Proceedings of the Korean Society of Toxicology Conference
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2002.11b
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pp.164-164
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2002
The estrogenic activity of 47 plant extracts was assessed by reporter gene assay using MCF-7 breast cancer cell lines stably transfected with luciferase reporter gene. The estrogenic activity of food extracts was expressed as 17${\beta}$-estradiol(E2) equivalent concentration(EEQ), the concentration of E2 that resulted in the same relative luciferase unit(RLU) of the food extract of 0.2mg/$m\ell$.(omitted)
To establish whether or not androgens is responsible for the induction of vitellogenin(Vg) synthesis and secretion, primary hepatocytes prepared from immature eels were used. The results are follows: 1. Eel hepatocytes were prepared using a collagenase perfusion technique. The isolated cells attached efficiently to fibronectin-coated dishes and subsequently formed monolayers in serum-free medium. These cultures maintained in medium for 10 days with minimal cell loss. 2. Estradiol-17$\beta$(E2) alone was insufficient to induce Vg synthesis. The combination of E2 with methyltestosterone(MT) markedly stimulated Vg synthesis. High vg production occurred in MT concentration from 10-6~10-5M in the presence of E2 (10-6M). Testosterone and androsterone were also effective, but progesterone was not effective in inducing Vg synthesis. Neither MT alone nor testosterone and androsterone alone had any effect on Vg synthesis. 3. E2-primed hepatocytes showed Vg synthesis in both media with and without hormones 1 day after culture. In the cultures with the vehicle, MT, or progesterone, the rate of synthesis seemed to decrease with time. But the combination of E2 and MT showed an intense increase in Vg synthesis. Hepatocytes isolated from E2-primed eels also required androgens for continuating of Vg synthesis. 4. These results demonstrate that androgens act together with E2 in synthesis and secretion of eel Vg.
We studied oocyte steroidogenesis in blacktip grouper Epinephelus fasciatus ovarian follicles during vitellogenesis. Vitellogenic oocytes with average diameters of 0.45, 0.48 and 0.50 mm were incubated in vitro in the presence of $[^3H]17{\alpha}$-hydroxyprogesterone as a precursor. The steroid metabolites were analyzed using thin layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC), and gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS). The major metabolites in the vitellogenic oocytes were androstenedione ($A_4$), testosterone (T), estradiol-$17{\beta}$ ($E_2$), and estrone ($E_1$). The metabolites of androgen ($A_4$ and T) were higher in the 0.50-mm oocytes than in the 0.45- and 0.48-mm oocytes, while the estrogen metabolites (E2 and E1) were lower in the 0.50-mm oocytes. These results suggest that 0.50-mm oocytes are fully vitellogenic following initiation of the maturation process.
LEE Chi Hoon;NA Oh Soo;YEO In Kn;BAEK Hea Ja;LEE Young Don
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.33
no.5
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pp.373-377
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2000
This study Investigated the effects of $estradiol-l7{\beta} (E_2)$, $17{\alpha}-methyltestosterone$ (MT) and high temperature (WT) on gonadal sex differentiation in black rockfish, Sebastes srhlegeli. fish were reared to oral adminstration of E, at nominal concentrations of $20, 40 and 60 {\mu}g/g diet$, and MT at nominal concentration of 20 and $50 {\mu}g/g$ diet from 56 days to 77 days after parturition. In the treatment of WT, water temperature of the breeding tanks ranged $27.0{\pm}0.5^{\circ}C$ more than $10^{\circ}C$ approximately, in comparison to the control and other experimental group, In the process of sex differentiation until 56 days after parturition, gonads were composed of mostly gonia cells, sexually undifferentiated. In contrast, 128 dal's after parturition, the ovaries were composed of ovarian cavity and lamellae, and oogonia and perinucleolus oocytes were distributed in the lamellae of ovary, and the testes were composed of a number of seminiferous tubule, and spermatogonia were distributed in the seminiferous tubule, and also melanophore scattered in the matrix layer of testis. In the sex ratio, more females than male were observed from $E_2$. treatment groups when compared to the control, but more males than females were observed from MT and WT treatment groups when compared to the control. In the results of the present study, the concentration and kinds of the sex steroid hormones, and also the rearing high temperature caused to the factor of sex determination in the process of sex differentiation of black rockfish.
Objective: To elucidate 1) whether there are any differences in the urine concentrations of steroid hormone metabolites between patients with leiomyoma and normal controls 2) the correlation between urinary profiles of steroid hormones and leiomyomas of the uterus according to their type, location, volume, and weight. Materials of Methods : The study population consisted of 37 premenopausal patients with uterine leiomyoma and the control group consisted of 25 premenopausal normal volunteer women without uterine leiomyoma. Confirmation of the existence of uterine leiomyoma was done by ultrasonography and histopathological examination after surgery. The volume of the leiomyoma was estimated by trans-abdominal and/or trans-vaginal ultrasonography. The Leiomyomas were divided into 3 types (subserosal, intramural and submucosal). Seventeen patients had subserosal type of leiomyoma, 10 with the intramural type and 10 with the submucosal type. The locations of the leiomyoma were also divided into 3 groups (fundus, body and isthmus). Seventeen patients showed a fundus location, 10 in body, and 10 in isthmus. We compared urinary profiles of the endogenous steroids between patients with leiomyomas and normal controls, and also investigated the relationship between urinary profiles of the endogenous steroids and leiomyomas according to their type, location, volume and weight by using highly sensitive Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) system. Results: The mean ages of the patients with leiomyomas and the control group were $43.1{\pm}5.6$ and $40.6{\pm}7.2$ years, the weights were $63.4{\pm}7.3$ and $59.4{\pm}8.1\;kg$, and their heights were $155.4{\pm}4.8$ and $159.3{\pm}4.8\;cm$ respectively. Seventeen patients had subserosal, 10 had intramural, and 10 had submucosal leiomyomas. There were 17 patients with leiomyoma located in fundus, 10 in body and 10 in isthmus. $17{\beta}$-estradiol, 5-AT, 11-keto ET, $11{\beta}$-hydroxy An, $11{\beta}$-hydroxy Et, THS, THA, THE, a-cortolone, a-cortol, $\beta$-cortol, $11{\beta}$-OH Et/$11{\beta}$-OH An and E2/E1 were significantly increased in patients with leiomyoma than in the control group. $17{\beta}$-estradiol was significantly increased in the intramural and the submucosal types than in the subserosal type. There was no significant difference in the concentrations of urinary steroids according to the locations of leiomyomas. There was no significant relationship between the concentration of urinary steroids and the volume of the leiomyomas. $17{\beta}$-estradiol significantly decreased as the weight of uterus increased (r=-0.322, p=0.04). Conclusion: The concentrations of steroid hormone metabolites were generally increased in patients with leiomyoma but were not significantly related to the volume and weight of the leiomyomas. Our study suggests that steroid hormones may be involved in the initiation of leiomyomas but may not be involved in their progression. In addition, the concentrations of steroid hormone metabolites are not related to the leiomyoma type and location.
This study was performed to investigate the correlations between steroids and TGF-${\beta}_1$ levels and delayed parturition in SCNT clone calving. The recipients pregnant by AI were used as control (AI-R). All AI-R were labored by natural delivery (n=5, day $284{\pm}0.71$ of pregnancy). The recipients pregnant by SCNT embryo (SCNT-R) showing no signs of delivery about 10 days after expected date were operated by Caesarean section (n=5, day 292). The blood and placentome samples were obtained and weighed at parturition. The concentrations of plasma progesterone (P4) and Estradiol-$17{\beta}$ (E2) were measured by radioimmunoassay (RIA). The levels of plasma and placental TGF-${\beta}_1$ levels were examined by ELISA. The placentomes from SCNT-R were overweight (p<0.05) compared to those of AI-R. The plasma P4 (p<0.01) level in SCNT-R at parturition was significantly higher compared to that of AI-R. In contrast, the plasma E2 level in the SCNT-R was significantly lower compared to that of AI-R (p<0.05). The plasma and placental TGF-${\beta}_1$ protein levels in the SCNT-R were significantly higher than those of AI-R at parturition, respectively (p<0.01). Based on these results, aberrant expressions of steroid hormones and high levels of plasma and placental TGF-${\beta}_1$ protein at parturition may be one of the key indicators on delayed parturition of SCNT clone calving.
Al and Cd-induced inhibition of vitellogenin (VTG) production was examined at the estrogen receptor (ER) level in rainbow trout Oncorhynchus mykiss hepatocytes. The binding of $[^3H]$$estradiol-17\beta\;(E_2)$ to hepatocytes reached a plateau 3 days after addition of $E_2\;(2\times\;10^{-6} M)$to the medium. The binding activity was linearly reduced with the increased concentrations $(-10^{-5}\;M)$ of 4-hydroxy-tamoxifen (4-OHT) and specific binding linearly increased with the increased doses of $[^3H]\;E_2$, indicating that the radioligand bound to ER. Al $(-10^{-4}\;M)$and Cd $(10^{-6}\;M)$ as well as 4-OHT $(10^{-6}\;M)$ significantly reduced the $[^3H]\;E_2$-binding activity by $3040\%$, while they completely inhibited VTG production. Al and Cd had no effect on $E_2-human$$ER\alpha$ binding activity at any concentrations used $(-10^5\;nM\;each)$. These results suggested that Al and Cd inhibited VTG production in part by interfereing with the ER level. Inhibitory effects of these metals on the $E_z-dependent$ upregulation of ER activity are also discussed.
Phthalate esters are used extensively as a plasticizer in the manufacture of plastic products such as PVC bags and medical devices. Recently, phthalate esters have been shown to induce endocrine system mediated responses. However. only a Jew studies have been conducted for estrogenic activity of phthalate esters. In this study estrogenic activities of seven phthalate esters. butyl benzyl phthalate (BBP), di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP), di-n-butylphthalate (DBP), diethylphthalate (DEP), di-n-pentylphthalate (DPP), di-n-propylphthalate (DPrP) and dicyclohexylphthalate (DCHP), were examined in vitro using E-screen assay and competitive binding assay. From the E-screen assay, BBP. DEHP. DBP and DEP showed weak estrogenic activity at the concentration of 5 $\mu\textrm{M}$. The relative proliferative effect (RPE) and the relative proliferative potency (RPP) were 50~70% and 0.01%. respectively, when compared with 500 pM of 17$\beta$-estradiol (E2). In competitive binding assay with the rat uterine estrogen receptor (ER), BBP and DEP showed weak binding potency [(l/$10^4$~1/$10^5$ of E2] while DEHP and DBP scarcely bound to ER. These results suggest that some phthalate esters have weak estrogenic activities in vitro.
4-nonylphenol (4-NP)이 해산어류인 조피볼락, Sebastes schlegeli의 혈장 vitellogenin (VTG), alkaline-labile protein phosphorus (ALPP), calcium(Ca), glutamate pyruvate transaminase (GPT) 및 hepatosomatic index (HSI)에 미치는 영향을 조사하였다. 실험어에 3일간격으로 $estradiol-17{\beta}$ ($E_2$, 5 mg/kg B.W.) 또는 4-NP(0, 10, 50, 100및 200 mg/kg B.W.)을 복강에 2번 주사한 후, 7일째에 채혈과 적출을 통해 혈장과 간장을 수집해 분석이 실시되었다. 대조 실험어에는 용매로 사용된 70% 에탄올만이 투여되었다. $E_2$ 투여 실험어의 혈장 단백질을 전기 영동상으로 분석한 결과 약 170 kDa의 위치에서 짙은 VTG 밴드가 관찰되었으나, 용매만 투여한 대조 실험어의 혈장에서는 동일 밴드가 관찰되지 않았다. 4-NP 투여한 모든 실험어의 혈장 단백질에서는 $E_2$ 투여 실험어와 동일한 VTG 밴드가 관찰되었다. 혈장 ALPP와 Ca 농도도 4-NP 투여 실험어에서 $E_2$ 투여 실험어와 유사하게 증가하였으며, 이들 농도 변화는 VTG 합성과 더불어 증가하는 경향을 나타냈다. 혈장 전위효소인 GPT와 HSI도 $E_2$ 투여 실험어와 유사하게 4-NP가 투여된 모든 실험어에서 급격히 증가하였다. 이상의 결과로부터 연안생태계 내에서 서식하는 어류가 4-NP과 같은 내분비 장애물질(Endocrine Disrupting compounds, EDCs)에 의해 영향을 받는지를 규명하기 위한 생물학적 지표로서 VTG와 더불어 혈장 ALPP와 Ca이 사용가능 할 것으로 판단된다. 또한, 조피볼락과 같은 해산어가 EDCs에 노출되어 VTG가 합성될 때 간장 기능의 손상으로 혈장 전위효소인 GPT가 일시적으로 종가하고 간장도 비대해져 HSI가 높아지는 것으로 판단된다.
Lim, Han Kyu;Jeong, Min Hwan;Do, Yong Hyun;Son, Maeng Hyun
Journal of Fisheries and Marine Sciences Education
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v.24
no.6
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pp.1003-1012
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2012
The gonadosomatic index (GSI), sex steroid hormones and gonadal development of roughscale sole Clidoderma asperrimum cultured in indoor tank were investigated to evaluate its sexual maturation and reproductive cycle. The highest GSI values of female and male were $6.91{\pm}4.03$ (May) and $0.16{\pm}0.08$ (August), respectively. The reproductive cycle would be classified into four successive developmental stages: growing stage (December to February), maturation stage (March to April), ripe and spawning stage (May to June), recovery and resting stage (July to November). The highest plasma testosterone (T) and estradiol-$17{\beta}$ ($E_2$) levels of female were $259.4{\pm}76.8$ and $633.3{\pm}182.5$ pg/mL, respectively in May. Also $17{\alpha}$, $20{\beta}$-dihydroxy-4-pregen-3-one ($17{\alpha}$, $20{\beta}$-OHP) levels of female peaked in April before spawning season ($244.2{\pm}42.5$ pg/mL). The highest plasma testosterone (T) and 11-ketotestosterone levels of male were $231.0{\pm}46.0$ and $273.9{\pm}54.5$ pg/mL, respectively in April. But there was no significant difference in $17{\alpha}$, $20{\beta}$-OHP.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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