• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권3호
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• pp.443-448
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• 2008

Multidomain proteins for the biochemical analysis of the scouring efficiency of cotton fabrics were constructed by the fusion of a reporter moiety in the N-terminal and the cellulose binding domain (CBD) in the C-terminal. Based on the specific binding of the CBD of Cellulomonas fimi exoglucanase (Cex) to crystalline cellulose (Avicel), the reporter protein is guided to the cellulose fibers that are increasingly exposed as the scouring process proceeds. Among the tested reporter proteins, a thermostable ${\beta}$-glycosidase (BglA) from Thermus caldophilus was found to be most appropriate, showing a higher applicability and stability than GFP, DsRed2, or a tetrameric ${\beta}$-glycosidase (GUS) from Escherichia coli, which were precipitated more seriously during the expression and purification steps. When cotton fabrics with different scouring levels were treated with the BglA-CBD and incubated with X-Gal as the chromogenic substrate, an indigo color became visible within 2 h, and the color depth changed according to the conditions and extent of the scouring.

• Molecules and Cells
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• 제37권3호
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• pp.248-256
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• 2014

N-acetylglucosamine kinase (GlcNAc kinase or NAGK; EC 2.7.1.59) is a N-acetylhexosamine kinase that belong to the sugar kinase/heat shock protein 70/actin superfamily. In this study, we investigated both the expression and function of NAGK in neurons. Immunohistochemistry of rat brain sections showed that NAGK was expressed at high levels in neurons but at low levels in astrocytes. Immunocytochemistry of rat hippocampal dissociate cultures confirmed these findings and showed that NAGK was also expressed at low levels in oligodendrocytes. Furthermore, several NAGK clusters were observed in the nucleoplasm of both neuron and glia. The overexpression of EGFP- or RFP (DsRed2)-tagged NAGK in rat hippocampal neurons (DIV 5-9) increased the complexity of dendritic architecture by increasing the numbers of primary dendrites and dendritic branches. In contrast, knockdown of NAGK by shRNA resulted in dendrite degeneration, and this was prevented by the co-expression of RFP-tagged NAGK. These results suggest that the upregulation of dendritic complexity is a non-canonical function of NAGK.

• 성인간호학회지
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• 제23권2호
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• pp.111-122
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• 2011

Purpose: The aim on this study was to establish the validity, reliability and efficiency of a Pain Self-Report Scale for elderly with dementia and compare these results with an observational pain rating scale. Methods: Study subjects were 136 elderly with dementia who were residents in a nursing home, geriatric hospital, or day care center. The subject's pain was measured by five self-report scales and observational scale. DS-DAT (discomfort scale-dementia of the Alzheimer's type) was used for pain behavior observational measure. Cognitive state was assessed using the MMSE (Mini-Mental State Examination). Results: Observational rating correlated moderately with self-report (r=.225~.585, p<.05) and tended to underestimate pain intensity. Test-retest reliability was high for all five self-report scales, and the correlation between these scales was very strong (r=.735~.856, p<.05). Comprehension rate of VDS (verbal descriptor scale) was 88.3%, and NRS (numeric rating scale) 69.9%, FPS (face pain scale) 66.9%, HVAS (horizontal visual analog scale) and VVAS (vertical visual analog scale) 65.4%. Conclusion: Nurses should not apply observational scales routinely in demented patients as many of these are capable of reporting their own pain. Self-report, the highest standard of pain measurement can be reliably performed in a large proportion of demented elderly.

• BMB Reports
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• 제56권2호
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• pp.102-107
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• 2023

Genome editing using CRISPR-associated technology is widely used to modify the genomes rapidly and efficiently on specific DNA double-strand breaks (DSBs) induced by Cas9 endonuclease. However, despite swift advance in Cas9 engineering, structural basis of Cas9-recognition and cleavage complex remains unclear. Proper assembly of this complex correlates to effective Cas9 activity, leading to high efficacy of genome editing events. Here, we develop a CRISPR/Cas9-RAD51 plasmid constitutively expressing RAD51, which can bind to single-stranded DNA for DSB repair. We show that the efficiency of CRISPR-mediated genome editing can be significantly improved by expressing RAD51, responsible for DSB repair via homologous recombination (HR), in both gene knock-out and knock-in processes. In cells with CRISPR/Cas9-RAD51 plasmid, expression of the target genes (cohesin SMC3 and GAPDH) was reduced by more than 1.9-fold compared to the CRISPR/Cas9 plasmid for knock-out of genes. Furthermore, CRISPR/Cas9-RAD51 enhanced the knock-in efficiency of DsRed donor DNA. Thus, the CRISPR/Cas9-RAD51 system is useful for applications requiring precise and efficient genome edits not accessible to HR-deficient cell genome editing and for developing CRISPR/Cas9-mediated knockout technology.

• 생명과학회지
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• 제17권2호통권82호
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• pp.198-203
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• 2007

형질전환은 유전자의 기능을 이해하는데 매우 중요한 기법이다. $Ca^{2+}$-인산 침전법은 시간과 비용이 저렴하여 가장 흔히 사용된다. 그러나 성숙 신경세포는 어린 신경세포나 다른 세포종에 비하여 형질전환이 어렵고 쉽게 죽는다. 본 연구에서는 Clontech사의 $CalPhos^{TM}$ Mammalian Transfection 방법을 수정하여 성숙한 신경세포를 효율적으로 형질전환할 수 있는 방법을 고안하였다. 대뇌 신경교세포를 DMEM/10% 말혈청에서 70-80% confluence까지 키우고 배지를 혈청이 첨가되지 않은 Neurobasal/Ara-C로 바꾸어 주어 더 이상 신경교세포가 분열하지 않게 한 다음, 여기에 E19 해마신경세포를 접종하여 배양하였다. $DNA/Ca^{2+}$-인산 침전물은 Clontech사의 $CalPhos^{TM}$ Mammalian Transfection Kit을 이용하여 크기($0.5-1\;{\mu}m$ in diameter) 및 농도(약 10 particles/$100\;{\mu}m^2$)를 배지에서 배양시간을 변화시켜 적당히 조절하였다. 이렇게 하면 in vitro에서 2주 이상 배양한 신경세포도 24-well plate 한 well당 10-15개의 형질전환된 건강한 신경세포를 얻을 수 있었다. 이 방법의 효용성을 검증하기 위하여 연접단백질인 $EGFP-CaMKII{\alpha}$ 융합단백질과 RFP 단백질 유전자(각각 $pEGFP-CaMKII{\alpha}$ 및 pDsRed2)를 형질전환한 결과 전자는 점박이 모양, 후자는 세포전체에 퍼진 양상의 표현을 관찰할 수 있었다. 따라서 본 연구는 성숙한 신경세포를 효율적으로 형질전환할 수 있는 방법을 제공한다.

• 한국환경농학회지
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• 제32권3호
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• pp.193-200
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• 2013

형광등이나 LED와 같은 인공광을 사용하는 식물공장(인공광 식물공장)은 계절에 상관없이 광, 온도 및 습도 등을 인위적으로 제어하면서 작물을 안정적으로 연중 생산할 수 있는 시스템이다. 본 연구에서는 수경재배 방식을 채택하고 있는 인공광 식물공장 시스템 내에서 엽채재배용 배양액을 이용한 방풍나물의 수경재배 가능성과 혼합광질이 생장에 미치는 영향을 검토하였다. 방풍나물은 청색과 적색 LED를 1:1 및 1:3의 비율로 혼합한 혼합광 조건에서 90일간 수행하였다. 광원의 광강도는 $100{\mu}mol/m^2/s$로 설정한 후 30일 간격으로 지상부 잎을 3회 수확하여 생장량을 조사하였다. 재배기간 동안 형광등과 LED의 혼합광 조사는 방풍나물 지상부 생장에 유의한 영향을 미치는 것으로 나타났다. 재배개시 30일째 방풍나물 지상부 생체중 및 건물중은 형광등+청색+적색의 혼합광(청, 적색 혼합비율 1:3, FLBR13구)에 의한 영향을 받아, 대조구인 형광등 조사구(FL구)에 비해 각각 3.7배 및 2배 증가하였다. 또한 식물체당 전개엽수는 FLBR13구에서 형광등+청색+적색 혼합광(청, 적색 혼합비율 1:1) 조사구인 FLBR11구에 비해 유의하게 증가하였다. LED와 형광등을 혼합 조사한 처리구에서와 같이, 형광등을 혼합하지 않고 청색과 적색의 LED만을 혼합하여 조사한 처리구에서도 청색과 적색의 혼합비율이 1:1인 BR11구에 비해 적색광의 혼합비율을 3배 증가시킨 BR13구에서 방풍나물의 지상부 생장이 촉진되었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제47권2호
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• pp.117-124
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• 2009

Toxoplasma gondii provokes rapid and sustained nuclear translocation of the signal transducer and activator of transcription 6 (STAT6) in HeLa cells. We observed activation of STAT6 as early as 2hr after infection with T. gondii by the nuclear translocation of fluorescence expressed from exogenously transfected pDsRed2-STAT6 plasmid and by the detection of phosphotyrosine-STAT6 in Western blot. STAT6 activation occurred only by infection with live tachyzoites but not by co-culture with killed tachyzoites or soluble T. gondii extracts. STAT6 phosphorylation was inhibited by small interfering RNA of STAT6 (siSTAT6). In view of the fact that STAT6 is a central mediator of IL-4 induced gene expression, activation of STAT6 by T. gondii infection resembles that infected host cells has been stimulated by IL-4 treatment. STAT1 was affected to increase the transcription and expression by the treatment of siSTAT6. STAT6 activation was not affected by any excess SOCS's whereas that with IL-4 was inhibited by SOCS-1 and SOCS-3. T. gondii infection induced Eotaxin-3 gene expression which was reduced by $IFN-{\gamma}$. These results demonstrate that T. gondii exploits host STAT6 to take away various harmful reactions by $IFN-{\gamma}$. This shows, for the first time, IL-4-like action by T. gondii infection modulates microbicidal action by $IFN-{\gamma}$ in infected cells.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권3호
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• pp.530-539
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• 2016

Bacterial light-oxygen-voltage-sensing photoreceptor-derived flavin mononucleotide (FMN)-based fluorescent proteins act as a promising distinct class of fluorescent proteins utilized for various biomedical and biotechnological applications. The key property of its independency towards oxygen for its chromophore maturation has greatly helped this protein to outperform the other fluorescent proteins such as GFP and DsRed for anaerobic applications. Here, we describe the feasibility of FMN-containing fluorescent protein FbFP as a metal-sensing probe by measuring the fluorescence emission changes of a protein with respect to the concentration of metal ions. In the present study, we demonstrated the mercury-sensing ability of FbFP protein and the possible amino acids responsible for metal binding. A ratiometric approach was employed here in order to exploit the fluorescence changes observed at two different emission maxima with respect to Hg²⁺ at micromolar concentration. The engineered variant FbFP_C56I showed high sensitivity towards Hg²⁺ and followed a good linear relationship from 0.1 to 3 μM of Hg²⁺. Thus, further engineering with a rational approach would enable the FbFP to be developed as a novel and highly selective and sensitive biosensor for other toxic heavy metal ions as well.

• 한국유기농업학회지
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• 제15권3호
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• pp.319-330
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• 2007

본 연구는 토탄을 육묘용 배양토의 재료로 이용하기 위하여 토탄의 이화학적특성을 분석하였고 토탄과 다른 재료들 간의 혼합비율에 따른 원예작물의 발아능과 묘소질을 조사하여 토탄을 배양토의 재료로 활용하기 위한 방법을 연구한바 이에 그 결과를 하면 다음과 같다. 1. 배양토의 주재료인 토탄의 화학적 특성의 경우에는 pH는 4.9이며 EC의 경우에는 생육에 장애를 유발하는 $2.0ds{\cdot}m^{-1}$ 수준 이하이고 유기물함량이 33%이었다. 2. 배양토 재료들의 혼합비율에 따른 작물들의 발아특성을 보면 고추의 경우에는 토탄 단일처리구가 발아세 54.2%이고 발아율도 97%로 고추발아에 적합하였다. 오이의 경우에는 주재료인 토탄과 부재료인 버미큘라이트, 피트모스, 펄라이트의 혼합 비율이 50 : 50인 처리구들의 발아율이 모두 100%로 오이발아에 적합하였다. 배추의 경우에는 토탄과 펄라이트, 피트모스의 혼합비율이 50 : 25 : 25인 처리구가 발아세가 71.5%로 가장 놓았으나 발아율은 92.15%로 배추발아에 적합하였다. 수박의 경우에는 토탄의 혼합비율이 80%이상일 경우에는 EC의 영향으로 발아가 불량하였으나 토탄과 버미큘라이트의 혼합비율이 50 : 50 처리구는 발아세가 91.6%이고 발아율은 100%로 나타나 수박 발아에 적합하였다. 3. 재료의 혼합비율에 따른 작물의 생육을 보면 오이의 경우에는 토탄과 펄라이트 혼합비율이 50 : 50처리구가 묘소질 및 묘건전도가 우수하여 오이의 배양토로 적합하였다. 수박의 경우에는 토탄 : 피트모스 : 펄라이트의 혼합비율이 80 : 10 : 10인 처리구가 묘소질 및 묘건전도가 우수하여 수박의 배양토로 적합하였다.균제의 첨가는 질소 축적을 다소 증가시키는 경향을 나타내었다. 이상의 결과로부터, 사료 내 조농비율이 다른 두 사료에 생균제의 급여는 사료 섭취량, 영양소 소화율 및 질소 축적에 유의한 영향을 미치지 않았고, 흑염소에 대한 이들 변수는 생균제에 의한 결과라기보다는 조농비율에 의하여 지배적으로 나타나는 것으로 나타났다.다. vivo실험이 병행되어져야 할 것으로 사료된다.석을 통해서 발견된 벤치마킹항만들(대산항, 옥포항, 울산항)의 항만관리방법을 도입해야만 한다.는 위험요소에 대한 사정이 있어서 손실의 발생가능성을 고려하는 것이고, 세 번째 단계는 손실의 위험성을 평가하는 것이다. 취약성을 평가하고, 손실발생가능성을 측정하고, 그 손실로 인한 위험성을 계량화(수치화)한 위험분석의 결과를 토대로 위험요소별 평가등급을 정하고 최종적으로 위험수준을 결정하게 된다. 위험수준은 경비안전시스템에 대한 보완대책 수립의 기초가 된다. 손실에 대비하고 손실을 최소화하기 위한 위험관리대책을 수립함에 있어 보험이 가장 주요한 수단이기는 하나, 모든 위험을 다 보험에 맡길 수는 없다. 오히려 경비의 비용효과를 고려하고, 경비화일을 활용하여 발전적인 위험관리대안을 제시해야 한다. 이 때 위험요소의 원천을 제거하는 것이 최상의 방책이며, 그 경로를 차단하는 것이 차선이다. 아울러, 안전에 관한 회사내규를 강화하고, 안전과 위험관리에 관한 교육을 지속적이고 반복적으로 실시하여야 한다. 위험관리는 사업의 손실후 연속성을 위해 가장 효율적인 손실전 준비를 하는 것이다. 따라서 가장 비용효과적이고 생산적인 위험관리 방안을 제시하는 것이 무엇보다 중요하며, 이 기능은 지속적으로 유지 발전되어야 한다.보를 위한 최적옵션은 초기노심부터

• The Korean Journal of Ecology
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• 제21권5_1호
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• pp.465-473
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• 1998

This study was carried out to investigate the developmental process of plant community during the secondary succession and changes of soil properties in the burned areas lapsed 28 years after the forest fire in Mt.Palgong. The forest fire occurred on March, 1969 and the red pine (pinus densiflora) forest and its floor vegetation were burned down. The results are summarized as follows: the floristic composition of burned and unburned areas were composed of 49 and 48 species of vascular plants, respectively. The dominant species based on SDR4 of the burned sites were Lespedeza maximowicxii(87.75), Carex humilis (62.94), Rhododendron schippenbachii(55.78) and Miscanthus sinensis var.purpurascens (51.94). In contrast, Pinus densiflora (81.17), Quercus serrata (53.58)m Carex humilis (53.11) and Miscanthus sinenis var. purpuracens (52.42) were dominant in the unburned area. The biological spectra showed the $H-D_1-R_5-e$ type in both areas. The indices of similarity (CCs) between the two areas were 0.80. Degree of succession (DS) was 734 in the burned area and 809 in the unburned area. The species diversity (H) and evenness indices (e) in the burned and unburned areas were 2.05, 2.13 and 0.53, 0.55, respectively. Dominance index (C) in the burned and unburned areas were 0.30 and 0.32, respectively. Soil properties such as soil pH, content of organic matter, total nitrogen, total carbon, exchangeable potassium, sodium, calcium, and magnesium in burned area were comparatively higher than those of unburned area. Monthly changes of soil properties were of little significance except for some cases. These results suggest that there was relationship between trend of vegetation recovery and the changes of soil properties after the forest fire. Mixed forestation of fire-resistant species and nitrogen fixation species will be effective for reforestation after the forest fire.