• 제목/요약/키워드: DNA: DNA hybridization

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DNA-DNA hybridization에 의한 Bacillus coagulans의 분류학적 연구

  • 정지관
    • 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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    • 한국미생물생명공학회 1976년도 제8회 학술발표회
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    • pp.187.4-188
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    • 1976
  • 서로 다른 11주의 Bacillus coagulans와 13종의 Bacillus 속 14주를 deoxyribonucleic acid (DNA) -DNA hybridization method에 의해서 분류학적인 연구를 하였다. 사용한 B. coagulans 11주종 6주는 흙에서(일본 오사까교회) 분리했고 나머지 5주는 ATCC, IFO에서 authentic strains을 얻어서 사용했다. 사용된 B. coagulans는 Bergey's Manual(8 thed)에 의거 Grodon씨들의 방법으로 동정한 결과 B. coagulans로서 확인되었다.(중략)

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Dot blot hybridization법을 이용한 Fusobacterium nucleatum 아종-특이 DNA 프로브의 특이성 평가 (Identification of Fusobacterium nucleatum isolated from Korean by F. nucleatum subspecies-specific DNA probes)

  • 김화숙;국중기
    • 한국치위생학회지
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    • 제6권4호
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    • pp.311-324
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    • 2006
  • The purpose of this investigation was to evaluate of the specificity of Fusobacterium nucleatum subspecies-specific DNA probes using dot blot hybridization. To confirm whether the clinical isolates were F. nucleatum or not, 16S rDNA of them were cloned and sequenced. The sequencing data were used in homology search with database of GenBank. When the homology was above 98% compared with the nucleotide sequence of a certain bacteria, it was judged as the same species with the bacteria. 23 strains of F. nucleatum were isolates from subgingival plaque of periodontitis patient. The clinical isolates of F. nucleatum were classified into 10 groups using phylogenetic analysis of 16S rDNA sequence. F. nucleatum subspecies nucleatum-specific DNA probe Fu4(1.3 kb) reacted with genomic DNAs from 8 type strains of F. nucleatum and it reacted strongly with those from 8 clinical isolates. The Fp4(0.8 kb) reacted with F. nucleatum subsp. polymorphum ATCC 10953 and one clinical isolates. Fv35(1.9 kb) and Fs17(8.2 kb) probes reacted with genomic DNAs from F. nucleatum subsp. vincentii ATCC 49256 and F. nucleatum subsp. fusiform ATCC 51190, respectively. Our results showed that it is not enough to evaluate the specificity of F. nucleatum subspecies-specific DNA probes with only dot blot hybridization. Therefore, Southern blot analysis will be necessary to confirm the specificity of F. nucleatum subspecies-specific DNA probes.

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전기화학적 방법에 의한 바이오칩의 SNP 검출 (SNP Detection of Biochip Using Electrochemical System)

  • 최용성;박대희
    • 대한전기학회:학술대회논문집
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    • 대한전기학회 2004년도 하계학술대회 논문집 C
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    • pp.2128-2130
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    • 2004
  • High throughput analysis using a DNA chip microarray is powerful tool in the post genome era. Less labor-intensive and lower cost-performance is required. Thus, this paper aims to develop the multi-channel type label-free DNA chip and detect SNP (Single nucleotide polymorphisms). At first, we fabricated a high integrated type DNA chip array by lithography technology. Various probe DNAs were immobilized on the microelectrode array. We succeeded to discriminate of DNA hybridization between target DNA and mismatched DNA on microarray after immobilization of a various probe DNA and hybridization of label-free target DNA on the electrodes simultaneously. This method is based on redox of an electrochemical ligand.

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DNA Hybridization 센서의 제작과 전기화학적 검출 특성 (Fabrication and Electrochemical Detection Property of Single Strand DNA Hybridization Sensor)

  • 이동윤;양창헌;최원석;박상현;권영수
    • 대한전기학회:학술대회논문집
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    • 대한전기학회 2007년도 제38회 하계학술대회
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    • pp.1375-1376
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    • 2007
  • A synthesized 21-mer single-stranded DNA(ss DNA) was covalently immobilized onto a self-assembled aminoethanethiol monolayer modified gold electrode onto QCM. The covalently immobilized ssDNA was hybridized with complementary ssDNA. The interaction between surface immobilized ssDNA and complementary 21-mer DNA in solution was also examined. Each step was followed by monitoring changes in the QCM frequency with time. Also, PBS with pH 7.0 was selected as a supporting electrolyte in order to get maximum sensitivity and good bioactivity.

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식중독균 현장탐지를 위한 DNA 크로마토그래피 분석시스템의 개발 (Department of DNA Chromatographic System for On-Site Detection of Food-Contaminating Bacteria)

  • 김석하;정우성;백세환
    • KSBB Journal
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    • 제18권3호
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    • pp.190-196
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    • 2003
  • 임신이나 배란진단과 같이 가정에서 직접 사용할 수 있는 형태의 membrane strip 크로마토그래피 방법을 이용하여 식중독 균 DNA 분석시스템을 개발하였다. 분석물질로서는 빈번하게 발생하고 있는 식중독 미생물 중에서 S. typhimurium을 선택하였으며, Salmonella 종에 특이한 유전자 부위인 invA 유전자 분석을 목표로 하였다. 우선 이 유전자는 본 실험실 내에서 설계한 primer 쌍을 사용한 PCR 공정을 통하여 증폭되었다. 이렇게 증폭한 산물을 본 연구자들이 설계한 DNA probe와의 hybridization을 통하여 분석함으로써 전통적으로 사용하고 있는 전기영동 분석법의 단순히 분자크기에 의한 분리법과 비교하여 특이한 분석을 할 수 있었다. 이때 PCR 후 과량으로 잔존하는 primer를 별도로 제거하지 않고 hybridization을 수행할 수 있도록 특별하게 DNA probe를 설계하였다. 또한, probe가 증폭된 DNA와 hybridization 하였을 때 고체표면에 의한 간섭효과가 최소화되도록 설계 시 반영되었고 더욱이 streptavidin-비오틴의 결합을 이용하여 probe를 고정함으로써 고상에서의 상호작용이 더욱 용이하도록 배려하였다. 이러한 분석방법을 이용하여 분석한 결과 시료첨가 후 20-40분 정도에 최소 $10^3$cfu/mL (10 cells/system) 농도의 박테리아를 분석할 수 있었다. 이러한 결과는 일반적으로 사용하는 전기영동법보다 약 10배정도 더 민감한 결과일 뿐만 아니라 실험실 기기를 사용하지 않고 분석을 수행함으로써 분석시료가 제공되는 현장에서도 식중독 균의 탐지가 가능하게 되었다.

전기화학법을 이용한 DNA Hybridization 검출 센서의 개발 및 특성 해석 (Development of DNA Hybridization Detection Sensors and Analysis of Characteristics Using Electrochemical methods)

  • 옥진영;김도균;장정수;권영수
    • 대한전기학회:학술대회논문집
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    • 대한전기학회 2002년도 추계학술대회 논문집 전기물성,응용부문
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    • pp.260-262
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    • 2002
  • The determination of DNA hybridization can apply the molecular biology research. clinic diagnostics. bioengineering, environment monitoring, food science and other application area. So, The determination of hybridization is very important for the improvement of DNA detection system. In this study, we report the characterization of the DNA hybridization by the electricalchemical methods. The probe oligonucleotide was used to determine the amount of target oligonucleotide in solution using Methylen Blue(MB) as the electrochemical indicators. The cathodic peak currents($I_{peak}$) of MB were linearly related to the concentration of the target oligonucleotide sequence in the range $1[{\mu}M]{\sim}0.1[{\mu}M]$. The detection limit of this approach was 0.01[nM]. As a result, the match oligonucleotide(CR-1) was most stable state and the peak of redox current measured by DNA hybridization detection sensors by using electrochemical method seem to be similar to 1-mer terminal mismatch oligonucleotide(MR-3). The MR-2, MR-3, MR-22 and MR-33 have each mismatching sequence of central and terminal. With this set the role of point mutations was to be investigated. Terminal mismatch oligonucleotide (MR-3, 33) is shown more stable state than central mismatch oligonucleotide(MR-2, 22). And 1-mer mismatch oligonucleotide(MR-2 or 3) is shown more stable state than 2-mer mismatch oligonucleotide(MR-22 or 33).

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Serratia marcescens Metalloprotease 유전자의 대장균에로의 클로닝 (Molecular Cloning of Serratia rnarcescens Metalloprotease Gene into Escherichia coli)

  • 김기석;이창원;이상열;이병룡;신용철
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제20권3호
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    • pp.280-288
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    • 1992
  • Serratia marcescens ATCC 21074 균주가 세포밖으로 분비하는 metalloprotease 유전자를 대장균으로 클로닝하고 그 발현을 살펴보았다 Serratia marcescens ATCC 21074 균주의 염색체 DNA를 제한효소 HindIII로 절단하고 아가로스 전기영동 후 32P로 표지된 합성 oligonucleotide를 사용하여 southern hybridization한 결과 4.0Kb의 DNA 절편에 metalloprotease가 존재함을 알 수 있었다. 4.0Kb 염색체 DNA 절ㅊ편을 분리하여 pUC19에 연결한 후 대장균으로 transformation하였다.

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Fusarium속에서 PFGE를 이용한 Electrophoretic Karyotyping (Electrophoretic Karyotyping by PFGE in the Genus Fusarium)

  • 민병례;정진숙;최영길
    • 한국균학회지
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    • 제26권2호통권85호
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    • pp.135-143
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    • 1998
  • CHEF (Contour-Clamped homogeneous electric field) gel electrophoresis를 이용하여 Fusarium section Sporotrichiella, Liseola, Gibbosum, Discolor와 Martiella에 속하는 10종의 electrophoretic karyotype을 비교하였다. Intact chromosomal DNA는 균류의 원형질체로부터 추출하였으며, 크기에 따라 다양한 조건을 주어 DNA 분자를 분리시켰다. Fusarium속에 속하는 종의 염색체는 0.78Mb에서 7.20Mb의 크기를 가진 염색체가 종에 따라 $5{\sim}13$개였다. 각 종의 total genome 크기는 18.32Mb에서 48.20Mb였다. Electrophoretic karyotype을 비교한 후 F. oxysporum formae speciales lilii로부터 무작위로 선택하여 만든 genomic DNA를 probe로 하여 Southern hybridization 분석을 수행하였다.

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DNA Probe에 의한 $Km^r$ 유전자의 전이 추적 (Tracking of the $Km^r$ Gene in Conjugal Transfer by Using DNA Probe)

  • 이성기;김치경
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제20권4호
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    • pp.483-490
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    • 1992
  • 수계 환경에서 일어나는 유전자의 전이행방을 이해하기 위하여, conjugation에 의하여 전이되는 kanamycin 내성 ($Km^r$) 유전자에 대하여 DNA probe를 이용하여 Southern hybridization 방법으로 추적하였다. 자연계로부터 분리한 $Km^r$ 세균과 $Km^r$ 유전자를 유전자 조작기법으로 변형시킨 GMM 균주들을 donor로 하여 conjugation을 했을 때, $Km^r$ 유전자는 자연계 분리 균주에서보다 수질환경에 관계없이 10~00배 잘 전이되었다. LB 배지에서 GMM 균주의 $Km^r$ 유전자가 전이된 conjugant에서는 새로 생성되는 plasmid가 많이 나타났고 AW와 FW에서는 conjugation 시간에 따라 plasmid의 재배열 현상이 다양하였다. LB에서 얻은 conjugant들의 plasmid에 대하여 $Km^r$ DNA probe로 Southern analysis를 한 결과, plasmid의 재배열이 다양함에도 불구하고 conjugant들의 $Km^r$ plasmid는 donor에서와 같은 위치에서 hybridization signal이 나타났다. 그러나 AW에서 50시간 conjugation시켰을 때 DKI의 pDK101과 DKC601의 pDT529, 그리고 AW에서 30시간 conjugation 시켰을 때 DKC600의 pDK101은 전혀 나타나지 않고, 소실되었다. 또 전이된 $Km^r$ plasmid의 크기는 AW와 FW의 수질에 따라 약간 변화되어 나타났다. 그러므로 DNA probe에 의한 Southern hybridization 방법은 수질환경에서 특정 유전자의 전이행방을 추적하는데 매우 유용하다고 판단된다.

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DNA/RNA Hybridization에 의한 흰쥐의 Transferrin mRNA 분포에 관한 연구 (Localization of Transferrin mRNA in Rat by DNA/RNA Hybridization)

  • 김세은;김선여;박미정;송진호;이은방;이흔파;김영중
    • 약학회지
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    • 제33권5호
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    • pp.300-307
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    • 1989
  • Expression of transferrin gene in various organs of rat was studied using rat transferrin cDNA. The hybridization method of $[^{35}S]-labeled$ transferrin cDNA with transferrin mRNA in cytoplasmic preparations was used to measure the level of transferrin mRNA. The rat from 15-day old fetus to 21-day old postnatal were employed as an animal model. In the liver, the level of transferrin mRNA increased with increasing age. However, the level of transferrin mRNA in brain was significantly lower than that in liver and the level did not increase with age.

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