• 한국수정란이식학회지
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• 제12권3호
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• pp.293-300
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• 1997

Supplementation of maturation medium with additional granulosa cells has beneficial effect on in vitro maturation of bovine follicular oocytes and their subsequent cleavage and development in vitro. However, maturation system using granulosa cells have some disadvantages that collection of granulosa cells is cumbersome and metabolic activity of the cells is variable according to ovarian cycle or follicular size. We hypothesized that bovine immsture oocytes matured without granulosa cell coculture can fertilize and develop normally if the medium volume per oocyte is reduced during in vitro maturation. Immature oocytes were matured for 24 hours in a TCM199 containing 10% fetal calf serum, anterior pitultary hormone (0.02 AU /ml Antrinⓡ) and estradiol with or without granulosa cells in vitro. In Group 1, 35 to 40 oocytes were matured in a well of 4-well plastic dish containing 500 $\mu$l of maturation medium and granulosa cells, and 9 to 10 oocytes were matured in a 50-$\mu$l drop of maturation medium without granulosa cells in Group 2. After maturation, oocytes were coincubated with sperm for 30 hours in a modified Tyrode's medium (IVF). Inseminated oocytes were cultured in a microdrop (30 $\mu$l) of a synthetic oviduct fluld medium (SOFM) containing BSA, Minimum Essential Medium essential and non-essential amino acids for 9 days. As a preliminary experiment, we investigated the beneficial effect of granulosa cells during maturation on subsequent cleavage and development using the same type of culturedishes (4-well dish). Granulosa cells could not increase embryo cleavage after fertilization but significantly improved (p<0.05) embryo development to expanding blastocyst (Table1 and 2). In Group 1, 68 and 80% of inseminated oocytes have cleaved at 30 hours and 2 days after IVF, respectively, which is similar (p>0.05) to the result of Group 2 (69% at 30 hours and 78% at 2 days after IVF). The oocytes in Group 2 showed 21 and 11% of developmental rates to expanding and hatching blastocysts, respectively, which was not significantly different (p>0.05) from those (20 and 10%, respectively) of oocytes in Group 1. In conclusion, it has been clarified that a microdrop culture system without granulosa cells for in vitro maturation can support bovine embryonic development to blastocyst in vitro as readily as a granulosa cell coculture system.

• 생명과학회지
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• 제18권7호
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• pp.980-985
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• 2008

양파는 우리 식생활에서 자주 사용되는 식품 재료로서 그 재배 방법이 용이하여 전국 각지에서 많이 생산되고 있다. 양파 내에는 glutamic acid, arginine 등 다양한 종류의 아미노산이 들어 있어서 그 효능을 증가시킨다. 본 연구에서는 이러한 장점을 가지고 있는 양파의 수요 확대 및 국민 건강 증진을 위하여 양파즙을 기질로 하여 알코올 발효 조건을 검토하고 나아가 발효주의 품질을 개선하여 산업화를 위한 발판을 마련하고자 하였다. 플라스크 배양 결과, 48시간 경에 정지기로 접어들고, 90시간 이후에 사멸기로 나타났다. 에탄올 생성은 114시간에서 정점을 보였다. 플라스크 배양의 최적 조건을 토대로 하여 유가 배양, 연속 배양 등 발효조 배양을 행하였다. 발효조 정치배양은 플라스크 배양과 유사한 결과를 보였지만, 약 24시간 정도 빠르게 진행되었다. 유가배양은 배양 시작 후 72시간 때 10% sucrose가 첨가된 양파즙 배지를 첨가하여 실시되었고, 균의 사멸을 방지하고 알코올의 일정농도를 유지하게 했다. 연속배양은 배양 시작 후 72시간 때부터 24시간 간격으로 연속적으로 신선한 배지를 균 생육이 유지되게 하였다. 그 결과 균 생육은 다소 감소하였지만, 일정농도의 알코올 생성은 가능한 것으로 나타났다. 또한 생체 내에서 항괴혈병 작용, 면역 촉진 작용 등의 생리 활성을 나타내는 비타민 C(L-ascorbic acid)의 유도체인 $2-O-{\alpha}-D-glucopyranosyl$ L-ascorbic acid (AA-2G)를 양파즙 배지에 첨가하여 알코올 발효의 특성을 분석하여 발효주의 비타민 C를 강화하고 면역 증강을 촉진시키는 기능성 발효주로의 가능성을 확인하였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권2호
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• pp.139-143
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• 2004

네리네의 인편 배양에 의한 기내 증식을 위하여, 쌍인편으로부터 자구형성에 미치는 NAA와 BA 및 sucrose 농도의 영향을 조사하였다. 네리네의 쌍인편으로부터 기내 자구형성에 가장 적합한 배지는 1.0mg/L NAA와 2.0mg/L BA를 첨가한 MS배지였다. 적정 sucrose 농도는 30 g/L에서 가장 양호하였으며, 90g/L 이상의 sucrose 첨가배지에서의 자구형성은 심하게 억제되었다. 비대된 인편을 단축경과 함께 5mm크기로 잘라 60일 간격으로 1, 2, 3차 계대 배양한 결과, 절편당 자구수는 6.5, 7.3, 8.2개로 다수의 기내자구를 지속적으로 생산할 수 있었다. 기내 형성된 3mm 이상의 자구는 생장조절제를 첨가하지 않은 MS배지에 옮겨 60일간 생육시킨 후, 초장 50mm이상 자란 식물체를 버미큐라이트와 펄라이트를 1:1 혼합한 배양토에 순화시켰을 때, 생존율은 95% 이상으로 높았다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제37권2호
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• pp.187-191
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• 1998

새로운 Bacillus thuringiensis NT0423균주를 이용한 배양체계를 확립하고 대량생산을 위한 새로운 배양배지를 개발하였다 대두박과 밀기울의 다양한 성분비로 구성된 5종의 SW 배지는 기존의 인공합성배지인 GYS나 LB B. huringiensis 의 성장과 포자형성면에서 훨씬 우수한 결과를 보였고, 그중 대두박과 밀기율이 3:2의 비율로 구성된 SW32배지에서 전체 세포수가 3.9$\times$${10}^{8}$CFU/ml에 달했고, 대부분의 세포가 빠르게 포자를 형성하여 (3.7$\times$${10}^{8}$CFU/ml)가장 효율적이었다. 배양에 따른 배지의 pH는 최저 6.2에서 최고 7.3까지 변화하여 성장에 크게 영향을 미치지 않았고, 전체 배양액에서 대두박과 밀기울이 차지하는 비율이 4%일 경우, ml당 4.2$\times$${10}^{8}$CFU/ml의 포자가 형성되어 B. thuringiensis 의 성장에 가장 유리하였다. 교반플라스크와 5ι의 소규모 발효기를 이용한 B. thuringiensis 의 배양조건 확립에 의해 각각 최대 1$\times$${10}^{9}$CFU/ml과 5$\times$${10}^{10}$CFU/ml에 해당하는 많은 양의 균체를 회수할 수 있다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제42권7호
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• pp.1125-1132
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• 2013

종균용 김치를 제조를 하기 위해서는 김치 공장에서 저가로 종균이 대량배양 되어야 한다. 그러나 현재의 유산균배지는 종균 생산용으로 사용하기에는 비용이 많이 든다. 이를 해결하기 위해서는 새로운 배지를 개발해야 하는데 새로운 배지를 개발하기 위한 기본적인 요소에는 배추 추출액, 탄소원, 질소원, 무기염류가 있다. 선정된 최적배지 조성은 배추 추출액 잎 30%, maltose 2%, yeast extract 0.25%, $2{\times}$ salt stock(2% sodium acetate trihydrate, 0.8% disodium hydrogen phosphate, 0.8% sodium citrate, 0.8% ammonium sulfate, 0.04% magnesium sulfate, 0.02% manganese sulfate)으로 나타났다. 그리고 새롭게 개발된 배지의 이름은 MFL로 명명하였다. Leuconostoc(Leuc.) citreum GR1을 $30^{\circ}C$에서 24시간 배양하면 MRS 배지에서는 $3.41{\times}10^9$ CFU/mL, MFL 배지에서는 $7.49{\times}10^9$ CFU/mL의 생균수로 MFL 배지에서 배양하면 MRS 배지에서 배양했을 때보다 2.2배 더 높은 성장을 보였다. 또한 최적화 배지의 scale-up을 위해 5 L 발효조를 이용하여 2 L의 working volume으로 Leuc. citreum GR1을 배양하였다. 교반속도는 50 rpm에서 생균수 $8.60{\times}10^9$ CFU/mL를 얻었다. 발효조의 pH 조절은 pH-stat mode로 하였으며, 균체 성장의 최적 pH는 수산화나트륨 수용액을 이용한 pH 6.8이었고, 이 조건으로 20시간 배양 후 $11.42{\times}10^9(1.14{\times}10^{10})$ CFU/mL의 균체를 얻을 수 있었다. 이는 MRS 배지로 사용하여 얻은 생균수의 3.34배에 해당하는 높은 값으로, 본 연구에서 개발된 MFL 배지는 김치 종균용 Leuc. citreum GR1 배양을 위한 배지로 배지 단가 절감, 높은 균체 수율 등 충분한 경제적 장점을 기대할 수 있다.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제43권1호
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• pp.103-109
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• 2005

토끼 구강점막 상피 세포의 분리 및 일차배양 방법, 세포성장에 미치는 환경인자의 영향에 대한 연구를 T75-플라스크를 사용하여 수행하였다. 토끼의 구강점막조직을 채취(biopsy)한 후 트립신(trypsin) 효소처리방법을 이용하여 $0.25cm^2$ 점막 조직으로부터 $1.92{\pm}0.59{\times}10^6$개의 점막 상피세포를 회수할 수 있었다. 회수한 점막 상피세포를 50 mg/L BPE(bovine pituitary extract), $5.0{\mu}g/L$ EGF(human recombinant epidermal growth factor), 0.15 mM $Ca^{2+}$을 함유한 K-SFM(keratinocyte serum free medium)을 10 mL씩 사용하여 일차 배양한 결과 8일 만에 배양용기표면에 세포가 포화(confluent)하게 성장하였고 배가시간은 2.45일이었다. 일차 배양한 세포를 회수한 후 배지종류, 배지부피, 첨가물 종류가 상피세포성장에 미치는 영향을 조사하였다. 혈청첨가배지는 세포성장에 부정적인 효과를 나타냈고, 혈청농도가 증가함에 따라 세포성장은 큰 변화가 없었다. 배지부피가 증가함에 따라 세포성장은 감소하였고, 칼슘농도가 증가할수록 세포성장은 증가하였으며 2.0 mM에서 최적치를 나타내었다. 이상으로 토끼 구강점막 상피세포를 T75-플라스크를 사용하여 배양하는 경우 50 mg/L BPE, $5.0{\mu}g/L$ EGF, 2.0 mM $Ca^{2+}$을 함유한 K-SFM을 10 mL씩 사용하는 조건이 가장 적합하였고 배가시간은 1.32일이었다. 이러한 연구결과는 향후 점막뿐만 아니라 피부, 각막 등 인체에 존재하는 상피세포배양을 위한 공정개발이나 생물반응기 설계에 유용한 정보를 제공할 것으로 사료된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제22권2호
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• pp.197-202
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• 1994

Microalga, Spirulina platensis has been cultivated in a pilot scale photo-bioreactor to treat wastewater and to produce high protein feedstocks from swine waste containing medium. 0.31(1/day) of specific growth rate and 0.170 of bioenergeric yield were obtanined from batch cultivation in 30% waster containing medium, compared to 0.71(1/day) and 0.545 from clean culture. An optimal dilution concentration was decided as 20% of working volume, based upon the cell growth and biomass productivity. The removal rate of nitrates in the wastewater was decreased as the adding concentration of wastewater was increased while the decrease of total phosphates was reversed, showing 0.33(1/day) and 0.30(1/day) of rate constants for nitrate removal in 10% addition and for phosphate removal in 30% addition, respectively. The chemical composition and amino acid profile of the biomass were superior to those of commerically available health food product, Spirulina sp.

• KSBB Journal
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• 제10권1호
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• pp.78-88
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• 1995

구연산을 생산하고자 캡슐 내부에 A. niger를 고 정화하여 배양하는 경우 곰팡이가 뻗어나와 캡슐 벽 면위에서 성장하게 된다. 배지중의 탄소원이나 산소 가 부족하면 캡슐벽 밖에 나온 균사가 느슨하게 자라게 되며 탄소원과 산소가 충분하면 캡슐벽 밖의 균사는 단단하게 뭉쳐지며 생산성과 생산수율이 매 우 높아진다. 즉 배지의 단위 부피당 적절한 캡슐수 가 존재한다. 배양중에 캡슐막이 팽창하는 현상은 배지중에 $CaCl_2$를 첨가함으로써 방지할 수 있다. 배 지중에 $CaCl_2$를 첨가하는 시기에 따라 생산성은 영향을 받으며, 배양초기에 $CaCl_2$를 첨가하는 경우보 다 배양 7일째에 $CaCl_2$를 첨가하는 경우가 생산수율 이 약 40% 정도 증가하였다. 고정화 캡슐을 이용하 여 플라스크 배양으로 구연산을 생산하는 경우 생산 수율은 산소공급에 큰 영향을 받는다. Parafilm으로 밀봉된 플라스크 대신 산소공급이 원활한 T -flask를 사용하면 생산량은 11배 생산수율(${\Delta}p/{\Delta}s$)은 3.8배 증가하였다. A. niger를 캡슐에 고정화 배양하여 구 연산을 생산하는 경우는 bead에 고정화 배양하여 생산하는 경우보다 6일째부터 13일째 사이에 평균 30 % 이상의 구연산 생산량 증가가 있었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVI)
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• pp.187-191
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• 2005

발효기에서의 균사체 생장과 세포외다당류의 생산을 위한 최적 배양조건을 조사하기 위하여 회분식 반응기를 이용하여 연구한 결과 최적 회전속도와 통기량은 각각 200 rpm과 1.5 vvm 었다. 최적 배양 환경하에서 5L발효기(working volume 2 L)에서 배양한 결과 각각 10.21 g/L 와 3.56 g/L의 mycelial growth와 exo- polysaccharide를 얻었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVI)
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• pp.140-143
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• 2005

This study was concerned with the optimization of liquid culture conditions for mycelial growth and polysaccharide production and its physicochemical properties in Cordyceps militaris. The one factor at a time method was adopted to investigate the effects of medium composition, environmental factors and C/N ratio. Among the these varialbles, glucose 80g/L, yeast extract 10g/L, $MgSO_4{\cdot}7H_{2}O\;0.5g/L$, $KH_{2}PO_4\;0.5g/L$ were proved to be the most suitable carbon, nitrogen, and mineral sources, respectively. The optimal temperature, initial pH, working volume were identified to be $24^{\circ}C$, 7.0 and 100ml, respectively. Under the optimal conditions, the strategies in shake flask culture and 5L jar fermentor led to mycelial growth of 29.43 g/L, 28.88g/L and polysaccharide production of 2.53g/L, 6.38 g/L, respectively. Among the phisicochemical properties, relative concentrations(w/v) of total sugar, uronic acid, protein and hexoseamine were identified to be 74.07%, 1.13%, 0.91%, and 0.46%, respectively. The fraction of neutral and acidic polysaccharide were identified to be 81.9% and 18.1%, respectively.