• 한국수산과학회지
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• 제35권2호
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• pp.115-121
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• 2002

R plasmid의 분포와 새로운 conjugation 방법 개발을 위하여, 한국의 남해안과 동해안의 양식현장의 어류질병관련 세균으로부터 항균제 다제 내성균을 분리하였다. 분리균 134종에서 10균주가 chlorarnphenicol, tetracycline, streptomycin, ampicillin, colistin, nalidixic acid, oxolinic acid, kanamycin 등에 대한 다제내성의 특성을 가지고 있었으며 이중 V. damsela JE1 한 균주는 chloram-phenicol과 tetracycline에 대한 내성전달 특성을 갖는 R plasmid 와 ampicillin과 kanamycin에 대한 유전자를 chromosome 등에 함유하고 있었다. 분리된 어병세균의 다제내성 특성이 R plasmid에 기인하는 것인지의 확인은 다양한 장내세균의 선택배지로 최근 개발된 CC 배지에서 각기 다른 균주들이 나타내는 증식여부 또는 집락 색깔의 차이를 이용하여 donor, recipient 그리고 transconjugant를 구별할 수 있는 방법을 적용하였다. Conjugation의 최적화를 위해 여러 가지 조건을 비교한 결과, V. damsela JE1의 R plasmid의 전달은 filter mating법을 사용하는 것이 broth mating법보다 약 100배 이상의 높은 성공률을 보여 주었으며 이때 사용온도는 30$^{\circ}C$ 이상, mating 시간은 24시간에서 가장 높은 전달 빈도를 나타내었다. R plasmid를 함유한 V. damsela JE1이 분리된 4개월 후, 동일 양식장의 동일 그룹의 넙치 장내세균에서 분리한 다제내성균 Sphingomonas sp. 3균주는 V. damsela JE1에서 분리된 것과 같은 크기의 R plasmid를 함유하고 있었으며, 그 특성 또한 V. damsela JE1의 R plasmid와 마찬가지로 다제 내성 중 Cm과 Tc에 대한 유전자만이 recipient로 전달되어 장내 세균총이 R plasmid의 reservoir로서의 역할을 하고 있음을 확인하였다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제14권1호
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• pp.43-54
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• 2011

Gene structure of copper/zinc-superoxide dismutase (Cu/Zn-SOD; sod1) was characterized in Hemibarbus mylodon (Teleostei; Cypriniformes), an endangered freshwater fish species in Korean peninsula. Full-length cDNA of H. mylodon SOD1 consisted of a 796-bp open reading frame sequence encoding 154 amino acids, and the deduced polypeptide sequence shared high sequence homology with other orthologs, particularly with regard to metal-coordinating ligands. Genomic structure of the H. mylodon sod1 gene (hmsod1; 1,911 bp from the ATG start codon to the stop codon) was typical quinquepartite (i.e., five exons interrupted by four introns); the lengths of the exons were similar among species belonging to various taxonomic positions. The molecular phylogeny inferred from sod1 genes in the teleost lineage was in accordance with the conventional taxonomic assumptions. 5'-flanking upstream region of hmsod1, obtained using the genome walking method, contained typical TATA and CAAT boxes. It also showed various transcription factor binding motifs that may be potentially involved in stress/immune response (e.g., sites for activating proteins or nuclear factor kappa B) or metabolism of xenobiotic compounds (e.g., xenobiotic response element; XRE). The hmsod1 transcripts were ubiquitously detected among tissues, with the liver and spleen showing the highest and lowest expression, respectively. An experimental challenge with Edwardsiella tarda revealed significant upregulation of the hmsod1 in kidney (4.3-fold) and spleen (3.1-fold), based on a real-time RT-PCR assay. Information on the molecular characteristics of this key antioxidant enzyme gene could be a useful basis for a biomarker-based assay to understand cellular stresses in this endangered fish species.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권4호
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• pp.535-539
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• 2016

제주도 넙치 양식장에서 주로 발생하는 어류질병세균인 S. parauberis, S. iniae, E. tarda에 대한 피해를 줄이고자 갈륨을 이용하여 어류질병세균을 억제하고자 한다. 본 연구진은 Sp, Si, Et의 생육도와 biofilm 형성능을 확인하였으며, 세균의 성장도와 biofilm 형성능간의 특정한 패턴은 없었으며 세균의 성장도가 높다 하더라도 biofilm을 활발히 형성하지 않음을 알 수 있었다. 어류질병세균이 형성하는 biofilm을 저해하기 위해 갈륨을 2.0, 4.0, 8.0 mg/ml로 첨가하여 저해능을 확인한 결과 72시간째 biofilm의 형성이 크게 저해되는 것을 확인하였다. 또한 biofilm을 저해하는 동시에 균주의 사멸능을 확인하기 위해 resazurin assay와 propidium iodide를 이용하여 염색한 결과 갈륨의 농도에 따라 균주의 사멸이 증가하는 것을 확인하였다. 이에 따라 in vitro 상에서 갈륨이 어류질병세균의 biofilm을 억제하는 동시에 균주를 사멸시키는 물질로서 가치가 있다고 사료된다.

• 한국수산과학회지
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• 제46권5호
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• pp.552-558
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• 2013

This study was performed to determine effects of the supplementation of Kimchi lactic acid bacterial culture in extruded pellets (EP) on the growth, body composition, blood chemistry and immune response of olive flounder Paralichthys olivaceus. Four hundred eighty individuals averaging 16.1 g were randomly distributed into 12, 180 L flow-through tanks (forty fish per tank). Four concentrations of Kimchi lactic acid bacterial culture (KL) were prepared: Control (0%), 0.1%, 0.2% and 0.5%. Three concentrations (0.1%, 0.2% and 0.5%) of Kimchi lactic acid bacterial culture were each diluted to 10% of EP weight and then fully absorbed by EP for 10 minutes. Each diet was fed to triplicate groups of fish. Fish were hand-fed to apparent satiation twice a day for 8 weeks. At the end of the 8-week feeding trial, the plasma lysozyme and bacterial activities of fish were determined. In addition, the cumulative mortality of fish was monitored for 8 days after their artificial infection with Edwardsiella tarda. The weight gain, specific growth rate, feed efficiency ratio, protein efficiency ratio, protein retention, hepatosomatic index and condition factor of fish were not affected by dietary supplementation with KL. None of the proximate composition, plasma parameters, lysozyme or bactericidal activities of fish was affected by dietary supplementation with KL. However, the cumulative mortalities of fish fed EP containing 0.1% and 0.5% Kimchi lactic acid bacterial culture were relatively low compared to that of fish fed the control diet. In conclusion, dietary supplementation with KL did not effectively improve growth, feed utilization, body composition, plasma chemistry, lysozyme, bactericidal activities or immune response of olive flounder after E. tarda infection under these experimental conditions.

• 수산해양교육연구
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• 제28권6호
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• pp.1640-1650
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• 2016

본 연구에서는 다양한 면역 유도제를 주사하여 갯지렁이의 면역을 유도시킨 후, 갯지렁이의 항균 펩타이드를 가장 많이 발현시킬 수 있는 최적의 면역 유도제를 선정하였으며, 선정된 면역 유도제로 면역을 유도한 갯지렁이를 분말화 하여 사료에 첨가하였을 때 양식 어류의 면역 활성을 증가시킬 수 있는지에 대한 여부를 조사하였다. 넙치와 조피볼락은 면역활성을 위한 갯지렁이 분말의 사료 첨가율이 서로 달랐으며, 넙치의 경우 0.1%의 사료 첨가율이 넙치의 라이소자임 활성, 혈청 내 코르티졸 농도뿐만 아니라 E. tarda에 대한 항병성에 가장 높은 효과를 보였다. 조피볼락은 0.5%의 사료 첨가율이 조피볼락의 라이소자임 활성을 증가시키고 혈청 내 코르티졸 농도를 감소시켰으며 S. iniae에 대한 항병성 또한 증가시켰다. 따라서 넙치와 조피볼락은 각각 면역 유도된 갯지렁이 분말이 0.1%와 0.5% 첨가된 사료를 급이하였을 때 면역 활성을 가장 많이 유도 할 수 있을 것으로 생각되지만, 반면 그 이상의 농도로 면역 유도된 갯지렁이 분말을 사료에 첨가하여 급이할 시 오히려 면역 활성에 부정적인 영향을 미칠 수 있을 것으로 생각된다. 이번 연구에서는 주간 8 갯지렁이 분말 첨가 사료를 급이한 것에 대한 양식 어류의 면역 활성을 검증 하였으며, 추후 연구에서는 갯지렁이 첨가사료의 급이 기간을 고려한 연구가 진행되어야 할 것으로 생각된다.

• 한국어병학회지
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• 제35권1호
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• pp.103-111
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• 2022

This study has been performed to investigate the potential effects of by-product discarded after probiotics production (BPPP) on growth performance, immune gene expression, innate-immunity status, and disease resistance of carp, Cyprinus carpio. For 3 weeks, carp were fed four diets containing different levels of BPPP at 0, 0.1, 0.2 and 0.5% per kg of normal diet. Every 7 days of feeding, immune-related gene expression, serum lysozyme activity and ACH₅₀ were analyzed. Growth rates and challenge test with E. tarda were conducted after 3 weeks of BPPP feeding. Both lysozyme activity and ACH₅₀ were significantly (p<0.05) increased in all BPPP supplemented groups compared to the control at every 7 day for 3 weeks of feeding trial. The gene expression of pro-inflammatory cytokines, IL-1β and TNF-α was significantly (p<0.05) up-regulated until 21 days of feeding in all groups except for 0.2% group on day 7 post feeding. The anti-inflammatory cytokine IL-10 gene expression was only significantly (p<0.05) increased in 0.1% group on day 7 and decreased (p<0.05) on day 14 in all BPPP supplemented groups. On day 21, the IL-10 gene expression was augmented (p<0.05) in all groups. SOD gene expression was significantly (p<0.05) increased compared to the control on day 14 and 21 post feeding, whereas no significant difference was observed on day 7. In challenging test, 0.2%, 0.1%, 0.5% and control group showed 80%, 70%, 60% and 40% of survival rate, respectively. Feed conversion rate was only improved in 0.5% group. In conclusion, the present study indicates that dietary BPPP suplementation improved growth performance, innate immune response and bactericidal activity in carp.

• 수산해양교육연구
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• 제29권3호
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• pp.834-846
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• 2017

Aquaculture practices to ensure greater production, such as high density breeding and excessive feeding, are become stressors that raise the prevalence of diseases. Accordingly, increasingly large volumes of antibiotics are used more frequently each year. Long term use antibiotics can generate resistant bacteria, which interrupt treatments and cause a potential transfer to human bodies. Thus, antibiotic resistance is of importance in public health. Tetracycline (Tc) is one of the typical medicines used in the aquaculture drugs, which has a wide range of application including gram-positive and gram-negative bacteria. In the examination of 153 strains isolated from olive flounder (Paralichthys olivaceus) farms located in Jeju in 2016, it turned out that a total of 84 strains were resistant to Tc or oxytetracycline (OTC). The extent to which the strains are resistant to Tc and OTC was confirmed through MIC test, mostly within the range of 25 to $100{\mu}g/m{\ell}$. Twelve different types of tet genes were detected using single and multiplex PCR in the 84 Tc-resistant strains. The PCR was used to find tet(K), tet(M), tet(O), and tet(S), which are known to exist primarily in gram positive strains. According to the results, - tet(S) is the most dominant gene in 49 strains of Streptococcus parauberis, accounting for 63.2%. And there were two strains that have two different types of resistant genes. The multiplex PCR was used to detect tet(A), tet(B), tet(C), tet(D), tet(E), and tet(G), which are commonly found in gram-negative strains. Each of tet(B), tet(D), and tet(B)&(M) was found in a strain presumed to be Vibrio sp., and only tet(D) was found in 10 Edwardsiella tarda strains.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제31권5호
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• pp.380-385
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• 2016

사람과 어류에게 감염증을 유발하는 Edwardsiella sp., Streptococcus sp. 및 Vibrio sp. 의 해양 유해세균에 대한 해조류 추출물의 항균 활성을 조사하였다. 연구에 사용된 4종의 식용 해조류 중에서 감태 MeOH 추출물이 본 연구에서 사용 된 6종의 모든 해양 유해세균에 대해 넓은 범위의 항균 활성을 나타내었다. 감태의 MeOH 추출물의 유기용매 분획 추출물들 중에서, EtOAc 분획 추출물이 가장 높은 항균활성을 나타내었으며 6종의 해양 유해세균에 대하여 $128{\mu}g/mL$에서 $256{\mu}g/mL$의 MIC 값을 나타내었다. 또한, HPLC 분석에 의해 감태 EtOAc 분획 추출물에 phlorotannin 화합물인 dieckol이 다량 존재하고 있는 것이 확인 되었다. 결론적으로, 감태 추출물의 phlorotannin 화합물이 여러 유해세균에 대한 강한 항균활성을 나타내는 것처럼, 해양 유해세균에 대해서도 강한 항균활성을 나타내는 것으로 판단된다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제17권4호
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• pp.471-478
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• 2014

Genomic organization, including the structural characteristics of 5'-flanking regions of two 65-kDa protein (WAP65) isoform genes associated with warm temperature acclimation, were characterized and their transcriptional responses to immune challenges were examined in the intestine, kidney and spleen of the mud loach (Misgurnus mizolepis; Cypriniformes). Both mud loach Wap65 isoform genes displayed a 10-exon structure that is common to most teleostean Wap65 genes. The two mud loach Wap65 isoforms were predicted to possess various stress- and immune-related transcription factor binding sites in their regulatory regions; however, the predicted motif profiles differed between the two isoforms, and the inflammation-related transcription factor binding motifs, such as NF-${\kappa}B$ and CREBP sites, were more highlighted in the Wap65-2 isoform than the Wap65-1 isoform. The results of qRT-PCR indicated that experimental immune challenges using Edwardsiella tarda, lipopolysaccharide or polyI:C induced the Wap65-2 isoform more than Wap65-1 isoform, although modulation patterns in response to these challenges were tissue- and stimulant-dependent. This study confirms that functional diversification between the two mud loach Wap65 isoforms (i.e., closer involvement of Wap65-2 in the acute phase of inflammation and innate immunity) occurs at the mRNA level in multiple tissues, and suggests that such differential modulation patterns between the two isoforms are related to the different transcription factor binding profiles in their regulatory regions.

• 생명과학회지
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• 제24권7호
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• pp.757-761
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• 2014

천연 항균물질의 연구는 대부분 식품소재, 특히 약용식물을 대상으로 하여 많은 연구가 진행되어 왔다. 그러나 식품소재의 경우 대량의 추출물 등을 제조하기 위해 많은 양의 재료가 필요하며, 이로 인한 비용 문제가 발생하게 된다. 미생물은 적절한 환경 하에서 대량 배양이 용이하기 때문에 천연항생제로 이용하기 위해 지속적인 연구가 이루어지고 있다. 본 연구에서는 식물병 억제에 효과가 있는 식물근권미생물을 이용하여 어류질병세균 4종을 대상으로 항균활성을 확인하였다. 이 중 항균활성을 나타낸 균 3종을 선발하여 배양액, 상층액, 균체 현탁액으로 나누어 어느 부위에서 항균효과를 나타내는지 탐색하고, 16S rDNA 염기서열 분석을 통해 균을 동정하였다. 12종의 식물근권세균 중 BRH433-2, THJ609-3, TRH415-2 3종에서 항균활성이 나타나는 것을 확인하였다. 세 균주의 배양액, 상층액, 균체 현탁액 중에서는 균체 현탁액이 가장 강한 항균활성을 나타내는 것을 알 수 있었다. 세 균주의 16S rDNA 염기서열 분석 결과, BRH433-2는 Burkholderia gladioli와 99.5%, B. plantarii 98.9%, B. ubonensis 98.5%, B. pyrrocinia 98.3%, B. glumae 98%로 나타났다. THJ609-3은 Pseudomonas baetica와 97.7%, P. moorei와 P. plecoglossicida에 대해서는 각각 97.6%, 97.5%의 상동성이, TRH415-2는 P. koreensis, P. baetica와 98.4%, P. moraviensis 98.3%의 염기서열 유사도를 나타났다. 따라서 3종의 식물근권세균은 충분한 안정성 및 안전성 실험을 실행한 후, 양식산업에 적용하여 항생제 대체 물질로서의 이용가치가 있다고 생각된다.