The RAD3 gene of Saccharomyces cerevisiae is required for excision repair and is essential for cell viability. The RAD3 encoded protein possesses a single stranded DNA-dependent ATPase and DNA and DNA-RNA helicase activities. To examine the extent of conservation of structure and function of a S. pombe RAD3 during eukaryotic evolution, the RAD3 homolog gene was isolated by screening of genomic DNA library. The isolated gene was designated as HRD3 (homolog of RAD3 gene). Southern blot analysis confirmed that S. pombe chromosome contains the same DNA as HRD3 gene and this gene exists as a single copy in S. pombe. The transcript of 2.8 kb was detected by Northern blot analysis, The level of transcripts increased by ultraviolet (UV) irradiation, indicating that HRD3 is one of the UV-inducible genes in S. pombe. Furthermore, the predicted partial sequence of HRD3 protein has 60% identity to S. cerevisiae RAD3 gene. This homology was particularly striking in the regions identified as being conserved in a group of DNA helicases. Gene deletion experiments indicate that the HRD3 gene is essential for viability and DNA repair function. These observations suggest evolutionary conservation of other protein components with which HRD3 might interact in mediating its DNA repair and viability functions.
DNA repair means a collection of processes that a cell identifies and corrects damage to genome sequence. The DNA repair processes are important because a genome would not be able to maintain its essential cellular functions without the processes. In this research, we make some gene regulatory networks of DNA repair in S. cerevisiae to know how each gene interacts with others. Two approaches are adapted to make the networks; Bayesian Network and ARACNE. After construction of gene regulatory networks based on the two approaches, the two networks are compared to each other to predict which genes have important roles in the DNA repair processes by finding conserved interactions and looking for hubs. In addition, each interaction between genes in the networks is validated with interaction information in S. cerevisiae genome database to support the meaning of predicted interactions in the networks.
Parine, Narasimha Reddy;Pathan, Akbar Ali Khan;Bobbarala, Varaprasad;Abduljaleel, Zainularifeen;Khan, Wajahatullah;Alanazi, Mohammed
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제13권12호
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pp.6469-6474
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2012
Background: DNA repair is one of the crucial defense mechanism against mutagenic exposure. Inherited SNPs of DNA repair genes may contribute to variation in DNA repair capacity and susceptibility to cancer. Due to the presence of these variants, inter-individual and ethnic differences in DNA repair capacity have been established in various populations. India harbors enormous genetic and cultural diversity. Materials and Methods: In the present study we aimed to determine the genotypes and allele frequencies of XRCC1 Arg399Gln (rs25487), XRCC3 Thr241Met (rs861539), XPD Lys751Gln (rs13181), and OGG1 Ser326Cys (rs1052133) gene polymorphisms in 186 healthy individuals residing in the Hyderabad region of India and to compare them with HapMap and other populations. Results and Conclusions: The genotype and allele frequency distribution at the four DNA repair gene loci among Hyderabad population of India revealed a characteristic pattern. Comparison of these gene polymorphisms with other populations revealed a distinctiveness of Hyderabad population from the Deccan region of India. To the best of our knowledge, this is the first report of such DNA repair gene polymorphisms in the Deccan Indian population.
Nathan, Sheila;Van Hoffen, Anneke;Mullenders, Leon H.F.;Mayne, Lynne V.
BMB Reports
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제32권6호
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pp.554-560
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1999
TTD1BI cells are non-hypersensitive to UV irradiation and perform normal genome repair of pyrimidine dimers but fail to excise 6-4 photoproducts and, concomitantly, are unable to restore RNA synthesis levels following UV irradiation. This pointed to a detect in gene-specific repair and this study was undertaken to examine repair of 6-4 photoproducts at the gene-level. The results indicated a defect in gene-specific repair of 6-4 photoproducts in active genes, although strand-specificity of 6-4 photoproduct removal was essentially similar to that of normal cells. These findings indicate that the near normal UV resistance of TTD1BI cells may be due to the inability of these cells to remove DNA lesions preferentially, as well as to the cells opting out of the cell cycle to repair damage before resuming replication.
DNA repair capacity is crucial in maintaining cellular functions and homeostasis. However, it can be altered based on DNA sequence variations in DNA repair genes and this may lead to the development of many diseases including malignancies. Identification of genetic polymorphisms responsible for reduced DNA repair capacity is necessary for better prevention. Homologous recombination (HR), a major double strand break repair pathway, plays a critical role in maintaining the genome stability. The present study was performed to determine the frequency of the HR gene XRCC3 Exon 7 (C18067T, rs861539) polymorphisms in Saudi Arabian population in comparison with epidemiological studies by "MEDLINE" search to equate with global populations. The variant allelic (T) frequency of XRCC3 (C>T) was found to be 39%. Our results suggest that frequency of XRCC3 (C>T) DNA repair gene exhibits distinctive patterns compared with the Saudi Arabian population and this might be attributed to ethnic variation. The present findings may help in high-risk screening of humans exposed to environmental carcinogens and cancer predisposition in different ethnic groups.
The SNF2 family includes proteins from a variety of species with roles I cellular processes such as transcriptional regulation, recombination and various types of DNA repair. Several proteins with unknown function are also included in this family. Here, we report the cloning and characterization of hrp 2+ gene (helicase related gene from S. pombe) which was isolated by PCR amplication using the conserved domain of SNF2 motifs within the ERCC6 gene which encodes a protein involved in DNA excision repair. The hrp2+ gene was isolated by screening with yeast S. pombe genomic library. The isolated cloned contained 6.5 kb insert DNA. Southern blot analysis confirmed that S. pombe chromosome contains the same DNA as hrp2+ gene and this gene exists as a single copy in S. pombe genome. The 4.7 kb transcript of mRNA was identified by Northern blot. To examined the transcriptional regulation of hrp2+ gene, DNA damaging agents were treated. These results indicated that the hrp2+ gene may not be directly involved in DNA replication, but may be involved in damage response pathway.
본 연구는 출아형 효모 Saccharomyces cerevisiae에서 자외선의 상해 시 이를 정상으로 회복시키는 절제회복(excision repair) 유전자로 알려진 RADS의 특성 규명을 위하여 균류 Coprinus cinereus에서 이와 유사한 유전자를 분리하였다. RADS 유사 유전자를 분리하기 위하여 균류 C. cinereus의 염색체 DNA를 전기영동하여 분리한 다음 효모 RADS DNA를 probe로 하여 이와 hybridization하였다. 이 결과 RADS유사 유전자는 3.4kb의 insert DNA를 갖고 있었다. 또한 Southern hybridization으로 이 유사 유전자는 fungus C. cinereus의 염색체에 존재함을 확인하였다. 분리한 RADS 유사 유전자의 전사체 크기는 2.8kb 였으며, 자외선의 상해시 전혀 자외선에 대한 유도성이 없음을 Northern hybridization으로 확인하였다. 또한 유사유전자 부분을 삭제하였을 때 이 부분이 없는 세포는 전혀 생존을 못하였다. 이 결과 분리한 RADS 유사유전자는 세포의 생존에 필수적인 유전자임을 알 수 있었다.
There are 3 UV DNA repair endonuclease activities in mammalian cells that cleave UV -irradiated DNA. Interestingly, mammalian UV endonuclease III with MW of 26.7kD has a lyase activity on AP sites. It also cleaves the phosphodiester bond within a cyclobutane pyrimidine dimer. Genomic analysis of human repair endonuclease III gene revealed that this gene has 100% sequence identity with ribosomal protein S3 (rpS3). Therefore, rpS3 seems to function both in translation and in DNA repair. This gene of about 6.1 kb contains 6 introns and 7 exons, and the first and fifth introns of human rpS3 gene contain functional U15 small nucleolar (sno) RNAs which appear to be involved in ribosome assembly. It is to be noted that the column profile of the endonuclease activity of rpS3 appears to be altered in Xeroderma Pigmentosum (XP) group D cells compared to normal cells indicating that this protein is involved in XP disease as well. XP is a human disease characterized by high sensitivity of skin by UV- or sun-light irradiation and by high frequency of developing skin cancers. We also report here that rpS3 protein is involved in other cellular functions.
본 연구는 출아형 효모 Saccharomyces cerevisiae에서 자외선의 상해 시 이를 정상으로 회복시키는 절제회복 (excision repair) 유전자로 알려진 RADA4의 특성 규명을 위하여 균류 Coprinus cinereus에서 이와 유사한 유전자를 분리하였다. RAD4 유사 유전자를 분리하기 위하여 균류 C. cinereus의 염색체 DNA를 전기영동하여 분리한 다음 효모 RAD4 DNA를 probe로하여 이와 hybridization하였다. 이 결과 RAD4 유사 유전자는 3.2 kb의 insert DNA를 갖고 있었다. 또한 Southern hybridization으로 이 유사 유전자는 fungus C. cinereus의 염색체에 존재함을 확인하였다. 분리한 RAD4 유사 유전자의 전사체 크기는 2.5 kb 였으며, 자외선의 상해 시 전혀 'inducibility가 없음을 Northern hybridization으로 확인하였다. 또한 유사유전자 부분을 삭제하였을 때 이 부분이 없는 세포는 전혀 생존을 못하였다. 이 결과 분리한 RAD4 유사유전자는 세포의 생존에 관여함을 알 수 있었다.
The RAD4 gene of Saccharomyces cerevisiae is essential for the incision step of UV-induced excision repair. A yeast RAD4 gene has been previously isolated by functional complementation. In order to identify the RAD4 homologous gene from fungus Coprinus cinereus, we have constructed cosmid libraries from electrophoretically separated chromosomes of the C. cinereus. The 13 C. cinereus chromosomes were resolved by pulse-field gel electrophoresis, hybridized with S. cerevisiae RAD4 DNA, and then isolated homologous C. cinereus chromosome. The insert DNA of the RAD4 homolog was contained 3.2 kb. Here, we report the partial cloning and characterization of fungus C. cinereus homolog of yeast RAD4 gene. Southern blot analysis confirmed that C. cinereus contains the sequence homologous DNA to RAD4 gene and this gene exists as a single copy in C. cinereus genome. When total RNA isolated from C. cinereus cells was hybridized with the 1.2 kb PvuII DNA fragment of the S. cerevisiae RAD4 gene, a 2.5 kb of transcript was detected. The level of the transcript did not increase upon UV-irradiation, suggesting that the RAD4 homologous gene in C. cinereus is not UV-inducible.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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