• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권12호
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• pp.1989-1996
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• 2015

Ice-binding proteins (IBPs) can inhibit ice recrystallization (IR), a major cause of cell death during cryopreservation. IBPs are hypothesized to improve cell viability after cryopreservation by alleviating the cryoinjury caused by IR. In our previous studies, we showed that supplementation of the freezing medium with the recombinant IBP of the Arctic yeast Glaciozyma sp. (designated as LeIBP) could reduce post-thaw hemolysis of human red blood cells and increase the survival of cryopreserved diatoms. Here, we showed that LeIBP could improve the viability of cryopreserved mammalian cells. Human cervical cancer cells (HeLa), mouse fibroblasts (NIH/3T3), human preosteoblasts (MC3T3-E1), Chinese hamster ovary cells (CHO-K1), and human keratinocytes (HaCaT) were evaluated. These mammalian cells were frozen in dimethyl sulfoxide (DMSO)/fetal bovine serum (FBS) solution with or without 0.1 mg/ml LeIBP at a cooling rate of -1℃/min in a -80℃ freezer overnight. The minimum effective concentration (0.1 mg/ml) of LeIBP was determined, based on the viability of HeLa cells after treatment with LeIBP during cryopreservation and the IR inhibition assay results. The post-thaw viability of mammalian cells was examined. In all cases, cell viability was significantly enhanced by more than 10% by LeIBP supplementation in 5% DMSO/5% FBS: viability increased by 20% for HeLa cells, 28% for NIH/3T3 cells, 21% for MC3T3-E1, 10% for CHO-K1, and 20% for HaCaT. Furthermore, addition of LeIBP reduced the concentrations of toxic DMSO and FBS down to 5%. Therefore, we demonstrated that LeIBP can increase the viability of cryopreserved mammalian cells by inhibiting IR.

• Journal of Korean Neurosurgical Society
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• 제57권6호
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• pp.445-454
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• 2015

Objective : In the present study we analyzed neuroprotective and antiapoptotic effect of the difumarate salt S-15176, as an anti-ischemic, an antioxidant and a stabilizer of mitochondrial membrane in secondary damage following spinal cord injury (SCI) in a rat model. Methods : Three groups were performed with 30 Wistar rats; control (1), trauma (2), and a trauma+S-15176 (10 mg/kg i.p., dimethyl sulfoxide) treatment (3). SCI was performed at the thoracic level using the weight-drop technique. Spinal cord tissues were collected following intracardiac perfusion in 3rd and 7th days of posttrauma. Hematoxylin and eosin staining for histopatology, terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling assay for apoptotic cells and immunohistochemistry for proapoptotic cytochrome-c, Bax and caspase 9 were performed to all groups. Functional recovery test were applied to each group in 3rd and 7th days following SCI. Results : In trauma group, edematous regions, diffuse hemorrhage, necrosis, leukocyte infiltration and severe degeneration in motor neurons were observed prominently in gray matter. The number of apoptotic cells was significantly higher (p<0.05) than control group. In the S-15176-treated groups, apoptotic cell number in 3rd and 7th days (p<0.001), also cytochrome-c (p<0.001), Bax (p<0.001) and caspase 9 immunoreactive cells (p<0.001) were significantly decreased in number compared to trauma groups. Hemorrhage and edema in the focal areas were also noticed in gray matter of treatment groups. Results of the locomotor test were significantly increased in treatment group (p<0.05) when compared to trauma groups. Conclusion : We suggest that difumarate salt S-15176 prevents mitochondrial pathways of apoptosis and protects spinal cord from secondary injury and helps to preserve motor function following SCI in rats.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권5호
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• pp.534-542
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• 1992

Streptomyces S-217 균주가 생산하는 trypsin 저해물질의 생산 및 정제조건을 검토하였다. 저해물질의 생산은 500ml 후라스크의 배양에서 2 mannitol, 0.9, peptone의 배지와 초기 pH는 7.0 배양시간은 66시간 및 온도30$^{\circ}C$의 조건에서 제일 높았으며, 무기염의 효과는 크게 영향이 없었다. 정제는 column chromatography와 HPLC에 의하여 정제하였다. 정제된 trypsin 저해물질의 초대파장은 $\lambda_{max}$ 215nm이었고, 용해도는 물에는 95, methanol과 dimethylsulfoxide에서는 70% 및 75%이었다.Trypsin 저해물질 복합체 형성시간은 10분 정도였으며, trypsin 효소의 50% 저해농도($IC^{50}$)는 15$\mu$g/ml 이었다. 저해물질의 pH 안정성은 $100^{\circ}C$ 10분간 열처리시 pH 5~9에서 100% 활성이 유지되었으며, 산성측보다 알칼리측이 안정하였고, 열안정성은 $100^{\circ}C$, pH7.0에서 1시간 동안 50% 활성을 유지하였다.

• 한국패류학회지
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• 제31권3호
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• pp.179-186
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• 2015

굴 미수정란의 동결보존에 적합한 동해방지제의 종류, 농도 및 침투 시간을 구명하기 위하여 4가지 동해방지제 (DMSO, EG, methanol, PEG) 를 대상으로 수정률, 부화율 및 형태 이상률을 조사하였다. 동해방지제의 농도 및 침지시간은 각각 5, 10, 15, 20%와 10, 20, 30, 40분이었다. 침지 후 미수정란은 정상 정자와 수정되었고, 수정률, 부화율 및 형태 이상률은 동해방지제의 종류와 농도 및 침지시간에 영향을 받았다. 동해방지제의 농도와 침지시간의 증가에 따라 수정률과 부화율은 낮아졌고, 대부분의 동해방지제에서 5-10% 농도와 10-20분의 짧은 침지시간에서 좋은 결과를 보였다. 수정률과 부화율을 근거로 굴 미수정란에 가장 적합한 동해방지제는 DMSO였으며, 처리 농도와 침지 시간은 각각 5%와 10-20분이었다.

• 한국양식학회지
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• 제17권1호
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• pp.46-50
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• 2004

In the present study, attempts were made to cryopreserve sea urchin, Anthocidaris crassispina sperm in liquid nitrogen, to evaluate the effects of various cryoprotectants and freezing rates on motility, survival rate and fertilization rate of the post-thawing sperm, and the ultrastructural changes of sperm after cryopreservation were observed. The highest values of sperm motility (motility index: 3.3$\pm$0.37) and survival rate (72$\pm$3.5%) were obtained with 15% dimethyl sulfoxide (DMSO), and these values were significantly higher than those of sperm preserved with glycerol. Comparisons of motilities and survival rates between treatments of difference freezing rates showed that there was no difference between procedures (a) 5$0^{\circ}C$/min to -8$0^{\circ}C$ (motility index: 3.3$\pm$0.31 ; survival late 70$\pm$2.7%) and (b) 3$0^{\circ}C$/min to -8$0^{\circ}C$ (motility index: 3.1$\pm$0.29; survival rate 69$\pm$3.7%), while the results of (c) 1$0^{\circ}C$/min to -8$0^{\circ}C$ were significantly lower than the others (motility index: 2.2$\pm$0.33 ; survival rate 42$\pm$4.6%). There was no significant difference in fertilization rate between fresh sperm and sperm preserved with 15% DMSO as cryoprotectant and freezing rate (3$0^{\circ}C$/min to -8$0^{\circ}C$). Some ultrastructural changes of sperm, such as the detachment of plasma membrane, the destruction of mitochondria, and the flagellum rolling up head, were observed after cryopreservation. Morphological normality of the sperm in 15% DMSO frozen at the ratio of 5$0^{\circ}C$/min to -8$0^{\circ}C$ was better than the others.

• KSBB Journal
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• 제22권5호
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• pp.313-317
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• 2007

본 연구에서는 Pluronic F-68을 해동 후 회복배지에 적용하여, 동결보존된 형질전환 식물세포의 생장 증진을 도모하였다. Pluronic F-68은 세포표면의 소수성을 감소시켰을 뿐만 아니라, 세포의 투과성을 증진시켜 세포와 직접 상호 작용할 수 있음을 관찰하였다. 또한 Pluronic F-68의 첨가에 의해 재조합단백질의 발현에 부정적인 영향을 보이지 않음을 확인하였다. 따라서 동결보존시 해동 후 회복배지에 Pluronic F-68의 첨가는 식물세포의 신속하고 효율적인 대량 현탁배양을 가능하게 할 수 있다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제20권3호
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• pp.260-265
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• 1991

Salmonella/microsome assay system을 이용하여 N -nitrosodimethylamine (NDMA)의 돌연변이유발성을 검토하는 효과적인 방법과 비타민 C가 NDMA자체의 돌연변이유발과 nitrite와 2급아민으로부터의 NDMA 생성에 미치는 영향을 연구하였다. NDMA를 활성화시키기 위한 S9중 Aroclor1254로 induce시킨 hamster S9이 가장 효과가 있었으며 Aroclor 1254나 phenobarbital로 induce시킨 rat 59 mix에 의하여서는 활성화가 약하였다. DMSO와 ethanol에 NDMA를 녹였을 때는 돌연변이유발실험에서 저해효과가 나타났으나 phosphate buffer(pH 7. 4), 증류수, 95% methanol, Tween 80 + water(l : 4)는 저해 효과가 없었다. 비타민 C는 이미 생성환 NDMA에 대해서는 돌연변이 유발저해 효과를 나타내지 않았지만 nitrite와 2급 아민(dimethylamine)으로 부터의 NDMA 생성은 크게 저해하였다. 반응물에 비타민C를 첨가한 경우 Salmonella typhimurium TAl00의 revertant 수가 spontaneous숫자 수준으로 감소되었으며 HPLC를 이용한 NDMA의 분석에서도 거의 95% 까지의 정량적인 감소를 관찰할 수 있었다.

• Advances in Traditional Medicine
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• 제7권1호
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• pp.34-40
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• 2007

The present study was carried out to elucidate the potential of Muntingia (M.) calabura leaves chloroform extract (MCCE) as antinociceptive, anti-inflammatory and antipyretic agents using various animal models. The dried powdered leaves of M. calabura (20 g) were soaked in chloroform for 72 h and the supernatant obtained was then evaporated to dryness. The crude dried extract (0.912 g), dissolved in dimethyl sulfoxide (1:20; w/v) and considered as a stock solution (100% concentration/strength), was then diluted to the concentrations of 10 and 50% and used together in all experimental models. The MCCE was found to show significant (P < 0.05) antinociceptive and antipyretic activities, but less remarkable anti-inflammatory activity. Only the antinociceptive activity of MCCE measured using the abdominal constriction test and in the first phase of the formalin test occurred in a concentration-dependent manner. The anti-inflammatory activity of 50 and 100% concentrations MCCE was observed only at the range of time interval of 60 - 120 and 60 min, respectively. Based on the results, we conclude that the M. calabura leaves chloroform extract possessed remarkable antinociceptive and antipyretic, but less effective anti-inflammatory, activities and thus justifies the Peruvian folklore claims of its medicinal values.

• 한국양식학회지
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• 제11권1호
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• pp.67-75
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• 1998

감성돔 (Acanthopagrus schlegeli) 정자의 냉동 보존시 정자의 생리활성과 보존효과를 비교하기 위하여, 순환여과 사육시스템에서 사육한 전장 $25.9{\pm}1.7$ cm, 체중$292.8{\pm}53.7$ g의 성어로부터 얻은 정액을 재료로 하여 희석액별, 동해방지제별 해동후 정자의 활성, 생존율 및 알에 대한 수정능력을 평가하였다. 희석액별 냉동보존에서 해동정자의 생존율은 3% sodium citrate에서 $80{\pm}1.4$%로 가장 높았으나, 수정률은 5.4% glucose에서 $63.4{\pm}4.4$%로 가장 높았다. 동해방지제별 냉동보존에서 해동정자의 수정률은 5~15% glycerol을 동해방지제로 사용하였을 때, 50.1~69.4%로 DMSO 보다 나은 효과를 보였다. 감성돔 정자의 냉동보존을 위한 적정 희석액과 동해방지제는 5% glucose와 5% glycerol이었다. 냉동하지 않은 감성돔 정자의 머리는 구형으로 직경 $1.5{\pm}0.1$ ${\mu}$m, 길이 $1.3{\pm}0.1$${\mu}$m였으며, 치밀한 핵질로 채워져 있었다. 편모는 전형적인 9+2 구조를 나타냈다. 그러나 냉동후 해동시킨 정자중에서는 염색질의 과립화, 세포막의 이탈에 의한 그 용적이 커지는 구조변화를 보였다.

• 한국양식학회지
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• 제20권3호
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• pp.173-177
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• 2007

희석액과 동해방지제로 각각 ASP와 DMSO를 사용하여 1년 동안 냉동보존한 후 해동한 강도다리(Platichthys stellatus) 정자의 운동속도는 10% 농도에서 가장 빨랐다. Methanol의 경우 $10{\sim}20%$ 범위에서 유의한 차이를 보이지 않았지만 15%에서 가장 높은 값을 보였다. Glycerol을 동해방지제로 사용하였을 때는 첨가농도가 높아질수록 정자의 운동성과 운동속도가 낮아졌다. 희석액으로 SS를 사용한 경우도 ASP와 비슷한 결과를 보였다. 투과형전자현미경으로 관찰한 냉동하지 않은 신선한 강도다리 정자는 머리, 중편부 및 꼬리로 구성되어 있으며, 치밀한 핵질로 충만한 구형의 머리에는 첨체구조가 관찰되지 않았다. 동해방지제 없이 냉동보존한 경우, 대부분의 정자들이 머리가 찌그러지거나 부분적으로 수축되는 경우가 많았으며 머리의 원형질막이 이탈되고 염색질이 과립상으로 변하거나 균질화되지 않았다. 반면에 냉동보존을 위해 동해방지제를 사용한 경우 부분적으로 정자의 구조적 손상이 관찰되었으나 대부분의 정자는 냉동과 해동과정에서 손상을 입지 않았다.