethanol in the lysis solution were not essential for RNA extraction of this species. The highest yield and purity of E. cava RNA were obtained by the lysis solution containing 1% CTAB, 1 M NaCl, 0.7% PVP, 10mM EDTA and 100mM Tris-Cl (pH 9.0). Approximately 8μg of RNA was obtained from 200 mg of ground tissue. The ratios of the absorbance at 260 nm and 280 nm were from 1.6 to 1.8 and those of at 230 nm and 260 nm were from 1.8 to 2.0. The extracted RNAs obtained in this study turned out to have a sufficient quality for cDNA synthesis.
Molecular techniques have been introduced for malaria diagnosis because they offer greater sensitivity and specificity than microscopic examinations. Therefore, DNA isolation methods have been developed for easy preparation and cost effectiveness. The present study described a simple protocol for Plasmodium DNA isolation from EDTA-whole blood. This study demonstrated that after heating infected blood samples with Tris-EDTA buffer and proteinase K solution, without isolation and purification steps, the supernatant can be used as a DNA template for amplification by PCR. The sensitivity of the extracted DNA of Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax was separately analyzed by both PCR and semi-nested PCR (Sn-PCR). The results revealed that for PCR the limit of detection was $40parasites/{\mu}l$ for P. falciparum and $35.2parasites/{\mu}l$ for P. vivax, whereas for Sn-PCR the limit of detection was $1.6parasites/{\mu}l$ for P. falciparum and $1.4parasites/{\mu}l$ for P. vivax. This new method was then verified by DNA extraction of whole blood from 11 asymptomatic Myanmar migrant workers and analyzed by Sn-PCR. The results revealed that DNA can be extracted from all samples, and there were 2 positive samples for Plasmodium (P. falciparum and P. vivax). Therefore, the protocol can be an alternative method for DNA extraction in laboratories with limited resources and a lack of trained technicians for malaria diagnosis. In addition, this protocol can be applied for subclinical cases, and this will be helpful for epidemiology and control.
In this study, we improved the eggshell-membrane separation process by separating the shell and membrane with EDTA solution, evaluating effects of three different extraction solutions (acetic acid, EDTA, and phosphate solution), and co-purifying multiple eggshell proteins with two successive ion-exchange chromatography procedures (CM Sepharose Fast Flow and DEAE Sepharose Fast Flow). The recovery and residual rates of eggshell and membrane separated by the modified method with added EDTA solution were 93.88%, 91.15% and 1.01%, 2.87%, respectively. Ovocleidin-116 (OC-116) and ovocalyxin-36 (OCX-36) were obtained by loading 50 mM Na-Hepes, pH 7.5, 2 mM DTT and 350 mM NaCl buffer onto the DEAE-FF column at a flow rate of 1 mL/min, ovocleidin-17 (OC-17) was obtained by loading 100 mM NaCl, 50 mM Tris, pH 8.0 on the CM-FF column at a flow rate of 0.5 mL/min. The purities of OCX-36, OC-17 and OC-116 were 96.82%, 80.15% and 73.22%, and the recovery rates were 55.27%, 53.38% and 36.34%, respectively. Antibacterial activity test suggested that phosphate solution extract exhibited significantly higher activity against the tested bacterial strains than the acetic acid or EDTA extract, probably due to more types of proteins in the extract. These results demonstrate that this separation method is feasible and efficient.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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