G+C 함량이 높은 primer를 이용한 중합효소 연쇄반응을 실시하는 경우 높은 annealing 온도로 인하여 특이 염기서열의 합성정도가 매우 미약하게 나타나는 경우가 많이 있다. 이와 같은 문제점을 보완하기 위하여 glycerol, formamide 및 dimethyl sulfloxide (DMSO) 등의 변성제를 반응용완충액에 첨가하고 중합효소 연쇄반응을 실시하여 그 결과를 비교 검토하였다. G+C 함량이 낮은 Borrelia burgdorferi의 Lyl 유전자의 primer set인 Bb 679와 Bb 680를 이용한 중합효소 연쇄반응에서는 변성체 첨가에 따른 합성 DNA의 양의 변화가 뚜렷하지 않았다. 그러나 G+C 함량이 높은 primer set인 Mycobacterium paratuberculosis의 IS900 유전자의 IS900/150C와 IS900/921를 이용한 중합효소 연쇄반응을 유도한 경우에는 변성제를 첨가함에 따라 합성된 DNA의 양의 증가가 뚜렷하였으며, 2.5% glycerol과 1.25% formamide를 혼합 첨가한 경우와 또는 2.5% DMSO를 반응용 완충액에 첨가하였을 때 비특이적인 증폭비율이 낮아 특이 염기서열의 합성 결과가 양호한 것으로 나타났다.
서울지역의 소아설사환자가 가검물로부터 분리한 로타바이러스의 VP7을 코딩하는 RNA분절 cDNA를 합성한 후 로타바이러스 혈청형1인 WA1과 RE9의 아홉 번째 RNA분절과 비교하였더니 90%이상의 유사성을 보였다. 염기서열로부터 유추된 아미노산 서열중 혈청간에 변이가 많은 VR5와 VR8 지역을 비교한 결과 역시 혈청형 1인 RE9과 WA1 바이러스주와 매우 높은 유사성을 지님을 알 수 있었다.
인체 암세포계(MG-63 골육암 세포, HT-29 인체 결장암세포, K-562 백혈암세포)를 이용하여 느릅나무 근피 메탄올 추출물, 열탕 추출물 및 즙액에 의한 암세포 성장에 미치는 효과를 검토하였다. 느릅나무 근피 메탄올 추출물, 열탕 추출물 및 즙액은 낮은 농도에서부터 인체 골육암 세포의 증식을 억제시켰다. 인체 결장암세포와 백혈암세포에서도 느릅나무 근피 메탄올 추출물, 열탕 추출물 및 즙액은 낮은 농도인 1 mg/ml에서부터 활성을 나타내어 40% 이상으로 암세포 증식 억제효과를 나타내어 앞서의 MG-63 골육암 세포에서 보다 그 증식 억제효과가 높은 것으로 나타났다. 느릅나무 근피 메탄올 추출물, 열탕 추출물 및 즙액을 골육암과 결장암세포에 투여한 2일 후에 세포내의 DNA 합성에 미치는 영향을 측정한 결과, 농도 의존적으로 암세포의 DNA 합성을 저해하는 것을 살펴 볼 수가 있었다. 따라서 느릅나무 근피 추출물은 인체 암세포 증식을 크게 억제하였으며 열탕 추출물에서도 항암활성 효과를 보여 느릅나무 근피 유래 생리활성 물질은 열에 안정한 것으로 여겨진다.
Integrase (Int) carries out the cutting and resealing of attachment (att) site DNA via a covalent Int-DNA intermediate. A family of synthetic substrate DNAs was designed to accumulate Int-DNA intermediate. Int-DNA intermediates accumulated by half substrate was analyzed by SDS- KCI precipitation and restriction digestion. The results showed that Int-half DNA intermediate was circular and contained covalently bound Int molecule. Int-DNA intermediates were also trapped with three other kinds of synthetic substrates.
본 논문에서는, 퍼지 제어기의 성능에 대한 손실이 없으면서, 퍼지규칙의 수를 줄이고 최적화하고 자동화할 수 있는 방법으로 개략추론과 국소추론의 개념을 결합시킨 새로운 합성형 퍼지 추론법을 제안한다. 개략추론과 국소추론의 상호작용을 제어하기 위하여, DNA코딩 알고리즘을 합성형 퍼지 추론법의 국소퍼지 추론부에 도입한다. 그리고, 제안된 방법의 성능을 평가하기 위하여 실제의 수위제어 시스템에 적용하고, 시뮬레이션한 결과는 제안된 방법이 종래의 제어기법보다 고도의 제어 정밀성을 가지며, 퍼지규칙의 자동 획득도 용이함을 입증하였다.
들메나무(Fraxinus mandshurica Rupr.) 는 우리나라에서 두가지의 서로 다른 형태(形態)가 자생(自生)하고 있는 것으로 알려져 있다. 최근(最近)에 개발(開發)된 PCR기법(技法)을 이용(利用)하여 이 두 형태(形態)의 들메나무 DNA의 변이(變異)를 조사(調査)하였다. DNA 합성(合成) 효소(酵素)와 인공합성(人工合成)된 primer를 이용(利用)하여 이 수종(樹種)의 DNA를 증폭(增幅)시켜 비교(比較)한 결과(結果)이 두 형태(形態)는 DNA 비례(排列)에서 서로 다른것으로 나타났다. DNA변이(變異)는 같은 형태내(形態內)의 개체간(個體間)에도 나타나나 각 형태별(形態別)로 뚜렷하게 구분(區分)되어 형태별(形態別)로 특징적(特徵的)인 band들이 관찰(觀察)되었다. 이러한 특징적(特徵的)인 band들로 두 형태(形態)를 구분(區分)할 수 있었다.
As one of the starting materials, methylthioacetyl chloride(7) was synthesized in fair yield from mercaptoacetic acid via methyl methylthioacetate(5) prepared by alkylation employing N, N'-dicyclohexyl-O-methylisourea(4). Then 1-$\beta$-D-arabinofuranosylcytosine-5'-methylthioacetate (3) was prepared by esterification of ara-C with obtained methylthioacetyl chloride and tested for inhibitory activity on DNA synthesis in the growing primary hepatocytes and hepatoma strains($H_4$-II-E and HTC cells). In these in vitro cell lines, the inhibitory effect of ara-C-MTA(3) on DNA synthesis was similar to that of its parent ara-C but slightly lower.
합성 DNA는 분자 생물학의 모든 분야의 연구에 사용될 수 있으며 앞으로도 그 이용도는 더욱 증가할 것으로 전망된다. 합성 기술의 발달로 생리활성을 가진 인조 유전자를 제조하는 것이 가능해졌으며 또한 다른 방법으로는 어려운 유전자의 분리와 cloning, site specific mutagenesis, 질병의 진단, 유전자의 구조 및 기능의 연구등 수많은 분야의 연구에 이용되고 있다. 본 고에서는 현재 여러 군데 분자 생물학 연구실에서 성공적으로 사용되고 있는 자동 합성기에 의한 phosphite합성법의 기초 이론과 합성된 oligonucleotide의 정제법에 대하여 간단히 서술하고 그 응용 방법에 대하여 논하고자 한다.
reverse transcription은 AIDS를 일으킨다고 알려진 바이러스인 HIV-1의 번식에는 필수적이나 인체 세포에는 필수적이 아니기에 이 단계를 표적으로 하는 AIDS 치료제가 우선적으로 개발되었다. 그 단계에 필요한 효소가 바이러스에 의해 만들어진 RT이며 이 효소의 작용을 저해하는 nucleoside 유도체들인 AZT, DDC, DDI 들이 현재 AIDS 환자의 치료에 사용되고 있다. 이들 nucleoside 유도체들은 세포안으로 들어가 triphosphate 형태로 변화된 후 dNTP와 상경적으로 경쟁하며 합성 중인 바이러스의 DNA에 들어가 DNA의 합성을 정지시켜 바이러스의 증식을 억제한다. 그러나, 이들 nucleoside 유도체들은 치료용량에서 심한 독성을 나타낼 뿐만 아니라 장기 투여시 내성을 나타내는 바이러스가 생겨나 AIDS의 치료를 불가능하게 하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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