무지개 송어의 뇌하수체 및 배양액에 존재하는 GTH II 농도를 측정하기 위해 Avidin- Biotin complex를 이용한 sandwich EIA 계을 개발했다. Protein A sepharose affinity chromatography을 통해서 얻어진 연어 GTH II의 rabbit IgG에 biotinylation시킨 것 (Biotin-salmon GTH II rabbit IgG)을 제2 항체로 사용하였고, Non-Biotin salmon GTH II rabbit IgG는 단지 protein A sepharose affinity chromatography에서 얻어진 IgG를 제 1 항체로 사용하였다. EIA는 sandwich법에 의해서 이루어졌으며, 효소반응 기질로는 TMB(3,3'5,5-tetramethylbenzidine)를 이용했으며, 반응후 450 nm의 흡광도에서 automatic microplate reader로 측정하였다. 그 결과, $0.12\;{\~}\;125\;ng/ml$의 범위에서 용량반응곡선을 얻었으며, 측정감도 (최소 검출량)는 거의 0.58 ng/ml 정도 였다. 그리고 뇌하수체 추출물 및 배양액 각각의 희석곡선은 GTH II 표존곡선과 일치 하였다. 또한 이러한 GTH II의 표준곡선는 뇌하수체내 다른 peptide hormone와는 교차반응을 거의 나타내지 않았다. Testosterone을 처리한 미성숙 무지개 송어의 뇌하수체 세포배양계를 이용하여 sGnRH에 의한 GTH II 분비량을 본 sandwich EIA계와 RIA계를 비교 조사한 결과, 거의 같은 분비량을 나타냈을 뿐만아니라 같은 분비 pattern을 나타냈다. 이러한 결과로부터 본 sandwich법 EIA계에 의해서 연어과 어류의 뇌하수체 추출물 및 뇌하수체 배양액 중의 GTH II 함량 및 분비량을 측정하는데 있어서 안정된 assay계라고 생각되어진다.
NaCl과 방사선이 자주달개비 수술털 세포 분홍돌연변이에 미치는 영향을 조사하였다. 포트에서 생육된 Tradescantia 4430 식물체에 코발트 선원으로부터 0.3, 0.5, 1.0 및 2.0Gy의 감마선을 조사하였다. NaCl 용액(170mM)의 분무처리는 방사선 조사 24시간전 및 후에 이루어졌다. CT 실험군, NaCl+${\gamma}$실험군 및 ${\gamma}$+NaCl 실험군에 있어서의 돌연변이 빈도가 증가한 고조기간은 방사선 조사 후 6∼12일로 나타났으며 돌연변이 빈도는 방사선량 증가에 따라 선형적으로 증가하는 반응관계를 보였다. CT 실험군에서의 선량반응식 기울기(증가계수)는 5.99($r^2$=0.99)이었으나, NaCl+${\gamma}$실험군의 증가계수는 4.55($r^2$=0.98), ${\gamma}$+NaCl 실험군은 4.33($r^2$=0.99)으로 CT실험군의 값에 비해 낮았다. 즉, 방사선 조사 전후에 NaCl을 처리한 실험군들이 방사선만 조사한 CT 조사군에 비하여 방사선에 의한 돌연변이 유발증가율이 24% 이상 억제됨을 확인할 수 있었으며 이는 NaCl 자체가 방사선에 의한 DNA 손상에 대하여 방어효과를 갖기 때문인 것으로 해석될 수 있다.
A simple LC-MS/MS method of rabeprazole in human plasma was developed and validated. Rabeprazole and Internal standard (I.S), omeprazole, were extracted from human plasma by liquid liquid extraction, chromatographic separation of rabaprazole in plasma was achieved at $45^{\circ}C$ with a Shiseido UG120 $C_{18}$ column and methanol-10 mM ammonium acetate buffer (pH 9.42 with ammonium water), as mobile phase. Rabeprazole produced a protonated precursor ion [$(M+H)^+$] at m/z 360.10 and corresponding product ion at m/z 242.21. Internal standard produced a protonated precursor ion [$(M+H)^+$] at 346.09 and corresponding product ion at m/z 198.09. This method showed linear response over the concentration range of $1{\sim}500\;ng/mL$ with correalation coefficient greater than 0.99. The lower limit of quantitation (LLOQ) using 0.2 mL plasma was 1 ng/mL, which was sensitive enough for pharmacokinetics studies. The method was specific and validated with a limit of quantitation of 1 ng/mL. The intra-day and inter-day precision and accuracy were acceptable for all samples including the LLOQ. The applicability of the method was demonstrated by analysis of plasma after administration of a single 10 mg dose to 36 healthy subject. From the plasma rabeprazole concentration versus time curves, the mean $AUC_t$ (The area under the plasma concentration-time curve from time 0 to 12 hr ) was $691.36{\pm}321.88\;ng{\cdot}hr/mL$, $C_{max}$ (maximum plasma drug concentration) of $353.21{\pm}131.52\;ng/mL$ reached $3.4{\pm}1.1\;hr$ after adiministration. The mean biological half-life of rabeprazole was $1.37{\pm}0.75\;hr$. Based on the results, this simple method could readily be used in pharmacokinetics studies.
The purpose of the present study was to evaluate the bioequivalence of two torasemide tablets, Torem tablet (Roche Korea Co., Ltd., Korea, reference drug) and Boryung Torsemide tablet (Boryung Pharmaceutical Co., Ltd., Korea, test drug), according to the guidelines of Korea Food and Drug Administration (KFDA). After adding an internal standard (furosemide) to human serum, serum samples were extracted using 5 mL of ethyl acetate. Compounds were analyzed by reverse-phase HPLC method with UV detection. This method showed linear response over the concentration range of 0.05 ug/mL with correlation coefficient of 0.999. The lower limit of quantitation using 0.5 mL of serum was 0.05 ug/mL which was sensitive enough for pharmacokinetic studies. Twenty-eight healthy male Korean volunteers received each medicine at the torasemide dose of 20 mg in a $2{\times}2$ crossover study. There was a one-week washout period between the doses. Serum concentrations of torasemide were monitored by an HPLC-UV for over a period of 12 hr after the administration. $AUC_{t}$(the area under the serum concentration-time curve from time zero to 12 hr) was calculated by the linear trapezoidal rule method. $C_{max}$ (maximum serum drug concentration) and $T_{max}$ (time to reach $C_{max}$) were compiled from the serum concentration-time data. Analysis of variance was carried out using logarithmically transformed $AUC_{t}$ and $C_{max}$. No significant sequence effect was found for all of the bioavailability parameters indicating that the crossover design was properly performed. The 90% confidence intervals of the $AUC_{t}$ ratio and the $C_{max}$ ratio for Boryung Torsemide/Torem were log 0.97-10g 1.03 and log 0.93log 1.12, respectively. These values were within the acceptable bioequivalence intervals of log 0.80-log 1.25. Thus, the criteria of the KFDA guidelines for the bioequivalence was satisfied, indicating Boryung Torsemide tablet and Torem tablet are bioequivalent.
방사선 조사된 완제품 조제분유를 포함한 시료 4종의 ESR 스펙트럼 특성을 측정하였다. 조제분유와 전지분유의 비조사 시료는 g=2.0050의 아주 약한 singlet 형태의 스펙트럼을 나타내었다. 조사 시료에서 전지분유는 g=2.0050의 singlet 형태의 스펙트럼, 조제분유는 전지분유와 같은 중심 피크 옆에 g=2.0006의 작은 피크를 가진 비대칭 형태의 스펙트럼을 나타내었고, 두 시료 모두 비조사 시료와 조사 시료의 신호 세기 차이가 명확하여 조사유무 판별이 가능하였다. 포도당과 유당의 비조사 시료는 아무런 시그널을 나타내지 않았으며, 조사 시료는 이미 알려져 있는 결정형 당 유래의 다형 피크를 가진 스펙트럼을 나타내었다. 선량이 증가함에 따라 신호 세기도 증가하였고, 회귀방정식의 상관계수는 0.95 이상의 높은 값을 나타내었다. 감마선과 전자선 조사에 의한 ESR 스팩트럼 간의 유의성 있는 차이는 없는 것으로 확인되었다. 결론적으로 본 실험을 통하여 ESR 분석은 방사선 조사된 조제분유 및 원료의 판별에 유용한 방법으로 적용될 수 있는 것으로 판단되었으며, 온도, 습도 및 전처리 조건 등의 요인에 의한 변화 가능성과 식품 생산 및 장기유통 기간 등을 고려할 때 이에 대한 지속적인 연구와 자료 축적이 요구된다고 할 것이다.
Kim, Se-Mi;Kim, Hwan-Ho;Shin, Sae-Byeok;Kang, Hyun-Ah;Cho, Hea-Young;Kim, Yoon-Gyoon;Lee, Yong-Bok
Journal of Pharmaceutical Investigation
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제37권5호
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pp.315-321
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2007
The purpose of the present study was to evaluate the bioequivalence of two lercanidipine hydrochloride tablets, Zanidip tablet (LG Life Sciences Ltd., Korea, reference drug) and Samchundang Lercanidipine tablet 10 mg (Sam Chun Dang Pharm. Co. Ltd., Korea, test drug), according to the guidelines of Korea Food and Drug Administration (KFDA). After adding an internal standard (amlodipine maleate) to human serum, serum samples were extracted using hexan-isoamyl alcohol (100:1, v/v). Compounds were analyzed by liquid chromatography/tandem mass spectrometry. This method showed linear response over the concentration range of 0.05-20 ng/mL with correlation coefficient of 0.9999. The lower limit of quantitation using 0.5 mL of serum was 0.05 ng/mL which was sensitive enough for pharmacokinetic studies. Thirty healthy male Korean volunteers received each medicine at the lercanidipine hydrochloride dose of 20 mg in a $2\;{\times}\;2$ crossover study. There was a one-week washout period between the doses. Serum concentrations of lercanidipine were monitored by an LC/MS/MS fer over a period of 24 hr after the administration. $AUC_t$ (the area under the serum concentration-time curve from time 0 to 24 hr) was calculated by the linear trapezoidal rule method. $C_{max}$ (the maximum serum drug concentration) and $T_{max}$ (the time to reach $C_{max}$) were compiled from the serum concentration-time data. Analysis of variance was carried out using logarithmically transformed $AUC_t$ and $C_{max}$. No significant sequence effect was found for all of the bioavailability parameters, indicating that the crossover design was properly performed. The 90% confidence intervals of the $AUC_t$ ratio and the $C_{max}$ ratio for Samchundang Lercanidipine/Zanidip were log 0.9505-log 1.2258 and log 0.9987-log 1.2013, respectively. These values were within the acceptable bioequivalence intervals of log 0.80-log 1.25. Thus, the criteria of the KFDA guidelines for the bioequivalence was satisfied, indicating Samchundang Lercanidipine tablet 10 mg and Zanidip tablet are bioequivalent.
The purpose of the present study was to evaluate the bioequivalence of two choline alphoscerate soft capsules, Gliatilin soft capsule (Daewoong Pharmaceuticals Co., Ltd.) and Cholicerin soft capsule (Sam Chun Dang Pharm. Co., Ltd.), according to the guidelines of Korea Food and Drug Administration (KFDA). Serum concentrations of choline after oral administration of choline alphoscerate were determined using a validated LC/MS/MS method. This method showed linear response over the concentration range of 0.5-20 ${\mu}g$/mL with correlation coefficient of 0.9999. The lower limit of quantitation using 100 ${\mu}L$ of serum was 0.5 ${\mu}g$/mL which was sensitive enough for pharmacokinetic studies. Thirty six healthy male Korean volunteers received each medicine at the choline alphoscerate dose of 1200 mg in a $2{\times}2$ crossover study. There was a one-week washout period between the doses. Blood samples were taken at predetermined time intervals up to 8 hr. $AUC_t$ (the area under the serum concentration-time curve from time 0 to 8 hr) was calculated by the linear trapezoidal rule method. $C_{max}$ (the maximum serum drug concentration) and $T_{max}$ (the time to reach $C_{max}$) were compiled from the serum concentration-time data. Analysis of variance was carried out using logarithmically transformed $AUC_t$ and $C_{max}$. No significant sequence effect was found for all of the bioavailability parameters, indicating that the crossover design was properly performed. The 90% confidence intervals of the $AUC_t$ ratio and the $C_{max}$ ratio for Cholicerin/Gliatilin were log0.9998-log1.1172 and log0.9938-1.0944, respectively. These values were within the acceptable bioequivalence intervals of log0.80-log1.25. Thus, the criteria of the KFDA guidelines for the bioequivalence was satisfied, indicating Cholicerin soft capsule and Gliatilin soft capsule are bioequivalent.
광주기가 방사선에 의해 유발된 자주달개비 체세포돌연변이에 미치는 영향을 실험적으로 평가하였다. 포트에서 생육된 Tradescantia 4430 식물체에 코발트 선원으로부터 0.3, 0.5및 1.0Gy의 감마선을 조사하였으며 수술털 세포에 나타나는 분홍돌연변이를 분석하였다. 감마선 0.5 Gy를 기준선량으로 평가하였을 때 대조 실험군(CT)은 방사선 조사 후 6일 경과시부터 돌연변이율이 증가하기 시작하여 조사 후 10일째에 최고값에 도달하였다. 명기가 20시간인 실험군(PP20)에서는 방사선 조사 후 6일 경과시부터 돌연변이율이 증가하기 시작하여 조사 후 9일째에 최고값에 이르렀다. 반면에 명기가 4시간으로 제한된 실험군(PP4)에 있어서는 조사 후 10일째부터 돌연변이율이 급격히 증가하기 시작하여 16일 경과시 최고값에 도달하였다. CT실험군에 있어서 감마선 조사에 의하여 유발되는 분홍돌연변이 빈도의 증가계수 5.99($r^2$=0.99)에 비해 PP20과 PP4 실험군에 있어서의 각각의 돌연변이 빈도 증가계수는 6.93 ($r^2$=0.98)과 11.74($r^2$=0.99)로 PP20 실험군에 있어서는 15.7%, PP4 실험군은 95.9%의 증가 효과를 나타내었다. 결론적으로 비정상적인 광주기는 자주달개비 수술털에 대한 이온화 방사선의 분홍돌연변이 유발효과를 증가시키는 동시에 방사선에 의한 세포 유전자 손상의 회복을 상당기간 지연시키는 원인이 된다.
본 연구는 2013~2014년 국민건강영양조사 원시자료를 사용하여 만 19세 이상 성인을 대상으로 성별을 구분하여 평균 음주량 및 폭음 빈도와 치주염의 관련성을 살펴보았다. 평균 음주량과 치주염과의 관련성을 살펴본 결과, 남자에서는 평균 음주량과 치주염은 J자 형태의 관련성을 보였으며, 특히 경도 음주군을 기준으로 중등도 음주군(1.25배)과 고도 음주군(1.39배)에서 치주염 위험이 유의하게 증가하였다. 반면, 여자에서는 평균 음주량과 치주염은 유의한 관련성이 없었다. 폭음 빈도와 치주염과의 관련성 연구 결과, 남자에서는 폭음 빈도가 증가할수록 치주염의 위험이 유의하게 높아지는 경향을 보였지만, 여자에서는 폭음 빈도와 치주염은 유의한 관련성이 없었다. 결론적으로 본 연구를 통해 남자에서 과도한 음주량 및 폭음을 하는 경우 치주염이 유의하게 증가함을 확인하였다. 지역사회에서 치주염 예방을 위해서는 올바른 음주습관 형성을 위한 정확한 정보제공과 다양한 홍보교육 전략이 필요할 것이다.
물 재이용 목적으로 설계한 pilot scale의 하수 처리공정에서 배출되는 방류수 중 내분비계 장애물질을 GC/MS로 분석하였고, 처리 공정별로 제거율을 비교하였다. 각 처리 공정별 방류수에서 nonylphenol이 주로 검출되었고, 평균 $0.36{\sim}0.94$${\mu}g/L$으로 높게 검출되었으나, E2와 EE2는 처리수에서 정량 이하로 검출되었다. 내분비계 장애물질은 처리 공정별로 $50{\sim}100%$의 제거율을 보여주었다. E-screen assay에 의해 얻어진 양-반응 곡선에서 E2의 EC50값은 $9.0{\times}10^{-3}$ M로 bisphenol A와 p-octylphenol의 EC50값인 $2.736{\times}10^{-5}$ M, $9.760{\times}10^{-6}$ M에 비해 매우 높았다. 이는 알킬페놀류가 E2에 대한 상대적인 에스트로겐 활성도가 매우 낮음을 보여주었다. 환경 호르몬 농도와 이 물질의 상대적인 에스트로겐 활성도에 근거하여 계산된 에스트로겐 활성도(ng-EEQ/L)는 E-screen assay에 의해 실측한 총 에스트로겐 활성도(ng-EEQ/L)에 비해 평균 2배의 높은 활성도를 보여 주었다. 각 처리 공정별 방류수의 에스트로겐 활성도는 1 ng-EEQ/L 이하의 매우 낮은 활성도를 보여주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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