• 한국식품과학회지
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• 제3권1호
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• pp.1-5
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• 1971

1. 5% 밀기울 기본배지에다 inducer로서 CMC 혹은 Avicel을 첨가하여 Myriococcum albomyces를 접종하여 진탕배양할 때의 cellulase 유도 생성을 검토하였다. 2. DEAE-Sephadex A-25 column chromatography 법으로 배양액에서 cellulase 활성이 다른 3개의 부분, fraction I, fraction II 와 fraction III를 분리하였다. 3. Inducer로서 CMC첨가의 경우는 CMCase가 강해지고 반대로 Avicel을 가한 경우는 Avicelase가 강하였다.

• 한국동물학회지
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• 제31권4호
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• pp.300-308
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• 1988

Human placental alkaline phosphatase (PLAP), one of the oncofetal antigen was purified from placentas through the procedures including butanol extraction, concanavalin A-Sephar-ose, DEAE-cellulose and Sephadex G-200 gel chromatography. Monoclonal antibodies (fibs) against human PMP were produced by hybridizing SP 210-Ag 14 mouse myeloma cells with spleen ceils of Balblc mice immunized with PLAP. Six stable monoclones uvere obtained by cloning tuvice in serial dilutions, and the monoclonal speclfidty of these MAbs was confirmed by biochemical and immunonogical criteria. Tumor marker의 하나인 태반형 alkaline phosphatase(PLAP)에 대한 단일 클론항체의 생산과 분석을 위하여, 태반조직을 재료로 butanol 추출법 및 concanavaline A-Sepharose, DEAE-cellulose, Sephadex G-200 gel 크로마토그라피법에 의하여 PLAP를 순수 분리하였다. 이를 항원으로 하여 하이브리도마 방법에 의해 항-PLAP 단일 클론항체를 생산 분비하는 안정된 6클론세포를 얻었으며 생화학적 및 면역학적 분석방법으로 이들의 단일 클론성을 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제15권6호
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• pp.420-424
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• 1987

Saccharomycopsis lipolytica ATCC 44601 과 MX9-11RX8 온도감수성 변이균주의 isocitrate lyase는 조추출액을 ammonium sulfate 분획, Toyo Peal HW-55F gel filtration, DEAE-Cellulose ion exchange chromatography 등의 방법에 의하여 각각 54배, 87배 분리 정제되었다. 정제효소의 subunit 분자량은 59,000이고 Sephadex G-200 gel filtration에 의한 native enzyme 은 230,000이므로 이 효모의 isocitrate lyase는 같거나 비슷한 subunit 4개로 구성된 tetramer이며, 최적 pH는 6.9이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권5호
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• pp.413-419
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• 1998

Acetaminophen 자화성 Pseudomonas sp.에 존재하는 aryl acylamidase[EC 3.5.1.13]는 ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephacel anion exchange chromatography, Phenyl-Sepharose CL-4B hydrophobic interaction chroamtography 및 Sephadex G-100 gel-permeation chromatography를 통해 순수 정제되었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE상에서 분자량을 측정한 결과 56 kDa, Sephadex G-100 gel-permeation chromatography로 측정한 결과 57 kDa이었으며, 따라서 단일한 subunit로 구성된 효소이었다. 정제된 효소의 최대 활성을 위한 pH와 온도는 각각 pH 10.5와 4$0^{\circ}C$이였다. 5$0^{\circ}C$에서 30분간 처리시 34%의 잔존활성을 나타내었다. Acetaminophen과 4'-nitroacetanilide쉐 대한 Km값은 각각 0.10 mM과 0.11 mM 이었다.

• BMB Reports
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• 제35권6호
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• pp.576-582
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• 2002

Collagenase from the internal organs of a mackerel was purified using acetone precipitation, ion-exchange chromatography on a DEAE-Sephadex A-50, gel filtration chromatography on a Sephadex G-100, ion-exchange chromatography on DEAE-Sephacel, and gel filtration chromatography on a Sephadex G-75 column. The molecular mass of the purified enzyme was estimated to be 14.8 kDa by gel filtration and SDS-PAGE. The purification and yield were 39.5-fold and 0.1% when compared to those in the starting-crude extract. The optimum pH and temperature for the enzyme activity were around pH 7.5 and $55^{\circ}C$, respectively. The $K_m$ and $V_{max}$ of the enzyme for collagen Type I were approximately 1.1 mM and 2,343 U, respectively. The purified enzyme was strongly inhibited by $Hg^{2+}$, $Zn^{2+}$, PMSF, TLCK, and the soybean-trypsin inhibitor.

• 한국균학회지
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• 제11권1호
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• pp.23-26
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• 1983

Aspergillus ustus의 dextranase을 정제하기 위하여 냉각 Aceton에 침전시키고, DEAE-cellulose, Bio-Gel P-150 및 Sephadex G-200을 사용하며 순수정제하였다. 처음 배양액 10l에 대한 총 효소량은 1,340kunits 단백질 양은 38,500mg였으며, 최종정제 단계인 Sephadex G-200에서는 총 효소 활성량은 421 kunits, 단백질량은 172mg이었으며 비활성은 약 70배로 증가했다.

• 미생물학회지
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• 제26권4호
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• pp.324-331
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• 1988

Pleuratus ostreatus로부터 ascorbate oxidizing enzyme을 황산암모늄 침전, preparative polyacrylamide gel 전기영동, DEAE Sepharose CL-6B 이온교환크로마토그라피, Sephadex G-150 gel 여과크로마토그라피의 단계를 거쳐 순수분리 하였다. 이 효소의 분자량은 gel 여과크로마토그라피에 의하여 140,000 정도로, 효소의 소단위 분자량은 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에 의하여 66,000 정도로 추정되었다. Isoelectric focusing에 의하여 이 효소는 6.0의 등전점을 갖는 것으로 밝혀졌고, 최적반응온도는 $85^{\circ}C$ 정도, 최적반응 pH는 5.2 정도인 것으로 나타났다. 본 효소는 L-ascorbic acid와 D-isoascorbic acid에 대하여 동일한 친화도를 갖는 것으로 보이며, Km값은 두가지 기질에 대해 모두 2.2µM 이였다.

• 한국동물학회지
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• 제29권2호
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• pp.141-158
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• 1986

흰쥐를 실험재료로 그 적혈구에서 glutathione peroxidase를 $(NH_4)_2SO_4$ 침전법, Sephadex filtration column, DEAE-sephadex column chromatogrgphy하여 순화시키고 이것의 성질을 연구하였으며, 간에서 이 효소의 작용부위를 조직화학적 처리를 하여 전자현미경으로 관찰한 결과는 다음과 같다. 1. Glutathione peroxidase는 약 33.5배 순화되었다. 2. Crude glutathione peroxidase의 최적온도는 $40^\\circC$이며, 반응 최적 pH는 7.5였다. 3. 이 효소는 $30^\\circC$에서 가장 안정되었으며 glutathione농도 변화에 대한 Km값은 8.5 mM, 최대 반응속도는 15.6 $\\mu$moles/min이었고, $H_2O_2$ 농도변화에 대한 Km값은 40 $\\mu$M이며, 최대 반응속도는 10.5 $\\mu$moles/min이었다. 4. 이 효소의 분자량은 약 90,000정도로 측정되었다. 5. 쥐의 간에서 이 효소의 활성부위는 microbody에 국한되며 간소염의 주변주에서 그 활성이 크게 나타났다. 6. 조직화학적 방법으로 나타난 반응산물은 직경 $2.0\\sim0.7 \\mum$ 정도의 원형으로 그 경계막은 뚜렷하지 않았다.

• 한국식품과학회지
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• 제33권1호
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• pp.117-121
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• 2001

Phaseolus vulgaris을 분쇄한 후 ethanol 70% 및 80% 포화도에서 침전을 행하고 그 침전물을 다시 ammonium sulfate로 재침전한 후, DEAE-Sephadex ion exchange chromatography 및 Sephadex G-100 gel의 chromatography를 행하여 활성을 보인 fraction I-1-f와 I-2-f를 분획하였다. 그 결과 분리된 I-1-f의 총 단백질량은 12.0 mg/L, 총 활성은 2784 unit/L, 비활성은 232 unit/mg이였으며 정제도는 15.0배 증가하였고 수율은 5.56%이였다. 또한 I-2-f의 총 단백질량은 14.0 mg/L, 총 활성은 3210 units/L, 비활성은 229.28 units/mg protein이였으며, 정제도는 14.8배 증가하였으며 수율은 6.4%이였다. 또한 polyacrylamide gel electrophoresis를 행한 결과 단백질 band가 각각 하나로 확인되어 각각 단일 성분으로 판단되었다. 정제 ${\alpha}-amylase$ 저해제 I-1-f와 I-2-f의 분자량은 gel filtration과 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis를 행한 결과 50,000과 45,000이었다. 또한 구성성분의 함량을 측정한 결과 각각 $17.6{\sim}17%$의 당과 $79{\sim}80%$의 단백질로 구성되어 있으며 당은 glucose : xylose : mannose : N-acetylglucosamine의 함량이 5 : 3 : 50 : 42의 구성성분을 갖고 있음을 확인하였다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제38권6호
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• pp.801-806
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• 2009

본 연구는 transglutaminase 생산능이 우수한 토양유래방선균 strain YK-2를 TGase 최적생산배지에서 $28^{\circ}C$, 5일간 배양하여 얻은 배양여액으로 본 효소의 정제 및 정제된 효소의 효소화학적 특성에 관하여 검토한 것이다. 본 효소의 정제는 50% methanol precipitation, DEAE-Sephadex column chromatography의 정제 절차를 거쳐 56.5%의 수율로 정제되었고, 정제된 효소의 순도는 12.5% SDS-PAGE에서 단일 밴드를 나타내어, 서브유닛트의 분자량이 약 45,000 dalton으로 추정되는 호모형 효소인 것을 알 수 있었다. 정제된 TGase의 생화학적 제 특성을 검토한 결과, 등전점은 pH $6.0{\sim}7.0$ 부근에 있는 것으로 나타났으며, 본 효소의 기질인 CBZ-L-Gln-Gly 농도에 대한 Km치는 18.5 mM으로 추산되었다. 또한 금속이온 및 저해제의 영향으로는 $Hg^{++}$에 의해서 본 효소의 활성이 강하게 저해되었으나, DTT 및 mercaptoethanol에 의해 각각 293% 및 219% 활성이 증가하였다.