본 연구에서는 우리나라에서 분리된 E. tarda KFE와 일본에서 분리된 E. tarda Edk-2 두 균주의 항혈청을 만들어 생산된 항체의 특성과 방어효과를 분석하고자 하였다. 우리나라에서 많이 양식되어지고 있는 담수어인 미꾸라지를 사용하여 위의 두 가지 분리균주의 항원성에 있어서의 차이점을 조사하고자 하였다. 미꾸라지를 E. tarda 두 균주의 FKC로 각각 면역시킨 후의 혈청내 특이 항체량은 E. tarda KFE 균주로 면역시켰을 때에 비해 E. tarda Edk-2 균주로 면역시켰을 때 훨씬 높은 수치를 나타내었다. 그리고 교차반응 분석에서는 두 균주 간에 공통 항원이 미약하게 존재하는 것을 확인하였으며 미꾸라지 항혈청의 살균효과를 보았을 때에는 두 종류의 항혈청 모두에서 항체의 살균 능력이 있음을 확인하였다. 감염 예방 효과를 가지고 있는 polysaccharide-bound protein (PS-K)을 미꾸라지에 주사한 후 1주째에 E. tarda KFE 분리균주로 공격 실험을 실시하여 본 결과 누적 폐사율이 감소하였으므로, PS-K의 투여는 E. tarda를 포함한 세균성 감염에 대한 효과적인 감염 대책 방안의 하나가 될 수 있음을 확인하였다.
어류의 세균성질병 원인체인 Edwardsiella tarda 감염의 예방과 치료에 E. tarda로 면역한 계란으로부터 얻어진 난황항체 (IgY)의 잠정적인 사용을 평가하였다. PEG법으로 정제된 IgY는 64 kDa의 heavy chain과 27 kDa의 light chain을 가지고 있었다. IgY는 사료 공급 후 위의 pH가 3.4로 낮아지는 2시간째에는 대부분의 활성을 상실하였으나, 장내에서는 IgY의 활성이 나타났다. IgY의 효능 실험 결과 감염 초기에 IgY를 20 mg/fish로 공급한 그룹은 모든 실험에서 대조 그룹에 비해 높은 생존율을 나타내었으며, 장기 내에서 균의 감염 정도 역시 낮았다. 그러나 감염 후기에서는 생존율에 있어서의 유의적인 차이를 확인하기 힘들었다. 이는 넙치의 위에서 대부분의 IgY가 활성을 잃어 낮은 농도만이 장으로 이동하기 때문일 것으로 사료되며, 이 농도에서 IgY는 E. tarda에 대한 뚜렷한 예방이나 치료의 효과 보다는 감염시기를 어느 정도 연장시키는 역할을 하는 것으로 추정된다.
Edwardsiella tarda, Streptococcus iniae and S. parauberis are main bacterial pathogens in aquaculture farms of olive flounder, Paralichthys olivaceus. We have discussed the efficacy and safety of 3 type-combined vaccines (A: S. iniae 1mg + S. parauberis 1mg + E. tarda 1mg, B: S. iniae 1mg + S. parauberis 1mg + E. tarda 0.5mg, C: S. iniae 1.5mg + S. parauberis 1.5mg + E. tarda 1mg) through intraperitoneal injections in olive flounder. None of the vaccines gave rise to any signigicant side effects on histopathology and blood chemistry. The antibody titers and lysozyme activities of A type were higher than those of B, C and control. Four weeks after vaccination, RPS (relative percent survival rates) was 62.5~75% (A type), 50~66.7% (B type) and 55.6~62.5% (C type) respectively. As the results, the combined vaccines are possible to prevent edwardsiellosis and streptococcosis, and A type : S. iniae 1mg + S. parauberis 1mg + E. tarda 1mg, is the most effective out of them.
Kim, Min-Gi;Gunathilaka, Buddi E.;Lee, Sungho;Kim, Youjeong;Lee, Kyeong-Jun
Fisheries and Aquatic Sciences
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제25권4호
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pp.243-249
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2022
Bacillus SW1-1 is a probiotic isolated from shrimp intestines. We investigated the effects of Bacillus SW1-1 coated diets on the growth, feed utilization, innate immunity, hematological parameters and resistance to Edwardsiella tarda in olive flounder (Paralichthys olivaceus). A commercial diet was used as the control (AP0) and two other diets were prepared by coating 0.25% (AP25) or 0.50% (AP50) probiotic powder which contains 1.0 × 107 CFU/g Bacillus SW1-1. Four replicate groups of olive flounder (153 ± 2 g) were fed one of the diets for 12 weeks. Growth performance and feed utilization of the fish were not significantly affected by the dietary Bacillus SW1-1. After the challenge with E. tarda, AP50 group showed significantly higher survival than AP0 and AP25 groups. Innate immunity and anti-oxidant capacity of the fish were not significantly affected after the feeding trial. However, after the E. tarda challenge, the innate immune parameters (immunoglobulin, lysozyme and anti-protease) were significantly improved in fish fed AP25 and AP50 diets compared to those in fish fed AP0 diet. After the challenge test, significantly lower glucose level was observed in AP50 group compared to AP0 group. These results indicate that dietary supplementation of Bacillus SW1-1 could increase the disease resistance of olive flounder against E. tarda infection. The optimum coating levels of Bacillus SW1-1 needs to be further elucidated.
산화된 사료에 첨가한 비타민 E, C 와 glycyrrhizin이 나일 틸라피아의 성장 및 Edwardsiella tarda 감염 시 저항력에 미치는 영향을 알아 보기 위해 thiobarbitric acid (TBA) 값이 $80\~88$ mg/kg 사료만을 단독으로 또는 이 사료 100 g 당 비타민 E (50 mg), C (60 mg)과 glycyrrhizin ($25\~200$ mg) 등을 각기 또는 상호 혼합하여 7 주간 사육하였다. 사육후 성장을 조사한 결과 비타민 E, C 및 glycyrrhizin 등을 각기 또는 혼합한 실험군이 산화된 사료만을 투여한 대조군에 비해 성장율이 좋았으며, 혈청 내의 glutamic oxaloacetic transaminase (GOT)와 glutamic pyruvic transaminase (GPT) 값은 산화된 사료를 투여한 실험군에서만 매우 높게 나타났다. 질병원인 E. tarda를 인위적으로 감염시켰을 때 저항력에 있어서도 glycyrrhizin 25 mg 투여군을 제외한 비타민 E, C 및 glycyrrhizin 등을 투여한 실험군이 산화된 사료만을 투여한 대조군에 비해 생존율이 현저히 높았다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 산화된 사료만을 나일 틸라피아에 투여했을 때 성장 및 간의 활성도가 떨어지는 반면, 비타민 E, C 및 glycyrrhizin 등을 섞어서 투여했을때 성장 및 간의 활성도가 증가되었을 뿐만 아니라 E. tarda에 대한 저항력도 증가되었음을 알 수 있었다.
본 연구에서는 1% 마늘 추출액을 사료에 첨가하여 항균력 시험, 혈액학적 분석 및 어류질병 원인체들 (Viral Hemorrhagic Septicemia Virus, Vibrio anguillarum, Streptococcus iniae, Edwardsiella tarda)에 대한 비특이적 면역반응을 조사하였다. 사료에 1% 마늘 추출액을 첨가하여 4주간 넙치에 섭이시킨 후 V. anguillarum, S. iniae, E. tarda을 인위 감염시켜 2주간 누적 폐사율을 관찰하였다. 공격 실험 결과 E. tarda를 제외한 모든 시험구에서 대조구에 비해 낮은 누적 폐사율이 관찰되었다. Hematocrit, glucose, total protein, lysozyme activity 및 macrophage activity에서는 대조구에 비해 유의적으로 높은 수치를 관찰하였다. 3가지 어병세균 (V. anguillarum, S. iniae, E. tarda)을 이용하여 마늘 항균력 및 MIC를 측정한 결과, 이전에 보고된 마늘 분말보다 1% 마늘 추출물에서 더 효과적인 결과를 관찰하였다. 이러한 결과는 마늘 추출물이 넙치의 V. anguillarum, S. iniae, E. tarda에 대한 비특이적 면역반응 및 질병저항력을 증가시키는 것으로 사료된다.
틸라피아에 실험적으로 Edwardsiella tarda를 경구감염 시켰다. 틸라피아의 장을 자극시키지 않았을 때는 E. tarda가 감염되지 않았으나 과산화수소로 장을 자극시킨후 E. tarda를 투여하였더니 감염되었다. 150~200g되는 틸라피아 한마리에 $10^6CFU/m{\ell}$, $10^7CFU/m{\ell}$, $10^8CFU/m{\ell}$를 투여한 4일 후부터 죽은 실험어의 간장, 신장, 비장에 농창이 형성되었다. 또한 장관 장해부에서 세균이 증식되어 전신감염으로 급히 발병되어 죽은 예가 많았다. 자연감염어에서 볼 수 있는 증상이 나타났다.
단백질 결합 다당류인 PS-K가 Edwardsiella tarda의 감염에 대한 나일 틸라피아(Oreochromis niloticus)의 저항력 증강 효과에 대한 능력분석을 실시하였다. PS-K를 0.1 mg/g 어체중의 농도로 처리한 나일 틸라피아에 대하여 여러 농도외 E. tarda로 공격 실험을 하였다. 저농도($1.2{\times}10^7$ 그리고 $1.2{\times}10^8$ cfu/틸라피아)의 공격에 대하여 PS-K 처리구는 100% 생존율을 나타내었고 대조구는 각각 50%와 100%의 폐사율을 보여 주었다. 그러나 고농도의 E. tarda($1.2{\times}10^9$ 그리고 $1.2{\times}10^{10}$ cfu/틸라피아) 공격에 대해서는 약간의 수명 연장효과만 있었을뿐 대조구와 같이 100%의 폐사율을 보여 주었다. E. tarda($1.2{\times}10^7$ cfu/틸라피아) 공격 1주일 후 PS-K를 복강 투여한 나일 틸라피아는 100%의 생존율을 나타내었으나 대조구는 50% 생존율을 나타내어 PS-K가 가지고 있는 치료제로서의 잠재력을 보여 주었다. 그리고 PS-K 투여 1주일 후 주사된 E. tarda FKC에 대하여 보여준 나일 틸라피아의 높은 항체 반응은 PS-K가 어류의 특이 액성 면역반응에 관여하여 어류가 세균 감염시 높은 저항성을 갖게 하여 주는 것으로 나타났다.
양식 넙치에 Edwardsiella tarda 또는 Streptococcus iniae를 단독 또는 혼합감염하여 넙치에서 병원성을 비교하였다. 넙치에 단독 또는 혼합감염 후 혈액생화학적 성상으로 alanine aminotransferase (ALT), aspatate aminotransferase (AST), glucose 농도, total protein 농도를 조사하였으며, 라이소자임 활성, 신장과 비장 조직 중의 세균수, 조직병리학적 변화와 누적폐사율을 조사하였다. 혼합감염구는 다른 시험구에 비하여 누적폐사율, 신장과 비장 조직 중의 세균수, AST활성과 병리조직학적 변화가 크게 나타났으나, 라이소자임 활성에서는 유의적인 차이가 보이지 않았다. 따라서 E. tarda와 S. iniae의 혼합감염은 신장과 비장 조직 중의 세균수 증가와 내부 장기의 손상으로 숙주에 높은 병원성을 나타낸 것으로 판단된다.
Fang, Wang;Zhang, Min;Hu, Yong-Hua;Zhang, Wei-wei;Sun, Li
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제19권8호
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pp.765-773
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2009
Edwardsiella tarda is a pathogen with a broad host range that includes human and animals. The E. tarda hemolysin (Eth) system, which comprises EthA and EthB, is a noted virulence element that is widely distributed in pathogenic isolates of E. tarda. Previous study has shown that the expression of ethB is regulated by iron, which suggests the possibility that the ferric uptake regulator (Fur) is involved in the regulation of ethB. The work presented in this report supports the previous findings and demonstrates that ethB expression was decreased under conditions when the E. tarda Fur ($Fur_{Et}$) was overproduced, and enhanced when $Fur_{Et}$ was inactivated. We also identified a second ethB regulator, EthR, which is a transcription regulator of the GntR family. EthR represses ethB expression by direct interaction with the ethB promoter region. In addition to ethB, EthR also modulates, but positively, luxS expression and AI-2 production by binding to the luxS promoter region. The expression of ethR itself is subject to negative autoregulation; interference with this regulation by overexpressing ethR during the process of infection caused (i) drastic changes in ethB and luxS expressions, (ii) vitiation in the tissue dissemination and survival ability of the bacterium, and (iii) significant attenuation of the overall bacterial virulence. These results not only provide new insights into the regulation mechanisms of the Eth hemolysin and LuxS/AI-2 quorum sensing systems but also highlight the importance of these systems in bacterial virulence.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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