A UVmutant of Candida rugosa IF00750 was made and used to convert butYlic acid to D-$\beta$-hydroxybutyric acid(D-$\beta$-HBA). Major regulating factors for D-$\beta$-HBA fennentation were investigated via chemostat analyses. The maximum specific productivity was achieved at a specific growth rate of $0.06h^{-1}$ where the glucose and butyric acid concentrations in the fermentor were 10 g/L and 8.7 g/L. respectively. A fed-batch fennentation was performed with maintenance of the optimum glucose and butyric acid concentrations. The D-$\beta$-HBA concentration after 120 h of cultivation reached 12.4 g/L, which was 4.7 times greater illan the concentration obtained by batch fermentation.
Methylobacterium organophilum, a facultative methylotroph was cultivated on a methanol as a sole carbon and energy source. The cell growth was affected by the various components of minimal synthetic medium and the medium composition was optimized with 0.5% (v/v) methanol at pH 6.8 and at 3$0^{\circ}C$. The maximum specific growth rate of M. organophilum was achieved to 0.26 hr$^{-1}$ in the optimized medium which has following composition: Methanol, 0.5% (v/v):(NH$_4$)$_2$SO$_4$, 1.0g/l:KH$_2$PO$_4$, 2.13g/l:KH$_2$PO$_4$, 1.305g/ι:MgSO$_4$.7$H_2O$. 45g/l and trace elements (CaCl$_2$.2$H_2O$, 3.3mg:FeSO$_4$.7$H_2O$, 1.3mg:MnSO$_4$.4$H_2O$, 130$\mu\textrm{g}$:ZnSO$_4$.5$H_2O$, 40$\mu\textrm{g}$:Na$_2$MoO$_4$.2$H_2O$, 40$\mu\textrm{g}$:CoCl$_2$.6$H_2O$, 40$\mu\textrm{g}$:H$_3$BO$_3$, 30$\mu\textrm{g}$ per liter). By the limitation of nitrogen and deficiency of Mn$^{+2}$ or Fe$^{+2}$, the cell growth was significantly repressed. Methanol greatly repressed the cell growth and the complete inhibition was observed at concentration above 4% (v/v). In order to overcome the methanol inhibition and to prevent the methanol limitation, intermittent feeding of methanol was conducted by a D.O.-stat technique. PHB production by M. organophilum was stimulated by deficiency of nutrients such as NH$_{4}^{+}$, SO$_{4}^{-2}$, $Mg^{+2}$, $K^{+}$, or PO$_{4}^{-3}$ in the medium. The maximum PHB content was obtained as 58% of dry cell weight under deficiency of potassium ion in the optimized synthetic medium.
Objective: An experiment was conducted to investigate the effects of a specific mixture of essential oils (MEO), containing thyme, clove and cinnamon EO, on rumen microbial fermentation, nutrient apparent digestibility and blood metabolites in fistulated sheep. Methods: Six sheep fitted with ruminal fistulas were used in a repeated measurement design with two 24-d periods to investigate the effect of adding MEO at 0 (control), 0.8, and 1.6 mL/d on apparent nutrient digestibility, rumen fermentation characteristics, rumen microbial population and blood chemical metabolites. Animals were fed with a 50:50 alfalfa hay:concentrate diet. Results: Ruminal pH, total volatile fatty acids (VFA) concentration, molar proportion of individual VFA, acetate: propionate ratio and methane production were not affected with MEO. Relative to the control, Small peptides plus amino acid nitrogen and large peptides nitrogen concentration in rumen fluid were not affected with MEO supplementation; while, rumen fluid ammonia nitrogen concentration at 0 and 6 h after morning feeding in sheep fed with 1.6 mL/d of MEO was lower (p<0.05) compared to the control and 0.8 mL/d of MEO. At 0 h after morning feeding, ammonia nitrogen concentration was higher (p<0.05) in sheep fed 0.8 mL/d of MEO relative to 1.6 mL/d and control diet. Ruminal protozoa and hyper ammonia producing (HAP) bacteria counts were not affected by addition of MEO in the diet. Relative to the control, no changes were observed in the red and white blood cells, hemoglobin, hematocrit, glucose, beta-hydroxybutyric acid, cholesterol, total protein, albumin, blood urea nitrogen and aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase concentration. Apparent total tract digestibility of dry matter, crude proten, organic matter, and neutral detergent fiber were not influenced by MEO supplementation. Conclusion:The results of the present study suggested that supplementation of MEO may have limited effects on apparent nutrient digestibility, ruminal fermentation and protozoa and HAP bacteria count, blood cells and metabolites.
Objective: An experiment was conducted to investigate the effects of feed intake restriction during late pregnancy on the function, anti-oxidation capability and acute phase protein synthesis of ovine liver. Methods: Eighteen time-mated ewes with singleton fetuses were allocated to three groups: restricted group 1 (RG1, 0.18 MJ ME/kg $W^{0.75}$ d, n = 6), restricted group 2 (RG2, 0.33 MJ ME/kg $W^{0.75}$ d), n = 6) and a control group (CG, ad libitum, 0.67 MJ ME/kg $W^{0.75}$ d, n = 6). The feed restriction period was from 90 days to 140 days of pregnancy. Results: The ewe's body weight, liver weights, water, and protein content of liver in the restricted groups were reduced compared with the CG group (p<0.05), but the liver fat contents in the RG1 group were higher than those of the CG group (p<0.05). The increased hepatic collagen fibers and reticular fibers were observed in the restricted groups with the reduction of energy intake. The concentrations of nonesterified free fatty acids in the RG1 and RG2 groups were higher than those of the CG group with the reduction of energy intake (p<0.05), but there were decreased concentrations of lipoprotein lipase and hepatic lipase in both restricted groups compared with the CG group (p<0.05). In addition, the increased concentrations of ${\beta}$-hydroxybutyric acid, triglycerides, malondialdehyde, total antioxidant capacity and activities of superoxide dismutase activity and catalase were found in the RG1 group, and the concentrations of cholinesterase in the RG1 group were reduced compared with the CG group (p<0.05). For the concentrations of acute phase proteins, the C-reactive protein (CRP) in the RG1 group were reduced compared with the CG group, but there were no differences in haptoglobin relative to the controls (p>0.05). Conclusion: The fat accumulation, increased hepatic fibrosis, antioxidant imbalance and modified synthesis of acute phase proteins were induced in ewe's liver by maternal malnutrition during late pregnancy, which were detrimental for liver function to accommodate pregnancy.
The effects of ratios of initial concentration of carbon source to the initial concentration of nitrogen source in the fermentation media on both the yields of PHB fermentation variables and the accumulation of poly-${\beta}$-hydroxybutyric acid(PHB) were investigated. The fermentation media were composed of the combination of varing glucose concentrations, 10, 20, 25, 30, 40, $50g/\ell$ and the NH4Cl concentrations 0.33, 0.4, 0.5, 1.5, 3, $5g/\ell$. The yield of biomass on glucos, Yx/s, decreased very slowly according to the increase of the ratio of C to N. And the yield became constant at 0.35(g biomass/g glucose) with the ratio higher than 70. The yield of residual biomass, Yx/s, also decreased with the ratio of C to N and finally showed a constant value of 0.065(g residual biomass/g glucose) when the ratio was higher than 65. In accordance with the augmentation of the ratio, the yield of PHB, YPHB/S, however, increased and showed the maximum value of 0.35 (g PHB/g glucose) between 40 and 60 of the ratio. The maximum yield of PHB to the change of biomass, YPHB/S, was 0.87(g PHB/g biomass), and the yie1d YPHB/RX, was 4.2(g PHB/g residual biomass). The maximum accumulation percent of PHB to the final biomass was 81% when the ratio was higher than 67.
An obligately methylotrophic bacterium which produces extracellular polysaccharide (EPS) was isolated through methanol-enrichment culture technique. The isolate was aerobic, nonmotile, and gram negative rod and exibited catalase, but no oxidase, activity. Plasmid, carotenoid, and poly-${\beta}$-hydroxybutyric acid were not found. The guanine plus cytosine content of DNA was 52-56%. The isolate was found to grow only on methanol and monomethylamine. Growth was optimal ($t_d=2.4h$) at $35^{\circ}C$ and pH 6.5 in a mineral medium containing 0.5% (v/v) methanol, 25 mM phosphate, and 0.212% ammonium sulfate. Methanol was assimilated through the ribulose monophosphate pathway. Maximun amount of EPS was produced in cells growing at the mid-stationary growth phase at $30^{\circ}C$ in a mineral medium (PH 6.5) containing 1.0% (v/v) methanol in the CIN ratio of 54.7. Thin-layer chromatographic and high performance liquid chromatographic analysis revealed that the EPS was composed of glucose and galactose. EPS which was not treated with ethanol (Pbe) exhibited stable viscosity under various concentrations of salts and temperatures hut showed high viscosity at low pH. EPS precipitated with ethanol (Pae) was found to be more stable in viscosity than the Pbe at various salt concentrations, temperatures, and pH. The Pae also exhibited higher viscosity than the Pbe and xanthan gum. Scanning electron microscopy revealed that the lyophilized Pbe and Pae have a multi-layered structure and a structure of thick fibers, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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