The DPB11 gene, which genetically interacts with DNA polymerase II ($\varepsilon$) encoded by POL2 and DPB2, is required for DNA replication and the S phase checkpoint in Saccharomyces cerevusiae. The transcripts of DPB11 did not fluctuated as evidently as DPB2 and POL2 genes during cell cycle. To identify the physical interaction between Dpb2 and Dpb11, we examined the interaction by two-hybrid system. The interaction between Dpb2 and Dpb11 was detected in a two-hybrid assay. These results suggest that the amount of the Dpb2-Dpb11 complex may peak at the G1/S boundary. Therefore, we strongly suggest the involvement of the Dpb2-Dpb11 complex in a progression of DNA replication and S-phase checkpoint.
The process of transcription is the major point at which gene expression is regulated. The jun and fos families of eukaryotic transcription factor heterodimerize to form complexes capable of binding 5'-TGAGTCA-3'DNA elements (AP-1 binding site). To search for the inhibitors of the jun-fos-DNA complex formation, several natural products extracts were screened and methanol extract of tanshen (the dried roots of Salvia miltiorrhiza Bunge) showed remarkable inhibitory activity. The active compounds of the extracts were purified using re-peated column chromatography and recrystallization. Their structures were identified as tanshinone I and tanshinone IIA. Through the electrophoresis mobility shift assay and cell cytotoxicity test, tanshinone I and tanshinone IIA were identified as inhibitors that suppress not only AP-1 function but also the cell proliferation. Tanshinone I also suppressed the jun-fos-DNA complex formation in TPA-induced NIH 3T3 cells.
Seo, Jin-Wook;Lee, Hak-Sung;Lee, Min-Jun;Kim, Mi-Ra;Shin, Cha-Gyun
Archives of Pharmacal Research
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제27권1호
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pp.77-82
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2004
DA-125, a novel derivative of adriamycin, is known for its anti-cancer activity. In this study, the inhibitory mechanism of DA-125 on topoisomerase was investigated in the simian virus 40 (SV40) replicating CV-1 cell by studying the SV40 DNA replication intermediates and DNA-topoisomerase complexes. DNA-protein complexes that were formed in the drug-treated cells were quantitated by using a glass filter assay. SV40 DNA replication intermediates that were accumulated in the drug-treated CV-1 cell were analyzed in a high resolution gel. DA-125 did not accumulate B-dimers of SV40 DNA replication intermediates which were found in the adriamycin-treated CV-1 cells. DA-125 induced a dose-dependent formation of the DNA-protein complexes, while adriamycin did not. When adriamycin and etoposide (VP16) were added to the SV40-infected cells at the same time, adriamycin blocked the formation of the DNA-protein complexes induced by VP16 in a dose-dependent manner. However, DA-125 blocked the formation of the DNA-protein complexes induced by VP16 up to the maximum level of the DNA-protein complexes that were induced by DA-125 alone. Adriamycin and DA-125 did not inhibit the formation of the DNA-protein complexes that were caused by camptothecin, a known topoisomerase I poison. DA-125 is bifunctional in inhibiting topoisomerase II because it simultaneously has the properties of the topoisomerase II poison and the DNA intercalator. As a topoisomerase II poison, DA-125 alone induced dose-dependent formation of the DNA-protein complexes. However, as a DNA intercalator, it quantitatively inhibited the formation of the DNA-protein complexes induced by a strong topoisomerase II poison VP16. Furthermore considering that the levels of the DNA-protein complex induced by VP16 were decreased by DA-125 in terms of the topoisomerase II poison, we suggest that DA-125 has a higher affinity to the drug-binding sites of DNA than VP16 has.
The interactions of Cu(II)-meso-Tetrakis(n-N-methylpyridiniumyl)porphyrin (n = 2,3,4), respectively referred to as o-, m- and p-CuTMPyP, and DNA, poly$[d(A-T)_2]$ and poly$[d(G-C)_2]$ were investigated by circular and linear dichroism (CD and LD). In the o-CuTMPyP case, in which the rotation of the pyridinium ring is prevented, the shape of the CD spectrum when associated to DNA and poly$[d(A-T)_2]$ resembles and is characterized by a positive band at a low drug to DNA concentration ratio (R ratio) and is bisignate at a high R ratio. The former CD spectrum shape has been attributed to porphyrin that is bound monomerically outside of DNA while the latter can be attributed to those that are stacked. When o-CuTMPyP is bound to poly$[d(G-C)_2]$, the excitonic CD appeared at a relatively high R ratio. In contrast, a characteristic negative CD band in the Soret region was apparent for both m- and p-CuTMPyP when bound to DNA and poly$[d(G-C)_2]$ at the low R ratios, indicating that the porphyrin molecule intercalates. However, the DNA is bent near the intercalation site and the plane of the porphyrin molecule tilts relative to the DNA helix axis, as judged by the magnitude of the reduced LD. Various stacking patterns were identified by the shape of the CD spectrum for m- and p-CuTMPyP when bound to poly$[d(A-T)_2]$. Three species for the former complex and two for the latter complex were found which may reflect the extent of the stacking.
Nitesh Pant;HyeongJin Noh;Won-Ho Lee;Seong Hwan Kim
Mycobiology
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제51권2호
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pp.109-113
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2023
Auricularia is one of the broadly cultivated edible mushrooms in Korea. Most of the Korean Auricularia strains used for cultivation and breeding are known as A. auricula-judae. Recently, this species has been reported to belong to a species complex. Therefore, this study was carried out to genetically clarify the bred and cultivated Korean A. auricula-judae strains. The internal transcribed spacer (ITS) and IGS1 rDNA region sequences were determined from 10 A. auricula-judae strains by PCR and sequencing. Variation in the nucleotide sequence and sequence length of the two rDNA regions were found among the seven A. auricula-judae strains. A maximum-likelihood (ML) phylogenetic tree based on the ITS sequences clearly placed all the 10 Korean A. auricula-judae strains in the A. heimuer clade of the A. auriculajudae complex. A. heimuer is diverged from A. auricula-judae. An ML phylogenetic tree based on the IGS1 sequences revealed the close relationship between Korean A. heimuer strains to Chinese A. heimuer strains. But each strain could be distinguishable by the IGS1 sequence. Furthermore, progeny strains in the seven Korean strains could be differentiated from their parental strains by the IGS1 sequence based phylogenetic tree. Our results are expected to be used to complement the distinction of domestic Auricularia cultivars.
The pyruvate dehydrogenase complex (PDC), a member of $\alpha$-keto acid dehydrogenase complex, catalyzes the oxidative decarboxylation of pyruvate with the formation of $CO_2$, acetyl-CoA, NADH, and $H^+$. This complex contains multiple copies of three catalytic components including pyruvate dehydrogenase (E1), dihydrolipoamide acetyltransferase (E2), and dihydrolipoamide dehydrogenase (E3). Two regulatory components (E1-kinase and phospho-E1 phosphatase) and functionally less-understood protein (protein X, E3BP) are also involved in the formation of the complex. In this study, we have partially cloned the gene for E3BP in human. Nine putative clones were isolated by human genomic library screening with 1.35 kb fragment of E3BP cDNA as a probe. For investigation of cloned genes, Southern blot analysis and the construction of the restriction map were performed. One of the isolated clones, E3BP741, has a 3 kb-SacI fragment, which contains 200 bp region matched with E3BP cDNA sequences. The matched DNA sequence encodes the carboxyl-terminal portion of lipoyl-bearing domain and hinge region of human E3BP. Differences between yeast E3BP and mammalian E3BP coupled with the remarkable similarity between mammalian E2 and mammalian E3BP were confirmed from the comparison of the nucleotide sequence and the deduced amino acid sequence in the cloned E3BP. Cloning of human E3BP gene and analysis of the gene structure will facilitate the understanding of the role(s) of E3BP in mammalian PDC.
무릇 (S. scilloides Complex)에서 게놈 유형이 다른 AA, BB 및 AABB 게놈 식물의 조직배양을 통하여 유도된 재분화체를 대상으로 RAPD기법을 이용한 유전적 분석을 통해 게놈의 안정성과 게놈 유형에 따른 차이를 분석한 결과, 적용한 20가지의 primer중 Al, A2및 A3에서 게놈 유형에 따른 다형현상을 관찰할 수 있었다. RAPD분석 결과 AA게놈에서 39.2%로 다형성이 세 가지 유형 중 가장 낮게 나타났으며, BB 게놈에서는 72.3%로 가장 높은 다형성을 보였고, AABB 게놈에서는 45.7%의 다형성이 관찰되었다. AA유형에서 관찰된 총 110개의 밴드 중 특이 밴드가 A3에서 하나 나타나 0.9%의 변이율을 보였으며, BB 게놈의 경우 총 116개의 밴드 중 특이 밴드는 A3에서 5개 나타나 4.3%의 변이율을 보여 주었고, AABB유형에서는 총 103개의 밴드 중 특이 밴드가 Al에서 2개, A2에서 1개, A3에서 2개로 총 5개가 나타나 4.9%의 변이율을 나타내었다. RAPD 분석은 게놈 유형이 다른 무릇 체세포클론의 유전적인 안정성 분석에 유용하게 이용될 수 있다.
For identification of four sibling species of the Anopheles hyrcanus complex found in Korea, the 5.8 rDNA-ITS2-28S rDNA region of each species was sequenced and the species-specific primers wee designed The amplified PCR products obtained from each species were analyzed by agarose gel electrophoresis. The result showed a single species- specific band, I.e. 559bp, 432bp, 322bp and 192bp for An. sinensis, An. sp., An. lesteri and An. pullus, respectively. In conclusion, the species-specific PCR primers designed from ITS2 variable regions functioned successfully and specifically, and can be applied as a useful tool for identifying species of the Anopheles hyrcanus complex found in Korea.
Binding geometries of $[Ru(II)(110-phenanthroline)_2L]^2+$, complexes (where L = dipyrido [3,2-a:2',3'-c]phena-zine (DPPZ) or benzodipyrido[3,2-a:2',3'-c] phenazine (BDPPZ)) to poly(dG)${\cdot}$poly(dC)${\cdot}$poly(dC) + triplex DNA (CGC + triplex) has been investigated by linear dichroism and normal absorption spectroscopy. Analysis of the linear dichroism for the CGC+ triplex and $[Ru(II)(phen)_2BDPPZ]^2+$ complex indicates that the extended ligand of the metal complex lie perpendicular to the polynucleotide helix axis. Together with strong hypochromism and red shift in the interligand absorption region, we concluded that the extended BDPPZ or DPPZ ligand in-tercalated between the bases of polynucleotide. The spectral properties of the metal complexes bound to CGC+ triplex are similar to those bound to $poly(dA)[poly(dT)]^2$ triplex (Choi et al., Biochemistry 1997, 36, 214), sug-gesting that the metal complex is located in the minor groove of the CGC+ triplex.
Nucleic scids transfer the genetic information for serving a central biological purpose. The nucleic acids are polymers of nucleotides and they are mainly ribonucleic acid(RNA) and deoxyribonucleic acid(DNA). The nucleotides are stoichiometrically composed of five-carbon sugars, nitrogeneous bases, and phosphoric acids. The chemistry of nucleic acids and characteristics of different genomes are decribed for further study. Most of DNA genomes tend to be circular including bacterial genomes and eukaryotic mitochondrial DNA. Eukaryotic chromosomes in cells, in contrast, are generally linear. The ends of linear chromosomes are called telomeres. The genomes of different species, such as mammals, plants, invertebrates can be compared with the chromosome ends. The telomeric complex allows cells to distinguish the random DNA breaks and natural chromosomal ends. The very ends of chromosomes cannot be replicated by any ordinary mechanisms. The shortening of telomeric DNA templates in semiconservative replication is occurred with each cell division. The short telomere length is critically related to aging, tumors and dieases.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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