To elucidate the regulatory mechanism of virE operon from vir regions (virA, virB, virC, virD, virG, virE) of pTiA6 which have been known to be essential for efficient crown gall tumorigenesis in plants, the activity of the truncated virE, promoter was analyzed. pSM358cd, a recombinant plasmid in which virE :: Tn3-HoHo1 (Tn3-promoterless lacZ) was cloned into SalI site of pVK102, was digested with SalI, and virE :: Tn3-HoHo1 was seperated from pVK102. To construct the truncted virE recombinant plasmids (pJS031, pJS051, pJS102, pJS201, pJS301), 5'-end of vireE promoter was deleted with BAL31 and cloned into pVK102 and then transferred into a. tumefaciens A348(pTiA6). According to the activity of the truncated virE promoter in recombinant plasmids, they were classified into two groups, pJS031, pJS051, pJS101 and pJS201 belong to a functional group and pJS301 is a non-functional. The size of deleted nucleotides of pJS201 and pJS301 seemed to be about 130 nucleotides and about 250 nucleotides from 5'-end of virE promoter, respectively. Hence it was thought that the essential site of the virE promoter was located between about 130th nucleotide and 250th nucleotide from 5'-end of the virE promoter.
N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors are ionic glutamine receptors involved in brain development and functions such as learning and memory formation. NMDA receptor inhibition is associated with autophagy activation. In this study, we investigated whether the NMDA receptor antagonists, memantine and ifenprodil, induce autophagy in human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19) to remove N-retinylidene-N-retinylethanolamine (A2E), an intracellular lipofuscin component. Fluorometric analysis using labeled A2E (A2E-BDP) and confocal microscopic examination revealed that low concentrations of NMDA receptor antagonists, which did not induce cytotoxicity, significantly reduced A2E accumulation in ARPE-19 cells. In addition, memantine and ifenprodil activated autophagy in ARPE-19 cells as measured by microtubule-associated protein 1A/1B-light chain3-II formation and phosphorylated p62 protein levels. Further, to understand the correlation between memantine- and ifenprodil-mediated A2E degradation and autophagy, autophagy-related 5 (ATG5) was depleted using RNA interference. Memantine and ifenprodil failed to degrade A2E in ARPE-19 cells lacking ATG5. Taken together, our study indicates that the NMDA receptor antagonists, memantine and ifenprodil, can remove A2E accumulated in cells via autophagy activation in ARPE-19 cells.
Jaber, Abdullah All;Chowdhury, Zeshan Mahmud;Bhattacharjee, Arittra;Mourin, Muntahi;Keya, Chaman Ara;Bhuyan, Zaied Ahmed
Genomics & Informatics
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제19권4호
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pp.48.1-48.10
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2021
Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) encodes small envelope protein (E) that plays a major role in viral assembly, release, pathogenesis, and host inflammation. Previous studies demonstrated that pyrazine ring containing amiloride analogs inhibit this protein in different types of coronavirus including SARS-CoV-1 small envelope protein E (SARS-CoV-1 E). SARS-CoV-1 E has 93.42% sequence identity with SARS-CoV-2 E and shared a conserved domain NS3/small envelope protein (NS3_envE). Amiloride analog hexamethylene amiloride (HMA) can inhibit SARS-CoV-1 E. Therefore, we performed molecular docking and dynamics simulations to explore whether amiloride analogs are effective in inhibiting SARS-CoV-2 E. To do so, SARS-CoV-1 E and SARS-CoV-2 E proteins were taken as receptors while HMA and 3-amino-5-(azepan-1-yl)-N-(diaminomethylidene)-6-pyrimidin-5-ylpyrazine-2-carboxamide (3A5NP2C) were selected as ligands. Molecular docking simulation showed higher binding affinity scores of HMA and 3A5NP2C for SARS-CoV-2 E than SARS-CoV-1 E. Moreover, HMA and 3A5NP2C engaged more amino acids in SARS-CoV-2 E. Molecular dynamics simulation for 1 ㎲ (1,000 ns) revealed that these ligands could alter the native structure of the proteins and their flexibility. Our study suggests that suitable amiloride analogs might yield a prospective drug against coronavirus disease 2019.
L $i_{0.5}$ F $e_{2.5-x}$A $l_{x}$$O_4$ 페라이트계에 대한 XRD와 Mossbauer 스펙트럼을 측정 분석하였다. $Al^{3+}$ 씨온의 치환량 x가 증가할수록 격자상수는 작아지고, 값이 0, 0.3, 0.6인 시료에서는 두 site의 F $e^{3+}$ 이온에 의한 두 개의 6선 흡수선이 나타났고, x가 0.9, 1.2인 시료에서는 6선 흡수선외에 열에 의한 전자적 완화현상에 기인한 2선 흡수선이 공존하였으며, x가 1.5인 시료는 2선 흡수선만 나타났다. 공명흡수면적으로 계산된 L $i_{0.5}$ F $e_{2.5-x}$A $l_{x}$$O_4$ 페라이트계의 금속 양이온 분포식은(L $i_{1-a}$$^{+}$F $e_{a}$$^{3+}$ ) z으로 나타낼 수 있었고, 시료내의 $Al^{3+}$ 의 증가는 B-site의 F $e^{3+}$ - $O^{2-}$ 결합거리를 증가시켜 공유 결합성을 약화시키는 것으로 확인되었으며, $Al^{3+}$ 씨 증가에 따라 B-site의 F $e^{3+}$ 이온의 수가 감소하여 A-B 초 교환 상호 작용이 약화되는 것을 알 수 있었다.다.
A new oxygenated monoterpene (4) was isolated from the methanol extract of the aerial part of Erechtites hieracifolia together with six known components, a dimethylheptane (1), three ionone derivatives (2, 3 and 7) and two phenylpropanoids (5 and 6). Their structures were identified by means of physico-chemical and spectral data to be (2E, 5E)-6-hydroxy-2,6-dimethylhepta-2,4-dienal (1), 3(R)-hydroxy-5,6-epoxy-$\beta$-ionone (2), 3(R)-hydroxy-5,6-epoxy-7-ionol (3), (3E, 6E)-3,7-dimethylocta-3,5-dien-1,2,7-triol(4), 2-hydroxy-4-(2-propenyl)phenyl-$\beta$-D-glucopyranoside (5), 2-methoxy-4-(2-propenyl)phenyl -$\beta$-D-glucopyra-noside (6) and (6R, 9R)-3-oxo-$\beta$-ionol-$\alpha$-D -glucopyranoside (7).
유기산 생산균인 L. casei Y, Str. faecium C, Str. faecalis, Cl. butyricum M, B. toyoi를 사료첨가제와 발효유로부터 분리 확인하여 이들 균주가 자돈의 대장균증 설사를 유발시키는 E. coli $A_2$, E. coli G$_7$에 대하여 in vitro에서는 어떤 항균효과를 나타내는지 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. L. casei Y, Str. faecium C, Str. faecalis, B. toyoi Cl. butyricum M을 각각 배양한 BL broth 3일 배양액은 모두 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$에 대하여 항균효과를 나타내었고, 이들 배양액을 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$에 대한 발육 Disc 확산시험 결과 그 저지환 직경은 각각 15mm와 17mm, 14mm와 15mm, 13mm와 14mm, 11mm와 13 mm, 10mm와 12mm 였다. 2. 유기산 생산 능력이 우수한 균일수록 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$에 대한 항균력이 높게 관찰되었으며, L. casei Y와 Str. faecium C가 이들 두 대장균에 대하여 높은 항균력을 나타내었다. 3. 유기산 생성균과 대장균(E. coli $A_2$, E. coli G$_7$)을 BL broth 에 혼합 배양할 때 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$은 배양액의 pH가 5.0 이하일 때 생육억제 되었고, pH 4.5 이하였을 때 사멸되었다. 4. 생성된 유기산은 배양액의 pH를 저하시킴과 동시에 항균성 물질로 직접 작용하여 E. coli $A_2$와 E. coli G$_7$의 생육저해 또는 사멸을 유도하였다. 5. E. coli $A_2$가 E. coli G$_7$보다 유기산 생산균의 대사산물에 대하여 더 높은 내성을 갖고 있었다.
Objectives: This study tested the hypothesis that cryotherapy duration influences lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammation in a rat model. Materials and Methods: Six Wistar rats (Rattus norvegicus albinus) were used. Five sites were selected per animal and divided into 5 groups: a negative control group (NC), 2 positive control groups (PC1 and PC2), and 2 experimental groups (E1 and E2). Cryotherapy was applied for 1 minute (E1) or 5 minutes (E2). An acute inflammatory response was induced in the PC and E groups via subcutaneous administration of 0.5 mL/kg. In the PC2 group, a catheter was inserted without additional treatment. For the E1 and E2 groups, 2.5℃ saline solution was administered through the implanted catheters for 1 and 5 minutes, respectively. The rats were sacrificed, and samples were obtained and processed for histological analysis, specifically examining the presence of polymorphonuclear neutrophils and hemorrhage. The χ2 test was used to compare the presence of acute inflammation across groups. Dependent variables were compared using the linear-by-linear association test. Results: Inflammation and hemorrhage varied significantly among the groups (p = 0.001). A significantly higher degree of acute inflammation was detected (p = 0.0002) in the PC and E1 samples than in the E2 group, in which cryotherapy was administered for 5 minutes. The PC and E1 groups also exhibited significantly greater numbers of neutrophils (p = 0.007), which were essentially absent in both the NC and E2 groups. Conclusions: Cryotherapy administration for 5 minutes reduced the acute inflammation associated with LPS and catheter implantation.
Vitellogenin(VTG) 합성에 미치는 A23187의 영향을 무지개송어의 배양 간세포를 이용하여 실험을 행하였다. 간세포는 2일간 배양한 후, Estradiol-$17^{\beta}$($E_2$, $2{\times}10^{-6}$M) 및 A23187 ($10^{-7)$~$10^{-5}$M)을 첨가하여 7일간 배양하였다. 그리고, $E_2$에 의한 VTG 합성시의 A23187이 미치는 영향에 대해서도 조사하였다. A23187이 미치는 영향에 대해서도 조사하였다. A23187 ($10^{-7)$~$10^{-5}$M)의 첨가에 의해 간세포에서의 VTG 합성은 농도의 증가에 따라 감소하였다.$E_2$에 의해 합성된 VTG는 A 23187 ($10^{-5}$M)의 첨가에 의해 대조군($E_2$만의 첨가)의 약 18%로 유의하게 감소하였다. 그러나,$E_2$제거로는 대조군의 약 47% 밖에 감소되지 않았다. 이러한 결과로 보아, 세포내의 저장 Ca은 번역 단계 또는 번역 후 단계를 조절함으로써, VTG 합성을 조절하는 것으로 추정된다.
Jun, Kyung Ok;Yang, Eun Ji;Lee, Byeong Jeong;Park, Jeong Ro;Lee, Joon H.;Choi, Sang Ki
Molecules and Cells
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제25권2호
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pp.172-177
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2008
Eukaryotic translation initiation factor 5B (eIF5B) plays a role in recognition of the AUG codon in conjunction with translation factor eIF2, and promotes joining of the 60S ribosomal subunit. To see whether the eIF5B proteins of other organisms function in Saccharomyces cerevisiae, we cloned the corresponding genes from Oryza sativa, Arabidopsis thaliana, Aspergillus nidulans and Candida albican and expressed them under the control of the galactose-inducible GAL promoter in the $fun12{\Delta}$ strain of Saccharomyces cerevisiae. Expression of Candida albicans eIF5B complemented the slow-growth phenotype of the $fun12{\Delta}$ strain, but that of Aspergillus nidulance did not, despite the fact that its protein was expressed better than that of Candida albicans. The Arabidopsis thaliana protein was also not functional in Saccharomyces. These results reveal that the eIF5B in Candida albicans has a close functional relationship with that of Sacharomyces cerevisiae, as also shown by a phylogenetic analysis based on the amino acid sequences of the eIF5Bs.
The purpose of the study was to investigate the effects of dietary green tea catechin and vitamin E on the phospholipse {TEX}$A_{2}${/TEX} activity and th antioxidative defense system in streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats. Sprague-Dawley male rats weighing 100$\pm$10 gm were randomly assigned to one normal and five STZ-induced diabetic groups. The diabetic groups were assigned either a catechin-free diet (DM group), 0.5% catechin diet (DM-0.5C group), 1% catechin diet (DM-1C group), vitamin E-free diet (DM-0E group), and 400 mg vitamin E per kg diet (DM-400E group) according to the levels of dietary catechin or vitamin E supplementation. The vitamin E levels of the normal, DM, DM-0.5C, and DM-1C groups were 40 mg per kg diet. Diabetes was experimentally induced by an intravenous injection of streptozotocin after 4 weeks of feeding the five experimental diets. The animals were sacrificed on the 6th day of he diabetic state. The body weight gains were lower in all five diabetic groups after the STZ injection. The platelet phospholipase {TEX}$A_{2}${/TEX}({TEX}$PLA_{2}${/TEX}) activity in the diabetic groups was higher than that in the normal group. However, the enzyme activity in the DM-0.5C, DM-1C, and DM-400E groups was lower than that in the DM and DM-0E groups. The cytochrome {TEX}$P_{450}${/TEX} and cytochrome {TEX}$b_{5}${/TEX} content and NADPH-cytochrome {TEX}$P_{450}${/TEX} reductase activity were about 50~110% higher in the DM and DM-0E groups than in the normal group, yet significantly reduced by either catechin or vitamin E supplementation. The superoxide dismutase (SOD) content in the liver did not differ significantly in any of the groups. However, the glutathione peroxidase (GSHpx) activity was generally lower in the diabetic groups, compared with the normal group, whereas that of the DM-0.5C, DM-1C, and DM-400E groups was significantly higher compared with that of the DM and DM-0E groups. The levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) in the liver tissue were 148% and 201% higher in the DM and DM-0E groups, respectively, compared with the normal group, however, these levels were reduced by either catechin or vitamin E supplementation (DM-0.5, DM-1C and DM-400E). Accordingly, the present results indicate that STZ-induced diabetic rats exhibited an imbalance between free radical generation and scavenger systems in the liver which led to the acceleration of lipid peroxidation. However, these abnormalities were reduced and the antioxidative defense system was restored by either dietary catechin or vitamin E supplementation. In conclusion, the effects of dietary catechin or vitamin E in streptozotocin-induced diabetic rats would appear to inhibit lipid peroxidation as an anti-oxidant by regulating the activity of {TEX}$PLA_{2}${/TEX}.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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