Pseudomonas sp. BK7, an alkalophile, displayed the highest growth and protease activity when grown in a fermenter which was controlled at a pH level of 9.0, and the enzyme production was significantly enganced by the increase of agitation speed. Two formas of alkaline proteases (BK7-1 and BK7-2) were fractionated and purified to near homogeneity. Protease BK7-1 was purified through CM-Sepharose CL-6B and Sephadex G-75 column chromatographies, and Protease BK7-2 was purified through CM-Sepharose CL-6B and Sephadex G-75 column chromatographies, and Protease BK7-2 was purified through CM-Sepharose CL-6B, DEAE-Sepharose, and Sephadex G-75 column chromatographies. The molecular weights of proteases BK7-1 and BK7-2 determined by gel filtration chromatography were 20,700 and 40,800, respectively. The $K_m$ value, isoelectric point, and optimum pH of protease BK7-1 were 2.55 mg/ml, 11.0 and 11.0, respectively, whereas those of protease BK7-2 were 1.57 mg/ml, 7.2, and 10.0, respectively. Both protease were practically stable in the pH range of 5-11. The optimum temperatures for the activities of both protease BK7-1 and BK7-2 were 50℃ and 45℃, respectively. About 56% of the original protease BK7-2 activity remained after being treated at 50℃ for 30 min but protease BK7-1 was rapidly inactivated at above 25℃. Both proteases were completely inhibited by phenylmethane sulfonyl fluoride, a serine protease inhibitor. Protease BK7-2 was stable against EDTA, EGTA, STP, and detergents such as SDS and LAS, whereas protease BK7-1 was found to be unstable.
Kim, Young-Ok;Park, In-Suk;Nam, Bo-Hye;Kim, Dong-Gyun;Jee, Young-Ju;Lee, Sang-Jun;An, Cheul-Min
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제24권9호
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pp.1260-1268
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2014
Screening of a gene library from Paenibacillus sp. PBS-2 generated in Escherichia coli led to the identification of a clone with lipolytic activity. Sequence analysis showed an open reading frame encoding a polypeptide of 378 amino acid residues with a predicted molecular mass of 42 kDa. The esterase displayed 69% and 42% identity with the putative ${\beta}$-lactamases from Paenibacillus sp. JDR-2 and Clostridium sp. BNL1100, respectively. The esterase contained a Ser-x-x-Lys motif that is conserved among all ${\beta}$-lactamases found to date. The protein PBS-2 was produced in both soluble and insoluble forms when E. coli cells harboring the gene were cultured at $18^{\circ}C$. The enzyme is a serine protein and was active against p-nitrophenyl esters of $C_2$, $C_4$, $C_8$, and $C_{10}$. The optimum pH and temperature for enzyme activity were pH 9.0 and $30^{\circ}C$, respectively. Relative activity of 55% remained at up to $5^{\circ}C$ with an activation energy of 5.84 kcal/mol, which indicates that the enzyme is cold-adapted. Enzyme activity was inhibited by $Cd^{2+}$, $Cu^{2+}$, and $Hg^{2+}$ ions. As expected for a serine esterase, activity was inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride. The enzyme was remarkably active and stable in the presence of commercial detergents and organic solvents. This cold-adapted esterase has potential as a biocatalyst and detergent additive for use at low temperatures.
A metagenomic fosmid library was constructed using genomic DNA isolated from the gut microflora of Hermetia illucens, a black soldier fly. A cellulase-positive clone, with the CS10 gene, was identified by extensive Congo-red overlay screenings for cellulase activity from the fosmid library of 92,000 clones. The CS10 gene was composed of a 996 bp DNA sequence encoding the mature protein of 331 amino acids. The deduced amino acids of CS10 showed 72% sequence identity with the glycosyl hydrolase family 5 gene of Dysgonomonas mossii, displaying no significant sequence homology to already known cellulases. The purified CS10 protein presented a single band of cellulase activity with a molecular mass of approximately 40 kDa on the SDS-PAGE gel and zymogram. The purified CS10 protein exhibited optimal activity at $50^{\circ}C$ and pH 7.0, and the thermostability and pH stability of CS10 were preserved at the ranges of $20{\sim}50^{\circ}C$ and pH 4.0~10.0. CS10 exhibited little loss of cellulase activity against various chemical reagents such as 10% polar organic solvents, 1% non-ionic detergents, and 0.5 M denaturing agents. Moreover, the substrate specificity and the product patterns by thin-layer chromatography suggested that CS10 is an endo-${\beta}$-1,4-glucanase. From these biochemical properties of CS10, it is expected that the enzyme has the potential for application in industrial processes.
본 연구는 출토직물의 세척을 위한 천연계면활성제 선정을 위하여 그 특성과 세척성을 알아보는데 목적이 있다. 이를 위해 대조군으로 합성계면활성제인 SDS (Sodium dodecyl sulfate)와 천연계면활성제 중 LES (Disodium laurethsulfosuccinate), apple wash (Sodium cocoyl apple amino acids), tea saponin (Saponin), cornacopa (Decyl glucoside), coco betain (Cocamidopropyl betaine) 등 5종을 선별하여 계면활성제의 FT-IR (Fourier transform infrared spectroscopy) 분석으로 구조를 확인하고, pH와 표면장력 측정으로 특성을 파악하였다. 인공오염포 4종과 출토직물편에 대한 세척성 실험을 수행하였다. 그 결과 인공오염포에 대해서는 apple wash, tea saponin, cornacopa가 세척성에 있어서 SDS만큼 좋은 것으로 나타났으며 출토직물편에 대해서는 tea ssponin과 coco betain의 세척성이 좋은 것으로 나타났다. 따라서 세제의 안전성과 세척성을 감안할 때 천연계면활성제 중 tea saponin이 출토복식 세척을 위한 천연계면활성제로써 적합한 것으로 사료되었다.
Candida magnoliae, an osmotolerant and erythritol producing yeast, prefers D-fructose to D-glucose as carbon sources. For the investigation of the fructophilic characteristics with respect to sugar transportation, a sequential extraction method using various detergents and ultracentrifugation was developed to isolate cellular membrane proteins in C. magnoliae. Immunoblot analysis with the Pma1 antibody and two-dimensional electrophoresis analysis coupled with MS showed that the fraction II was enriched with membrane proteins. Eighteen proteins out of 36 spots were identified as membrane or membrane-associated proteins involved in sugar uptake, stress response, carbon metabolism, and so on. Among them, three proteins were significantly upregulated under the fructose supplying conditions. The hexose transporter was highly homologous to Ght6p in Schizosaccharomyces pombe, which was known as a predominant transporter for the fructose uptake of S. pombe because it exhibited higher affinity to D-fructose than D-glucose. The physicochemical properties of the ATP-binding cassette transporter and inorganic transporter explained their direct or indirect associations with the fructophilic behavior of C. magnoliae. The identification and characterization of membrane proteins involved in sugar uptake might contribute to the elucidation of the selective utilization of fructose to glucose by C. magnoliae at a molecular level.
As the modern society is rapidly developing and people become affluent in materials, many new chemical compounds in different forms of products (e.g., antibiotics, pesticides, detergents, personal care products and plastic goods) are produced, used, and disposed of to the environments. Some of them are persistently having a harmful impact on the environment and mimicking endocrine properties; in general they are present in the environment at low concentrations, so they are called organic pollutants. These organic micropollutants flow to sewage treatment plants via different routes. In this study, the generation characteristics, exposure pathways, detection levels, and environmental impacts of organic micropollutants were critically reviewed. In addition, currently available risk assessment methods and management systems for the compounds were reviewed. The United States Environmental Protection Agency (US EPA), for example, has monitored organic micropollutants and set the monitoring and management of some of the compounds as a priority. To effectively manage organic micropollutants in sewer systems, therefore, we should first monitor organic micropollutants of potential concern and then make a watch list of specific substances systematically, as described in guidelines on listing water pollutants in industrial wastewater.
사람주나무 (Sapium japonicum) 종실유의 물리 화학적 특성과 구성성분을 다양한 분석법으로 구명하였다. 사람주나무의 종실유를 구성하는 지질은 중성지질이 93% 로 가장 높고 , glycolipid 가 4.9%, phospholipid가 1.3%로 나타났다. GC 분석 결과 사람주나무의 종실에는 9종의 지방산이 존재하였다. 종실유에서 지방산의 함량은 저장기간 등에 따라 약간의 차이를 보였다. 종실유 중 3종의 지질은 silica open column을 통해 분획하고, 이들의 지방산 성분을 조사하였다. 3종의 지질 중 주요 지방산은 linoleic acid와 linolenic acid로 나타났다. 채취직후의 종실유에서 지방산의 함량은 저장된 종실유의 지방산에 비해 전반적으로높았다. 이상의 결과로 보아 사람주나무의 종실유는 화장품, 세정제, 의약품 등으로의 이용이 기대된다.
The recent increased interest in hygiene has led to the use of a variety of detergents everyday life. Accordingly, accidents occur frequently, but proper precautions or treatments have not yet been established for these occasions. The patient in this case had accidentally ingested basic detergent, after mistaking it for a drink. This had caused acid reflux swallowing distress. Treatment in a western medical hospital had resulted in improvement in inflammation, as observed with an esophageal endoscopy test, but the patient still found it almost impossible to drink or eat. Following treatment with herbal medicine and acupuncture, the patient’s food intake increased and the pain and dysphagia were diminished. We cannot generalize based only on this one case study, so further studies are needed.
As the materials being used in children's clothing become diverse, the number of reported problems related to various aspects of washing and wearing is increasing. Many customers experience great dissatisfaction when using these children's garments due to their lack of professional knowledge in washing, fabric, and detergents. Thus, this paper focuses on various cases in which housewives have experienced product damage after washing their children's garments according the prescribed directions. Of particular interest is how the consumers respond to such damage in garments and how their experiences with garment damage affect the sellers of these garments. A total of 292 housewives with children less than 8 years old living in Seoul responded to our survey, out of which 83 reported to have suffered negative consequences. By analyzing the 83 responses, the following results were found: First, the problems reported by the housewives in regards to washing children's garments were mostly related to the durability or color change problems. Secondly, the most favored means of response to garment damage were 'complaining directly to the seller' (16.7%) and 'complaining at the customer service department of the manufacturer or seller' (13.5%). Thirdly, among the actions they requested to the seller/manufacturer, 'ask for an exchange' marked the highest. Lastly, respondents admitted that their experiences with garment damage as well as the attitude or response of the manufacturer/retailer to their complaints would influence their repurchase intention.
A psychrotrophic strain 7195 showing extracellular lipolytic activity towards tributyrin was isolated from deep-sea sediment of Prydz Bay and identified as a Psychrobacter species. By screening a genomic DNA library of Psychrobacter sp. 7195, an open reading frame of 954 bp coding for a lipase gene, lipA1, was identified, cloned, and sequenced. The deduced LipA1 consisted of 317 amino acids with a molecular mass of 35,210 kDa. It had one consensus motif, G-N-S-M-G (GXSXG), containing the putative active-site serine, which was conserved in other cold-adapted lipolytic enzymes. The recombinant LipA1 was purified by column chromatography with DEAE Sepharose CL-4B, and Sephadex G-75, and preparative polyacrylamide gel electrophoresis, in sequence. The purified enzyme showed highest activity at $30^{\circ}C$, and was unstable at temperatures higher than $30^{\circ}C$, indicating that it was a typical cold-adapted enzyme. The optimal pH for activity was 9.0, and the enzyme was stable between pH 7.0-10.0 after 24h incubation at $4^{\circ}C$. The addition of $Ca^{2+}\;and\;Mg^{2+}$ enhanced the enzyme activity of LipA1, whereas the $Cd^{2+},\;Zn^{2+},\;CO^{2+},\;Fe^{3+},\;Hg^{2+},\;Fe^{2+},\;Rb^{2+}$, and EDTA strongly inhibited the activity. The LipA1 was activated by various detergents, such as Triton X-100, Tween 80, Tween 40, Span 60, Span 40, CHAPS, and SDS, and showed better resistance towards them. Substrate specificity analysis showed that there was a preference for trimyristin and p-nitrophenyl myristate $(C_{14}\;acyl\; groups)$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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