목적: Candida albicans는 면역력이 약한 환자에게서 점액질환을 야기하며, 의치성 구내염과 밀접하게 관련되어 있다. 전기 분해 수소수는 금속 전극을 통해서 전기를 흘려 전기분해 한 물이며, 구강세균에 대해서 항균효과를 보였다. 본 연구에서는 칸디다 바이오필름에 대한 전기 분해 수소수의 항진균효과를 조사하였다. 연구 재료 및 방법: C. albicans는 발아세포 및 균사형태를 형성시키기 위해서 사부로포도당 액체배지 및 F-12 영양 배지를 이용하여 호기상태 및 5% 이산화탄소 환경에서 각각 배양하였다. 여러 금속 전극을 이용하여 수돗물을 전기분해 한후에 발아세포 형태와 균사형태의 칸디다를 전기분해 수소수로 처리하였다. 결과: 사부로포도당배지와 F-12 영양배지를 이용하여 칸디다를 배양하였을 때, 각각 발아세포 형태와 균사 형태를 보였다. 전기 분해 수소수는 발아세포 형태의 C. albicans에 대해서 항진균 효과를 보였다. 또한 칸디다 바이오필름에 대해서도 항진균 효과를 보였다. 여러 종류의 금속 전극을 이용한 전기분해 수소수중에 백금전극을 이용한 전기분해 수소수만 항진균 활성이 있는 것으로 나타났다. 결론: 백금 전기분해 수소수는 구강 칸디다증과 의치관련 구내염을 예방하기 위한 구강 청결제로 사용 가능 할 것이다.
Statement of problem: Streptococcus produces energy and forms extracellular polysaccharides by metabolizing sucrose. Insoluble glucan, a kind of extracellular polysaccharide, is the important material of dental plaque. Fructose affects the metabolism of sucrose. Purpose: The purpose of this study was to evaluate the effect of fructose on the metabolism of sucrose in Streptococcus mutans. Materials and methods: To determine the effect of fructose on the formation of artificial plaque by Streptococcus mutans Ingbritt, S. mutans and fructose were placed in beakers containing M17 broth and sucrose. The wires were hung on frameworks inserted into cork stoppers, and then immersed in each of the beakers. After the incubation with gentle shaking, each wire was weighed. To analyze the effect of fructose on the sucrose metabolism by S. mutans or glucosyltransferase, S. mutans and fructose were placed in M17 broth containing sucrose. After the incubation. the remaining sucrose and polymers were analysed by thin layer chromatography. Results: The following results were obtained; 1. When Streptococcus mutans was cultured in the media containing 3% sucrose for 8 hours, the mean weight of formed artificial plaque on the wires was $124.3{\pm}3.0mg$, whereas being reduced to $20.7{\pm}10.2mg$ in the media added with 3% sucrose and 4% fructose(p<0.05) 2. When the control containing glucose was added with sucrose, the optical density of Streptococcus mutans solution cultured for 24 hours was not increased compared with the control, while being increased by adding with fructose. 3. When Streptococcus mutans was incubated in the media added with sucrose and fructose for 8 hours, the number of viable cells was increased compared with the media added with sucrose. 4. The amount of remained sucrose was increased in Streptococcus mutans culture supernatant of media added with sucrose and fructose than with sucrose only. but the amount of produced insoluble glucan was decreased. 5. The amounts of remained sucrose and produced soluble glucan were increased in the culture of glucosyltransferase-contained media added with sucrose and fructose than with sucrose only, but the amount of produced insoluble glucan was decreased . Conclusion: These results indicated that the sucrose metabolism and the production of insoluble glucan were inhibited in Streptococcus mutans by adding fructose in the media containing sucrose.
본 연구에서는 생리활성물질을 생성하는 해양미생물을 분리하기 위하여 연근해역의 해면을 조사하였다. 해면 중의 미생물은 $1.2{\times}10{\sim}2.1{\times}10^3/g$ 범위에 있었고, 이들 중 방선균은 $0.01{\sim}0.5\%$(data 생략)로 나타났다. 분리된 미생물은 각각 배양하여 항균물질을 검토하였으며, 검토하던 중에 비교적 강한 항균물질을 생산하는 균주 No. 101을 분리, 선발하였다. 선발된 균의 특징은 sclerotia로 형태가 다양하였고, 다양한 배지에서 생육이 가능하였고, 기균사의 색깔은 회백색, 배면의 색깔은 주로 회백색에서 갈색으로 나타났으며, 젤라틴 액화능과 전분 분해능을 가지나 myo-inositol은 이용하지 못하였다. 이 균의 배양학적 특성은 최적 pH 및 온도가 $6.5{\sim}7.0$ 및 $30^{\circ}C$였으며, 탄소원으로는 starch가 30g/l, 질소원으로는 casamino acid 10g/l가 적합한 것으로 나타났다. 방선균 No. 101의 균체 및 균배양액의 추출물에 대한 항균 및 항진균성에서는 Staphylococcus aureus와 Bacillus subtilis에서 강한 항균력을, 효모와 곰팡이에 대하여는 낮은 항진균성을 나타내었다.
오이검은별무늬병균인 Cladosporium cucumerinum KACC 40576에 대하여 높은 항진균 활성을 나타내는 KMU-13은 Norway Lillehammer 근교 토양시료에서 분리하였으며, 형태학적, 배양 및 생화학적인 특성을 조사한 결과와 16S rDNA 염기서열을 분석한 결과, B. subtilis로 판단되었다. B. subtilis KMU-13의 항진균 물질의 생산을 위한 최적조건은 LB broth를 기본배지로 하여 탄소원으로 0.5% maltose와 질소원으로 0.5% bactopeptone을 첨가하였을 때 가장 높은 항진균 활성을 나타내었으며, 배양조건은 $30^{\circ}C$, 180rpm, 48시간이였고, 배양초기 pH는 6.0으로 조사되었다. TLC에서 Rf값이 0.64로 확인된 밴드에서만 항진균 활성을 가지는 것으로 조사되었으며 잿빛곰팡이병, 고추 탄저병, 참외 탄저병, 수박 등의 박과작물의 덩굴마름병, 토마토 시들음병, 글라디올러스 마른썩음병, 토마토 질병, 수박 덩굴쪼김병, 수박 질병, 사과나무 역병, 벼 잎집무늬마름병, 참외 줄기썩음병, 그리고 고추 균핵병에 대하여 양호한 항진균 활성을 나타내는 것으로 조사되었다.
덩굴마름병균인 Didymella bryoniae KACC 40669에 대하여 높은 항진균 활성을 나타내는 Brevibacillus sp. KMU-391은 Russia의 Sanktpeterburg 지역의 토양 시료로부터 분리하였다. Brevibacillus sp. KMU-391이 생산하는 항진균 물질은 D. bryoniae의 생육을 강하게 억제할 수 있었으며 TSB를 기본배지로 하여 탄소원으로 1.0% sucrose와 1.0%의 polypeptone을 첨가한 후 pH를 7.0으로 조정하여 $30^{\circ}C$에서 180 rpm으로 2일간 배양하였을 때 가장 높은 항진균 활성을 나타내었다. 배양액에 $30{\sim}60%$의 ammonium sulfate를 처리하여 Brevibacillus sp. KMU-391이 생산하는 항진균 물질을 회수한 후 D. bryoniae를 액체배양을 통한 항진균 활성을 조사한 결과 대조구와 비교하여 41%의 생육을 저해하는 것으로 확인되었다. 또한 butanol을 이용하여 항잔균 물질을 회수한 후, 다양한 작물병원성 곰팡이를 대상으로 항진균 활성 spectrum을 조사한 결과 조사, 장미 잿빛곰팡이병, 잠두 붉은점무늬병, 고추 탄저병, 참외 탄저병, 수박 등의 박과작물의 덩굴마름병, 보리 질병, 토마토 시들음병, 글라디올러스 마른썩음병, 토마토 질병, 수박 덩굴쪼김병, 수박 질병, 사과나무 역병, 벼 잎집무늬마름병, 참외 줄기썩음병, 그리고 고추균핵병에 대하여 높은 항진균 활성을 나타내었다. 이러한 결과를 바탕으로 Brevibacillus sp. KMU-391을 이용하여 작물병원성 곰팡이에 대한 생물농약으로서의 응용 가능성을 확인 할 수 있었다.
The type II secretion system (T2SS), which transports selected periplasmic proteins across the outer membrane, has rarely been studied in nonpathogens or in organisms classified as Betaproteobacteria. Therefore, we studied Cupriavidus metallidurans (Cme), a facultative chemilithoautotroph. Gel analysis of extracellular proteins revealed no remarkable differences between the wild type and the T2SS mutants. However, enzyme assays revealed that native extracellular alkaline phosphatase is a T2SS substrate, because activity was 10-fold greater for the wild type than a T2SS mutant. In Cme engineered to produce three Ralstonia solanacearum (Rso) exoenzymes, at least 95% of their total activities were extracellular, but unexpectedly high percentages of these exoenzymes remained extracellular in T2SS mutants cultured in rich broth. These conditions appear to permit an alternative secretion process, because neither cell lysis nor periplasmic leakage was observed when Cme produced a Pectobacterium carotovorum exoenzyme, and wild-type Cme cultured in minimal medium secreted 98% of Rso polygalacturonase, but 92% of this exoenzyme remained intracellular in T2SS mutants. We concluded that Cme has a functional T2SS despite lacking any abundant native T2SS substrates. The efficient secretion of three foreign exoenzymes by Cme is remarkable, but so too is the indication of an alternative secretion process in rich culture conditions. When not transiting the T2SS, we suggest that Rso exoenzymes are probably selectively packaged into outer membrane vesicles. Phylogenetic analysis of T2SS proteins supports the existence of at least three T2SS subfamilies, and we propose that Cme, as a representative of the Betaproteobacteria, could become a new useful model system for studying T2SS substrate specificity.
한국 재래종 오골계(천연기념물 265호)의 난백으로부터 직접결정법에 의하여 lysozyme을 분리하였다. 분리된 1 % lysozyme의 Staphylococcus aureus 57, Bacillus subtilis ATCC 6633과 Escherichia coli NIHJ-JC2에 대한 항균력을 육즙 배지 속에서 lysozyme 단독으로, 또는 몇 개의 항균성 물질들과 조합하여 배양한 후 측정하였다. 그 결과, 1% lysozyme은 공시된 모든 세균에 대하여 뚜렷한 세균의 증식억제효과(약 $12{\sim}16%$를 나타내었고, 항균성 물질들과 조합하여 측정한 증식억제상의 상승효과는 S. aureus에 대해서는 0.001% magnolol과 0.001% honokiol과의 조합에서 높았고(각각 22%와 14%), E. coli에 대해서는 0.0005% erythromycin, honokiol, magnolol 그리고 phospholipase(0.005%)의 순(각각 상승효과 26,22,17,6%)으로 나타났다. 그러나, B. subtilis에 대해서는 오직 erythromycin과의 조합에서만 상승효과가 관찰되었고, 그 수준(52%)도 매우 높았다.
PASSARINHA L. A.;DIOGO M. M.;QUEIROZ J. A.;MONTEIRO G. A.;FONSECA L. P.;PRAZERES D. M. F.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제16권1호
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pp.20-24
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2006
Plasmid DNA (pDNA) is a product of interest for many biopharmaceutical companies and research laboratories, because of increase in the number of gene therapy protocols that use nonviral vectors. This work was undertaken to study the effect of antibiotic and dissolved oxygen concentration (DOC) on the production of a ColE 1-type plasmid (pVAX1-LacZ) hosted in Escherichia coli $DH5\alpha$ and cultured in a batch fermentor with 0.751 of Terrific Broth. A decrease in the DOC from $60\%\;to\;5\%$ was shown to increase the specific pDNA concentration approximately 1.5-fold, due to the downregulation of growth. Additionally, this increase in the pDNA concentration led to a 2.2-fold increase in the purity of cell lysates obtained after cell lysis. However, the use of higher DOC led to 2.8-fold higher volumetric productivity as a consequence of a faster growth rate, reducing the fermentation time from 24 to 8 h. Interestingly, the specific pDNA concentration, and pDNA productivity and purity were always higher $(10-15\%)$ in the absence of antibiotic. Overall, the data indicate that nonselective conditions can be used without compromising yield, productivity, and purity of pDNA.
A Bacillus strain, SJ4, exhibiting strong fibrinolytic activity was isolated from saeu (shrimp, Acetes chinensis) jeotgal, a Korean traditional fermented food and was identified as B. subtilis. The B. subtilis SJ4 strain can grow at a NaCl concentration of up to 15% (w/v). The fibrinolytic activity of B. subtilis SJ4 (152.0 U/ml) cultured in Luria-Bertani (LB) broth for 48 h at 37℃ with aeration was higher than that of B. subtilis SJ4 cultured in TSB (124.5 U/ml) under same culture conditions. The major proteins in the LB culture supernatant of B. subtilis SJ4 were analyzed by SDS-PAGE, which revealed three major bands (23, 25, and 28 kDa). The band (23 kDa) with strong fibrinolytic activity, analyzed on fibrin zymogram, was observed at 60-96 h of cultivation. The aprESJ4 gene encoding the major fibrinolytic enzyme, AprESJ4, was cloned by PCR. The aprESJ4 gene sequence exhibited high similarities with the fibrinolytic gene sequences of other Bacillus species. The amino acid sequence of AprESJ4 exhibited 98.9 and 98.4% similarity with subtilisin NAT and AprE2 of B. subtilis, respectively. Hence, B. subtilis SJ4 can be a potential starter culture for jeotgal products.
유리인산 생산균을 생물비료화 하기위한 노력의 일환으로 인산가용화능이 우수한 Penicillium sp. GL-101의 액침배양시 pellet 형성에 미치는 황토의 영향을 조사하였다. Penicillium sp. GL-101의 분생포자를 황토를 포함하는 PDB배지에 접종하여 59rpm의 낮은 속도로 교반하여 배양하면 무정형의 불규칙적인 pellet을 형성하는 반면에 150rpm의 높은 속도에는 구형의 규칙적인 pellet을 형성하였다. 또한 0~1.5%(W/V)범위의 황토첨가시에는 황토의 농도가 높을수록 pellet의 크기가 작게 형성되었으며, 1.5% 황토 농도에서 $0.4{\pm}0.1$mm의 가장 작은 pellet이 형성되었다. 이 결과는 황토를 첨가하지 않을 경우에 비하여 7배 작아진 것이었다. 그러나 황토 농도가 2.0% 이상되면 pellet의 크기가 오히려 증가하였다. 또한 황토의 주성분인 불용성 염의 분말을 0~1.0% 농도로 배지에 첨가하여 pellet 형성에 미치는 영향을 조사한 결과 염의 농도가 높을수록 작은 크기의 pellet이 형성되었으며, $CaSO_4$를 첨가했을 때 가장 작은 크기의 pellet을 형성하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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