본 연구에서는 berberine이 전염증성사이토카인의 생성에 미치는 효과를 관찰하기 위하여 TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, 그리고 IL-6생성을 정량하였다. 마우스 비장세포에 berberine을 작용시켰을 때 TNF-$\alpha$의 생성이 억제되었다. 또한 마우스 생체 내에서 LPS에 의한 TNF-$\alpha$의 상승이 berberine에 의해서 억제됨을 알 수 있었다. IL-$1{\beta}$의 생성에 있어서도 berberine을 고농도(3.0 ${\mu}g/ml$)로 작용시켰을 때 억제되었고 LPS에 의한 IL-$1{\beta}$의 상승이 고농도의 berberine에 의해서 억제되었다. IL-6의 생성은 berberine에 의해서 억제되었으며 낮은 berberine 농도(0.3 ${\mu}g/ml$)에서 LPS에 의한IL-6의 생성이 억제되었다. 따라서 이러한 결과들은 berberine이 TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, 그리고 IL-6와 같은 전염증성사이토카인의 생성을 하향 조절할 가능성을 시사한다 하겠다.
A large number of factors such as osteotropic hormones, cytokines, or growth factors are related to the bone remodeling which is characterized by the coupling of osteoclast-mediated bone resorption and osteoblast-mediated bone formation. Recent investigations have indicated that cytokines such as $interleukin-1{\beta}\;(IL-1{\beta})$ and tumor necrosis $factor-{\alpha}\;(TNF-{\alpha})$ play a potential role in the bone resorption associated with a variety of pathological conditions such as inflammatory osteolytic disease. Collagen is the most abundant protein of the extracellular matrix of bone, and the participation of collagenase in bone resorption has been widely investigated. In this study, effects of $IL-1{\beta}$ and $TNF-{\alpha}$ on the release of collagenase from osteoblastic cells were measured. The gelatinase activity was also measured by gel substrate analysis (zymography) after electrophoresis of conditioned media of osteoblastic cell culture. $IL-1{\beta}$ increased the collagenase activity in ROS17/2.8 and HOS cell culture. $TNF-{\alpha}$ also increased the collagenase activity of osteoblastic cells. When two kinds of cytokines were treated simultaneously in the culture of osteoblastic cells, synergistic increase of collagenase activity was seen in ROS17/2.8 cells. $IL-1{\beta}$ and $TNF-{\alpha}$ significantly increased the collagenase activity after 6 hour treatment in the osteoblastic cell culture, and there was no additional increase according to the culture period. Osteoblastic cells released the gelatinase and molecular weight of this enzyme was measured about 70 KDa as assessed by zymogram. $IL-1{\beta}$ and $TNF-{\alpha}$ showed increase of the gelatinase activity produced by ROS17/2.8 and HOS cells. Taken together, this study suggested that $IL-1{\beta}$ and $TNF-{\alpha}$ can modulate bone metabolism, at least in part, by increased release of collagenase and gelatinase from osteoblasts.
To investigate the capacity of anti-inflammatory cytokines and biological response modifiers (BRMs) to induce IL-$1{\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$ gene overexpression from mouse macrophages, we isolated the resident peritoneal macrophages from BALB/c mouse (8 week old) and incubated for 6 h with lipopolysaccaride (LPS) and Moschus moschiferus (MOMS) extracts. Analysis of inflammatory cytokines gene expression was carried out by RT-PCR amplification. Amplified PCR products were electrophoresed on 1.2% agarose gel, and the analysis (Ht) was used to 1D-density program. 1. LPS and MOMS extract treatments resulted in a significant decrease in IL-$1{\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$ mRNA expression level compared with the LPS treatment. 2. Among four sample of MOMS, Inhibitory effects of MOMS-A and MOMS-D for inflammatory cytokines gene expression were to be fine compared with the MOMS-Band MOMS-C. According to the above data, Because the anti- tumoral and anti-inflammatory response activities of macrophage are known to be dependent on the production of inflammatory cytokines (IL-$1{\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$) by macrophages, we suggest that evaluations of BRM for the reduction of inflammatory cytokines production by macrophages are important for clinical application.
연구배경: 유리규산(silica) 자극에 의해 폐장내 대식세포에서 형성되는 proinflammatory cytokines인 IL-1$\beta$, IL-6, TNF-$\alpha$와 fibrogenic cytokine인 TGF-$\beta$, PDGF는 섬유화 과정에 매우 중요한 역할을 한다. 그러나 이러한 cytokine 의 역할과 상호관련성에 대해서는 아직 확실히 밝혀진 바없다. 본 연구는 Balb/C mouse의 폐장단구세포를 silica로 자극시 형성되는 IL-6, TNF-$\alpha$ 폐섬유화의 발생과 유지에 중요한 역할을 할 것으로 기대되는 TGF-$\beta$ 의 생성을 관찰하고 TGF-$\beta$의 생성에 proinflammatory cytokine이 미치는 영향에 대해서 알아보고자 하였다. 방 법: Balb/C 의 폐장대식세포를 silica로 자극한 후 IL-6, TNF-$\alpha$ TGF-$\beta$의 양을 bioassay로 측정하였고 mRNA의 발현을 in situ hybridization을 통해 관찰하였으며, 대식세포의 TGF-$\beta$ 생성에 대한 IL-1$\beta$, IL-6, TNF-$\alpha$의 영향을 알기 위하여 L-1, IL-6, TNF-$\alpha$에 대한 중화항체를 이용하여 대식세포의 TGF-$\beta$의 생성 억제 유, 무를 관찰하였다. 결 과: Silica로 대식세포자극시 TNF-$\alpha$는 초기 4 시간째 최고의 생성능을 보였으며, IL-6 는 silica 0.2 ${\mu}g/ml$의 농도에서 배양 8 시간째 생성능이 가장 높았고 배양 12 시간째는 다시 감소하였다가 24시간째 증가하는 biphasic한 소견을 보여 주었다. TGF-$\beta$는 silica의 양과 관계없이 배양 24시간째 자연생성능뿐 아니라, silica로 자극시에도 증가되었다. Silica와 TNF-$\alpha$ 50ng/ml을 함께 자극시 TGF-$\beta$의 생성은 현저히 증가되었으며, TNF-$\alpha$ 50 ng/ml과 IL-6 50 ng/ml으로 동시 자극시에는 TNF-$\alpha$에 의한 TGF-$\beta$의 형성이 증가하는 경향을 보였다. TNF-$\alpha$의 중화항체를 전처치 후 silica 자극시 TGF-$\beta$의 생성능을 억제시킴을 관찰할 수 있었다. Anti-IL-$\beta$, anti-IL-6, anti-TNF-$\alpha$ antibody 모두를 통시에 투여하였을 때도 silica에 의한 TGF-$\beta$의 생성능을 억제시킴을 관찰할 수 있었다. Silica 자극 후 대식세포의 in situ hybridization에서 TNF-$\alpha$ mRNA는 2시간째부터 발현되었고 IL-6 mRNA는 4 시간째부터 발현된 후 8 시간째 소실되었고 TGF-mRNA는 12 시간째 가장 강한 발현을 보였다. 결 론: Silica 자극에 의해 폐장대식세포는 자극 초기에는 TNF-$\alpha$가 가장먼저 형성되고 후기에 TGF-$\beta$가 형성되며 TNF-$\alpha$가 TGF-$\beta$ 형성에 중요한 역할을 할 것으로 사료되었다.
T. gonnii의 Beverley주를 감염시킨 마우스(감염군)로부터 분리한 복강대식세포에 cytokine의 종류 및 농도에 따른 대식세포의 활성화 정도를 평가하기 위하여 복강대식세포 단세포층에 medium, 조제 Iymphokine, 재조합 tumornecrosis $factor-{\alpha}{\;}(TNF-{\alpha})$. 재조합 $interferon-{\gamma}{\;}(IFN-{\gamma})$, 및 재조합 $IFN-{\gamma}와{\;}TNF-{\alpha}$를 함께($IFN-{\gamma}/TNF-{\alpha}$) 처치한 후, 각 처치군별 $H_2O_2{\;}생산량,{\;}NO2^{-}$ 생산량 및 T. gondii의 대식세포내 침투억제능을 측정하였다. 감염군의 복강대식세포에 $IFN-{\gamma}{\;}처치시{\;}NO2^{-}$ 생산량은 농도에 따라 유의하게 증가하였으나 그외의 처치군에서는 농도에 따른 유의한 차이가 없었다. 감염군 대식세포에 $IFN-{\gamma}나{\;}IFN-{\gamma}/TNF-{\alpha}$ 처치시 $H_2O_2$ 생산량이 medium처치군보다 유의하게 증가하였으며. $NO2^{-}$ 생산량은 $TNF-{\alpha},{\;}IFN-{\gamma}나{\;}IFN-{\gamma}/TNF-{\alpha}$ 처치시 유의하게 증가하였다. 감염군에 cytokine 처치시 T. gondii의 대식세포내 침투억제능은 medium 처치시보다 모두 증가되었다 또한 정상군과 감염군의 $H_2O_2$ 생산량, $NO2^{-}$ 생산량 및 T. gondii의 대식세포내 침투억제능을 상호 비교시 $IFN-{\gamma}$ 처치군은 유의한 차이를 나타냈으나 그 외의 cytokine 처치군에서는 유의한 차이를 나타내지 않았다. 이상의 성적으로 보아 $IFN-{\gamma}$가 Toxoplosma감염 마우스 복강대식세포의 활성화에도 중요한 역할을 함을 알 수 있었다.
Objectives : The purpose of this study was to investigate the effects of Angelicae acutilobae Radix Water Extract (AA) on the production of cytokines in RAW 264.7 cell stimulated with lipopolysaccharide (LPS). Method : RAW 264.7 cells were cotreated with AA (50 and $100{\mu}g/mL$) and lipopolysaccharide (LPS; $1{\mu}g/mL$) for 24 hours. After 24 hours treatment, using bead-based multiplex cytokine assay, concentrations of various cytokines such as interleukin(IL)-6, tumor necrosis factor-alpha(TNF-${\alpha}$) granulocyte colony-stimulating factor(G-CSF), granulocyte macrophage colony-stimulating factor(GM-CSF), and macrophage inflammatory protein(MIP)-$1{\alpha}$ were measured. Result : AA significantly inhibited LPS-induced production of IL-6 and MIP-$1{\alpha}$ from LPS-stimulated RAW 264.7 cells at the concentration of $50{\mu}g/mL$. AA significantly inhibited LPS-induced production of TNF-${\alpha}$ from LPS-stimulated RAW 264.7 cells at the concentration of $100{\mu}g/mL$. AA significantly inhibited LPS-induced production of G-CSF and GM-CSF in RAW 264.7 cells at the concentrations of 50 and $100{\mu}g/mL$. Conclusion : These results suggest that AA has anti-inflammatory effect related with its inhibition of proinflammatory cytokines such as IL-6, TNF-${\alpha}$, G-CSF, GM-CSF, and MIP-$1{\alpha}$ in LPS-induced macrophages.
Omega-3, a polyunsaturated fatty acid, is an essential fatty acid necessary for human health, and it protects against cardiovascular disease, inflammation, autoimmune diseases, and cancer. In the present study, we investigated the effects of omega-3-rich harp seal oil (HSO) on the production of nitric oxide (NO) and cytokines, such as tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$, interleukin-(IL)-$1{\beta}$, IL-6, and IL-12/IL-23 (p40) in peritoneal macrophages of mice. The culture supernatants of murine macrophages exposed to lipopolysaccharide (LPS), HSO, or HSO+LPS were harvested to assay IL-$1{\beta}$, TNF-${\alpha}$, IL-6, and IL-12/IL-23 (p40) cytokines and NO. TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, and IL-12/IL-23 (p40) levels, except IL-6, were lower in the culture supernatants of mouse peritoneal macrophages exposed to LPS plus HSO than those of the groups exposed to LPS alone. These observations demonstrate that omega-3-rich harp seal oil downregulates the production of the pro-inflammatory cytokines such as IL-$1{\beta}$, TNF-${\alpha}$, and IL-12/IL-23 (p40). These results suggest that HSO could be potentially used as a preventive agent or as an adjunct in anti-inflammatory therapy, if more research results were accumulated.
본 연구는 프랑킨센스를 이용하여 전염증성 사이토카인의 분비 억제 효과를 입증하고자한다. 이에 LPS를 처리한 마우스의 대식세포를 이용하여 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$와 같은 전염증성 사이토카인의 분비 변화를 살펴보기 위해 다자인하였다. 세포에 대한 독성 실험은 MTS인 CellTiter 96 AQueous One solution cell proliferation 시약을 이용하여 실시하였으며 전염증성 사이토카인의 분비는 ELISA kit을 사용하여 측정하였다. 그 결과 프랑킨센스는 10ug/ml-1000ug/ml에서 세포독성이 없었으며 전염증성 사이토카인인 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$생성을 유의성있게 억제시켰다. 전염증성 사이토카인의 분비 억제효과는 프랑킨센스의 항 염성을 입증하기 위한 기초적인 생리 활성 자료와 기능성 소재로 다양한 융합적인 활용이 가능하다고 사료된다.
Objectives: Various cytokines induced by inhalation of coal dust may mediate inflammation and lead to tissue damage or fibrosis, such as coal workers' pneumoconiosis (CWP). Methods: To investigate the relevance of serum cytokines in CWP, the levels of serum interleukin-8 (IL-8) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-${\alpha}$) as CWP biomarkers in 110 retired coal miners (22 controls and 88 CWP subjects) were related to cross sectional findings and 1-year progressive changes of the pneumoconiosis. Progressive changes of CWP were evaluated by paired comparison of chest radiographs. Analysis by a receiver operating characteristic curve assessed the biomarker potential of each cytokine. Results: The mean serum IL-8 level was significantly higher in CWP compared to controls and IL-8 levels correlated with the degree of CWP. The median serum TNF-${\alpha}$ level was significantly higher in subjects with progressive CWP compared to subjects without CWP progression. The area under the ROC curve for IL-8 (0.70) and TNF-${\alpha}$ (0.72) for CWP identification and progression, respectively, indicated the biomarker potential of the two cytokines. Serum cutoff values of IL-8 and TNF-${\alpha}$ were 11.63 pg/mL(sensitivity, 69%; specificity, 64%) and 4.52 pg/mL (sensitivity, 67%; specificity, 79%), respectively. Conclusion: The results suggest that high levels of serum IL-8 are associated with the presence of CWP and those of serum TNF-${\alpha}$ are associated with the progression of CWP.
The focus of this study was to clarify the relation between the nitric oxide (NO) production and cytokine expression including tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF) and interleukin-6 (IL-6), and also investigated the effect of G-NANA (N-acylneuraminic acid isolates from glycomacropeptide) or S-NANA (Synthetic N-acylneuraminic acid) on LPS stimuli from RAW264.7 cell. The NANA is the predominant sialic acid found in mammalian cells and G-NANA is isolation of GMP (GMP is a valuable bioactive peptide with a varying degree of glycosylation including sialic acid). The lipopolysaccharide (LPS) of Gram-negative bacteria induces the expression of cytokines and potent inducers of inflammatory cytokines such as TNF-${\alpha}$ and IL-6. In this experiment, upon stimulation with increasing concentrations of chitosan, the LPS-stimulated TNF-${\alpha}$ and IL-6 secretion was significantly recovered with in the incubation media of RAW264.7 cells. Consistently, RT-PCR with mRNA and immunoblot analysis with anti-cytokine antiserum including TNF-${\alpha}$ and IL-6 showed that the amount of TNF-${\alpha}$ and IL-6 secretion in the incubation media recovered with the concentration of chitosan. The LPS-stimulated NO secretion was significantly recovered with in the 6 and 12 h incubation media of RAW264.7 cells, too. The recovery effect of G-NANA on IL-6 and NO secretion may be induced via the stimulus of TNF-${\alpha}$ in RAW264.7 cell. These results once again suggest that G-NANA may have the anti-inflammatory effect via the stimulus of TNF-${\alpha}$ in the LPS-stimulated inflammation in RAW264.7 cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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