Identification of differentially expressed genes at blastocyst stage embryos would provide insights into early development and differentiation. Here, we applied a new differential display reverse transcription polymerase chain reaction(DD RT-PCR) technology, called annealing control primers(ACP) system to identify the genes that are specifically or prominently expressed in mouse blastocysts compared to embryonic stem(ES) cells. Using 100 ACPs, 26 clones were perceived as differentially expressed genes in mouse blastocysts. A BLAST search revealed that cloned genes had significant sequence similarities with known genes in the GenBank/EMBL data base. Among them, 15 genes were selected and conformed by RT-PCR. This analysis suggests that the ACP system is a practical method for the identification of stage-specific genes using small numbers of mouse embryos.
Park, Young-Mi;Chae, Hyo-Seok;Chung, Byung-Yeoup;Kim, Jae-Sung;Kim, Jin-Hong;Wi, Seung-Gon;An, Byung-Chull;Cho, Jae-Young
Korean Journal of Environmental Biology
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v.24
no.2
s.62
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pp.155-159
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2006
To reveal effects of gamma-irradiation with various doses on the expressions of C4H and F5H genes, the transcription levels of OsC4HL and OsF5HL were investigated in leaves and stems of two rice cultivars, Ilpoombyeo and IR-29, after the irradiation with 5, 10, 50, or 100 Gy for 4 h. In overall pattern of 24 h after the irradiation, the transcription levels of the two genes increased with the increasing doses of radiation in the leaves of both cultivars, except that of OsC4HL in IR-29. However, in the stems, the transcription level of OsF5HL increased in Ilpoombyeo and decreased in IR-29 dose-dependently, while that of OsC4HL decreased in Ilpoombyeo with the increasing doses of radiation and remained constant in IR-29. When the expressions of OsC4HL and OsF5HL were investigated in a time-course after the irradiation with 100 Gy, they reached their highest levels in the leaves of both cultivars 5 hand 72 h after the irradiation, respectively. Therefore, we suggest that the expressions of OsC4HL and OsF5HL, which involved in the same phenylpropanoid pathway, are differentially regulated during the post-irradiation period, showing different cultivar and tissue specificity. Furthermore, the dose dependency of the gene expressions is also discussed immediately after the irradiation.
Conversion disorder and factitious disorder should be ruled out before making diagnosis of malingering. For this work, inspection of patient's behavior along with complete neurological examinations, psychological tests, and meticulous psychiatric interview are necessary. Facial expression test, thermography, dynamometry were failed differentiating conversion disorders to the malingered pain and motor symptoms, however, controlled diagnostic block showed positive result partly in patients with regional or cervical pain syndrome. Chronic pain patients who are related to the process of litigation encounter stressful life situations which lead them into various neurobehavioral and psychosocial complications. Most of suspected malingered patients would not revealed pure form rather mixed with factitious and/or conversion features. At the time of increasing number of chronic patients associated with traffic accidents or industrial injuries who are involved in litigation, psychiatrist are needed sharp eyes and tenacity for evaluating malingering or medically unexplained symptoms.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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v.36
no.1
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pp.7-15
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2010
Complex human tissues harbor stem cells and precursor cells, which are responsible for tissue development or repair. Recently, dental tissues such as dental pulp, periodontal ligament (PDL), dental follicle have been identified as easily accessible sources of undifferentiated cells. These tissues contain mesenchymal stem cells that can be differentiate into bone, cartilage, fat or muscle by exposing them to specific growth conditions. In this study, the authors procured the stem cell from pulp, PDL, and dental follicle and differentiate them into osteoblast and examine the bone induction capacity. Dental pulp stem cell (DPSC), periodontal ligament stem cell (PDLSC), and dental follicle precursor cell (DFPC) were obtained from human 3rd molar and cultured. Each cell was analyzed for presence of stem cell by fluorescence activated cell sorter (FACs) against CD44, CD105 and CD34, CD45. Each stem cell was cultured, expanded and grown in an osteogenic culture medium to allow formation of a layer of extracellular bone matrix. Osteogenic pathway was checked by alizarin red staining, alkaline phosphatase (ALP) activity test and RT-PCR for ALP and osteocalcin (OCN) gene expression. According to results from FACs, mesenchymal stem cell existed in pulp, PDL, and dental follicle. As culturing with bone differentiation medium, stem cells were differentiated to osteoblast like cell. Compare with stem cell from pulp, PDL and dental follicle-originated stem cell has more osteogenic effect and it was assumed that the character of donor cell was able to affect on differential potency of stem cell. From this article, we are able to verify the pulp, PDL, and dental follicle from extracted tooth, and these can be a source of osteoblast and stem cell for tissue engineering.
Acidithiobacillus ferrooxidans is one of the most important bacterium used in bioleaching, and can utilize $Fe^{2+}$ or sulphide as energy source. Growth curves for Acidithiobacillus ferrooxidans under phosphate starvation and normal condition have been tested, showing lag, logarithmic, stationary and aging phases as seen in other bacteria. The logarithmic phases were from 10 to 32 hours for Acidithiobacillus ferrooxidans cultivated with normal cultivating condition and from 20 to 60 hrs for Acidithiobacillus ferrooxidans cultivated phosphate starvation. Differences of protein patterns of Acidithiobacillus ferrooxidans growing in case of normal or phosphate starvation were separately investigated after cultivation at $30^{\circ}C$ by the analysis of two-dimensional gel electrophoresis (2-DE), matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI)-Mass spectrometry. There were total 6 protein spots identified, which were Recombination protein recA, RNA helicase, AP2 domain-containing transcription factor, NADH dehydrogenase I chain D, Hyothetical protein PF1669, and Transaldolase STY3758. From the 6 identified protein spots, 3 proteins were found to be decreased in expression at the cultivating condition of phosphate starvation, while another three upregulated.
Yang, Yi-Xuan;Hu, Huai-Dong;Zhang, Da-Zhi;Ren, Hong
BMB Reports
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v.40
no.6
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pp.853-860
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2007
Resistance to anticancer drugs is a major obstacle in the effective treatment of tumors. To understand the mechanisms responsible for multidrug resistance (MDR), a proteomic approach was used to identify proteins that were expressed in different levels by the adriamycinresistant human gastric cancer cell line, SGC7901/ADR, and its parental cell line, SGC7901. Two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and image analysis was used to determine which protein spots were expressed in different levels by the two cell lines. These spots were then partially identified using ESI-Q-TOF mass spectrometry, and the differential expressional levels of the partially identified proteins were then determined by western blot analysis and real-time RT-PCR. Additionally, the association of Nucleophosmin (NPM1), a protein that was highly expressed by SGC7901/ADR, with MDR was analyzed using siRNA. As a result of this study, well-resolved, reproducible 2-DE patterns of SGC7901/ADR and SGC7901 were established, and 16 proteins that may playa role in the development of thermo resistance were identified. Additionally, suppression of NPMl expression was found to enhance adriamycin chemosensitivity in SGC7901/ADR. These results provide a fundamental basis for the elucidation of the molecular mechanism of MDR, which may assist in the treatment of gastric cancer.
Kim, Young-Ju;Kang, Hye-Eun;Cho, Gyu-Tae;Suh, Young-Sang;Yoo, Myong-Suk;Kim, Hyun-Woo
Fisheries and Aquatic Sciences
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v.12
no.4
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pp.276-285
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2009
Despite great commercial interest, relatively little has been described about molecular mechanism of bivalve reproduction. We investigated genes involved in ovarian maturation of the Yesso scallop, Patinopecten yessoensis. GSI index and histological analysis revealed that maturation of ovary begin in February and spawning period is from April to June which is similar to the previous study in the East Sea. As result of combination analysis of differential display RTPCR (DDRT-PCR) and histological examination, vitellogenin (Vg), ferritin (Ft) and ADT/ATP carrier protein (ACC) were identified as differently expressed genes in maturating ovary. Endpoint RT-PCR results showed that Vg is ovary-specific genes whereas Ft and ACC are expressed ubiquitously suggesting that Vg can be good molecular markers for ovarian development and sex determination in bivalves. Quantitative PCR results revealed that Vg were expressed highest during growth stage and appears to play a major role in oocyte maturation. On the contrary, expression of Ft was highest after spawning stage, which suggests that up-regulation may be involved in spawning and inactive stages in which the scallops recover from spawning. In addition, high level of the mitochondrial gene, ACC, may play a role in energy metabolism in maturating oocytes. Isolation and molecular studies of these key genes will expand our knowledge of the physiological changes from various exogenous factors including temperature, salinity, pH, even or numerous endocrine disrupting chemicals (EDCs) during reproductive cycle. In addition, further study of these genes implicates various industrial applications including the stable seed production, increased food quality, or economic aquaculture system.
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
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v.23
no.2
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pp.443-451
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2009
Soyangin-Hyeongbangpaedok-san(SHBPDS) is used for treating upper respiratory infections, In an effort to investigate the anti-inflammatory effects of SHBPDS, we measured production of several cytokines and immunoglobulin in various immune cells. SHBPDS decreased the secretion of TNF-${\alpha}$, but not that of IL-6 in PMA/A23187 stimulated HMC-1 cells. As for mouse B cells, it induced proliferation and caused differential effects in expressions of surface IgE as determined by flow cytometry and secretions of IgE, IgG1, ILA and INF-${\gamma}$as measured by ELISA but showed little change in CD23 or CD69 expression. SHBPDS increased proliferation in anti-CD3/anti-CD28 stimulated CD4 Th cells. Under the Th1/Th2 polarization conditions, SHBPDS at 200 ${\mu}g/m{\ell}$ suppressed the secretion of INF-${\gamma}$ and IL-4. Based on the above results, we conclude that SHBPDS has antiinflammatory activities in mast cells and different immunomodulatroy effects in B cells and Th cells.
Sleep is the most basic and essential physiological requirement for mental health, and sleep disorders pose potential risks of metabolic and neurodegenerative diseases. Tryptic hydrolysate of ${\alpha}_{S1}$-casein (${\alpha}_{S1}-CH$) has been shown to possess stress relieving and sleep promoting effects. However, the differential effects of ${\alpha}_{S1}-CH$ on electroencephalographic wave patterns and its effects on the protein levels of ${\gamma}$-aminobutyric acid A ($GABA_A$) receptor subtypes in hypothalamic neurons are not well understood. We found ${\alpha}_{S1}-CH$ (120, 240 mg/kg) increased sleep duration in mice and reduced sleep-wake cycle numbers in rats. While ${\alpha}_{S1}-CH$ (300 mg/kg) increased total sleeping time in rats, it significantly decreased wakefulness. In addition, electroencephalographic theta (${\theta}$) power densities were increased whereas alpha (${\alpha}$) power densities were decreased by ${\alpha}_{S1}-CH$ (300 mg/kg) during sleep-wake cycles. Furthermore, protein expressions of $GABA_A$ receptor ${\beta}_1$ subtypes were elevated in rat hypothalamus by ${\alpha}_{S1}-CH$. These results suggest ${\alpha}_{S1}-CH$, through $GABA_A$ receptor modulation, might be useful for treating sleep disorders.
Pathogenic Naegleria fowleri, Acanthamoeba castellanii, and Acanthamoeba polyphaga, are distributed worldwide. They are causative agents of primary amoebic meningoencephalitis or acanthamoebic keratitis in humans, respectively. Trophozoites encyst in unfavorable environments, such as exhausted food supply and desiccation. Until recently, the method of N. fowleri encystation used solid non-nutrient agar medium supplemented with heat-inactivated Escherichia coli; however, for the amoebic encystment of Acanthamoeba spp., a defined, slightly modified liquid media is used. In this study, in order to generate pure N. fowleri cysts, a liquid encystment medium (buffer 1) modified from Page's amoeba saline was applied for encystation of N. fowleri. N. fowleri cysts were well induced after 24 hr with the above defined liquid encystment medium (buffer 1). This was confirmed by observation of a high expression of differential mRNA of nfa1 and actin genes in trophozoites. Thus, this liquid medium can replace the earlier non-nutrient agar medium for obtaining pure N. fowleri cysts. In addition, for cyst formation of Acanthamoeba spp., buffer 2 (adjusted to pH 9.0) was the more efficient medium. To summarize, these liquid encystment media may be useful for further studies which require axenic and pure amoebic cysts.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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