A defective RNA3 (D3Yα) of strain Y of cucumber mosaic virus (CMV-Y) was examined on host-specific maintenance, experimental conditions, and a viral factor required for its generation in plants. D3Yα was stably maintained in cucumber but not in tomato plants for 28 days post inoculation (dpi). D3Yα was generated in Nicotiana tabacum or N. benthamiana after prolonged infection in the second and the third passages, but not in plants of N. benthamiana grown at low temperature at 28 dpi or infected with CMV-Y mutant that had the 2b gene deleted. Collectively, we suggest that generation and retention of D3Yα depends on potential host plants and experimental conditions, and that the 2b protein has a role for facilitation of generation of D3Yα.
기주반응 실험을 통하여 무병징 또는 엷은 병징을 발현하는 satRNA 보유 Paf-CMV 및 Rs2-CMV를 고추 CMV병의 방제를 위한 약독바이러스로 공시하여 교차방어효과를 검정하였다. 공시한 satRNA-CMV는 모두 agar gel diffusion test에서 강독계로 공시한 Mf-CMV의 항원과 융합하는 침강선을 나타내 subgroup I의 혈청 형으로 판단되었다. 이들 약독계 satRNA-CMV의 물리적성질은 내희석성이 $10^{-4}$으로, 강독계 Mf-CMV나 satRNA를 보유하고 있는 Ap-CMV보다 낮게 나타났으나, 내열성 및 내보존성 은 차이를 보이지 않았다. 공시한 satRNA의 염기서열을 결정한 결과, Rs2-satRNA는 335염기, Ap-satRNA 347염기, Paf-satNA 386염기로 구성되어 있었다. 이들 염기서열을 이미 보고된 Y-CMV의 satRNA와 비교한 결과, 양 말단 영역 특히 5'말단으로부터 80염기 및 3'말단으로부터 174염기는 안정된 conserved sequence를 나타냈다. 그러나 중간영역의 염기서열에서는 .많은 변이를 나타냈고, 특히 병징과 관련된 domain으로 보고된 영역에서 Paf-satRNA의 염기서열은 다른 계통의 satRNA에 비하여 많은 차이를 보였다. 각 satRNA의 cDNA로부터 전사시킨 transcript RNA를 Mf-CMV의 게놈RNA와 혼합하여 고추에 접종한 결과, 본래의 각 satRNA-CMV를 접종하였을 때와 마찬가지로 Paf-satRNA 및 Rs2-satRNA의 transcript 와 혼합한 Mf-CMV에 감염된 고추의 병징이 약하게 발현되었다. 선발된 약독CMV의 강독계 바이러스에 대한 교차방어효과를 검정하기 위하여 Paf-CMV 및 Rs2-CMV를 접종한 고추와 담배에 강독 Mf-CMV를 challenge한 후 교차방어 지속효과를 검정한 결과, Paf-CMV를 접종한 고추와 담배는 모두 Mf-CMV를 challenge 접종한 3주후까지 병징이 발현되지 않았으나, Rs2-CMV를 접종한 식물은 challenge 2주 후에 약 반수의 개체에서 강독계 병징이 발현되었다. 또한 challenge바이러스의 농도별 교차방어효과에서도 Paf-CMV를 접종한 고추에 정제한 Mf-CMV를 0.2 mg/ml 이하의 농도로 challenge한 경우, 접종 30일이 되었을 때까지 병징이 발현되지 않았으나, Rs2-CMV에서는 일부의 개체에서 병징이 발현되어 강독계에 대한 교차방어의 효과가 일정하게 나타나지 않았다. 한편 고추의 유묘에 약독CMV를 접종한 다음, 포장에 재배하면서 바이러스병징이 발현되는 개체를 조사한 결과, 약독 CMV접종 30-60일 후에 Paf-CMV 접종구에서 1.8-6.4%, Rs2-CMV 접종구에서 8.2-18.3%그리고 무접종구에서 2.7-47.2%의 바이러스병징이 발현됨으로서 Paf-CMV의 강독계 CMV의 감염에 대한 교차방어효과가 안정되고 높게 나타났다..
전형적인 줄무늬 모자이크 증상을 나타낸 칸나로부터 Cucumber mosaic virus(CMV)의 한 계통(Can-CMV)을 분리하고, 특성을 조사하였다. Can-CMV는 대부분의 전신감염 기주에서 병징이 발현되지 않았고, 이들 기주의 접종엽 및 상엽에서 RT-PCR로 바이러스의 감염여부를 조사한 결과, N. benthamiana와 N. glutinosa에서만 바이러스가 검출되었으며, 다른 기주로부터는 확인되지 않았다. 한편 Chenopodium amaranticolor의 접종엽에 발현된 국부 괴사병반은 대조로 접종한 Fny-CMV나 LS-CMV에 의해서 형성된 병반보다 매우 작은 크기의 반점을 형성하는 특성을 보였다. 또한 Vigna unguiculata의 접종엽에는 Fny-CMV나 LS-CMV가 접종 2-3일 후에 뚜렷한 괴사병반을 형성하는데 반해서, Can-CMV는 접종 4-5일 후에 윤곽이 확실치 않은 퇴록병반을 형성하였다. Can-CMV에 감염된 N. benthamiana로부터 추출한 dsRNA는 4종의 밴드가 검출되었으며, 이들 분자의 크기 및 종수는 Fny-CMV나 LS-CMV와 차이를 나타내지 않았다. Can-CMV의 항원은 Fny-CMV의 항혈청에 대해서 한 종의 뚜렷한 침강선을 형성하였으며, Fny-CMV의 항원에 의해서 형성된 침강선과 융합하였고, LS-CMV의 침강선과는 분지선을 형성함으로서, 혈청학적으로 서브그룹 I에 속하는 계통으로 판단되었다. 또한 Can-CMV에 감염된 N. benthamiana로부터 RNA를 추출하여 CMV-specific 프라이머를 이용한 CMV-RNA3의 외피단백질 유전자를 포함하는 3'영역에 대해서 RT-PCR을 실시하였다. Can-CMV는 Fny-CMV나 LS-CMV와 마찬가지로 예상되었던 약 950bp크기의 cDNA가 증폭되었으며, 이 cDNA를 EcoRI으로 처리하였을 때에는 절단되지 않았고, MspI에서는 595bp 및 350bp의 절편으로 절단되었다. 이와 같은 결과는 Fny-CMV의 패턴과 일치하였으며, 이러한 결과로부터 Can-CMV가 서브그룹 IA에 속하는 계통으로 확인되었다. 이상과 같은 결과들로부터, Can-CMV는 앞으로 바이러스와 기주의 다양한 상호관계를 이해하는데 있어서 중요한 병원학적 성질을 가지고 있는 것으로 생각되었다.
오이모자이크바이러스(CMV)는 고추에 심한 피해를 주는 바이러스이다. 2013년 고추 품종 청양의 선단부위에 괴저증상이 나타난 식물체로부터 CMV를 순수 분리하였고 이 분리주를 CMV-GTN으로 명명하였다. CMV-GTN과 기존에 특성이 잘 알려진 CMV-Ca-P1을 대상으로 외피단백질의 아미노산 서열과 여러 기주식물에서 생물적 반응을 비교하였다. CMV-Ca-P1의 외피단백질 아미노산은 217개로 구성되어 있었으나, CMV-GTN은 아미노산 서열 57번째에 발린이 추가된 218개로 구성되어 있었다. CMV-GTN과 GeneBank에 등록된 다양한 CMV 분리주들의 외피단백질유전자 유사성은 96-99%였다. 생물 검정에서 토마토와 고추에서 병원성이 강하게 발현되는 CMV-GTN을 고추 품종에 대한 저항성 스크린을 위하여 선발하였다. 고추 시판 품종 135종에 대하여 CMV-GTN으로 검정하였고 CMV-Ca-P1과 저항성 반응을 비교하였다. 그 결과 CMV-GTN에 대하여 저항성 반응을 표현한 품종은 프레미엄, 중도 저항성 품종은 핫스타, 카이저, 굿쵸이스였다. 한편 CMV-Ca-P1에 대한 저항성 품종은 베로따와 카이저였다.
A new strain of Cucumber mosaic virus (CMV) from easter lily (Lilium longiflorum), Ly2-CMV, was identified and compared to the well-characterized Mf-CMV (subgroupⅠ) and LS-CMV (subgroupⅡ) by host reaction in several indicator plants, dsRNA analysis, serological property, RT-PCR analysis, restriction enzyme profile of the PCR products and nucleotide sequence of coat protein (CP) gene. Remarkable differences in symptoms of Ly2-CMV were found between Mf-CMV or LS-CMV in tobacco plants and Datura stramoinium. Ly2-CMV induced small necrotic ringspots on the inoculated leaves of Nicotiana tabacum cvs. Xanthi nc and Burley 21 and D. stramonium, and failed to infect these species systemically. Of the indicator plants tested, N. benthamiana only reacted with systemic infection by inoculation of Lr2-CMV. In experiments of dsRNA analysis, serology and RT-PCR of CP gene, Ly2-CMV was come within subgroupⅠ CMV. However, restriction enzyme analysis of the PCR products using MspⅠ showed that Ly2-CMV was distinct to Mf-CMV. The CP gene of Ly2-CMV contains 657 nucleotides, and the nucleotide sequence is similar to that of Mf-CMV. There is also a high degree of conservation between their putative gene products in Ly2-CMV and Mf-CMV, with five amino acid changes in the 218 amino acids of the CPs.
The coat protein (CP) gene of cucumber mosaic virus-As (CMV-As) strain was engineered for expression in the plant by using the cauliflower mosaic virus 35S transcript regulatory sequences. The CP gene was cloned into an Agrobacterium-derived binary vector. A chimeric gene was constructed by the cDNA of CMV-As CP and plant expression vector pBI121. The clone, pCMAS66, was first introduced into the phagemid vector pSPORT1 for situating sense orientation for translation and making restriction sites in order to re-introduce plant expression vector, pHI121. The resulting subclone pCASCP02 and plant expression vector pBI121 were treated with BamHI-SacI for excising the target gene and removing GUS gene, respectively. After Agrobacterium transformation by freeze-thaw technique, the clone, pCMASCP121-123 which contains sense orientation of the target gene, was selected and confirmed by restriction endonuclease analysis. The CMV-As CP gene was introduced into A. tumefaciens. The results on tobacco plant transformation with the vector system revealed that the system could be successfully introduced and showed high frequency of selection to putative transformations.
Freesia, a member of the Iridaceae family, has fragant, tubular shaped flowers and is very popular ornamental plants in the world. Diseased freesia plants showing systemic leaf streak mosaic symptoms were collected from a cultivated farm in Kyonggi province, Korea in 2003, and its causal agents were investigated. Two viruses, Cucumber mosaic virus (Fr-CMV) and a potyvirus, were identified from the leaf tissues of the diseased freesia based on sequence analysis and host range tests. CMV-Fr could infect systemically on Chenopodium quinoa, C. amaranticolor, N. glutinosa, and N. benthamiana, and this biological property is distinguishable from ordinary strains of CMV. A filamentous potyvirus-shaped virus could not infect general indicator plants by mechanical inoculation. Single RT-PCR products was successfully amplified with a set of degenerate primers specific to the Potyvirus genus and total nucleic acids from the infected tissues, and was cloned into the pGEMT-Easy vector. Nucleotide sequences confirmed it belongs to the Potyvirus genus with either a new species or an isolate of Freesia mosaic virus (no information is available for the FrMV). This is the first report of FrMV in Korea and more characterizations of the two viruses are in progress.
치즈 제조공정에서 나오는 부산물인 유청이 진딧물에 의해 전염되는 오이모자이크바이러스(cucumber mosaic virus, CMV)와 고추모틀바이러스(pepper mottle virus, PepMoV)의 감염 억제효과가 있는지를 고추 '청양' 품종을 대상으로 조사하였다. 온실에서 유청 원액 및 원액을 물로 2-20배로 희석하여 고추 '청양' 품종에 분무한 후 복숭아혹진딧물을 이용하여 CMV-Vch를 접종한 결과, 원액을 처리한 실험 구의 감염률이 6.6%로, 대조로 물을 처리한 실험 구의 감염률 23.3%에 비해 저하되었다. 노지에서 재배하는 고추 '청양' 품종에 CMV는 인위적으로 접종하지 않고 자연 감염되도록 둔 상태에서 정식일부터 6월 말일까지 1주일 간격으로 유청 원액을 분무 처리한 결과, 6월5일 이전에 자연적으로 CMV에 감염된 식물체의 비율이 무처리와 살충제 처리에 비해 각각 18.9%와 16.7% 감소하였다. 유청의 식물 바이러스 감염억제에 대한 작용 기작을 알기 위하여 온실에서 PepMoV-kr에 감염된 식물체 즙액과 유청을 1:1로 혼합하여 고추에 인공접종하여 시간경과에 따른 외피단백질 농도 변화를 웨스턴 블로팅 방법으로 분석한 결과, 접종 6일 후 대조에 비하여 적었으나, 접종 9일 후에는 대조와 동일하게 증가하였다. 본 연구 결과는 유청이 고추에 발생하는 서로 다른 속에 속하는 두 종류의 바이러스인 CMV와 PepMoV에 의한 감염 억제에 효과가 있다는 것을 보여주었다.
Three strains of Cucumber mosaic virus (CMV) have been found to cause a lethal disease, referred to as fern leaf syndromes and mild mosaic symptoms in tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) crops grown in Kuwait. CMV strains were detected and identified based on host range, symptomatology, serology, electron microscopy, and ribonucleic acid (RNA) electrophoresis in polyacrylamide gels. A high degree of viral genomic heterogeneity was detected among CMV strains isolated in Kuwait, with no apparent correlation to symptomatology in tomato host plants. Two different virus satellites of 'CMV associated RNA 5', designated CARNA 5, were detected in two virus strains that caused both lethal disease and mild symptoms, designated CMV-D1 and CMV-S1 respectively. CARNA5 was not detected in the third CMV strain that caused fern leaf syndromes designated CMV-F. All the three isolated strains were serologically indistinguishable from each other and may belong to one serotype according to Ouchterlony gel diffusion tests. These strains transmitted via aphids (Myzus persicae Sulz) in a non-persistent manner. Physical properties of the virus strains were very similar where thermal inactivation test showed that virus withstood heating for 10 min at $70^{/circ}$, dilution end point was $10^{-4}$, and the longevity in vitro at room temperature was less than 5 days for all virus strains. CMV-D1 and CMV-F were the most devastating diseases spreading in both greenhouse and field-grown tomato where aborted flower buds failed on fruit setting due to the viral infection. This is the first report to isolate three different strains of CMV in Kuwait.
A virus causing stunt, yellowing, severe mosaic, malformation symptoms on leaves and uneven development and malformation on fruits of zucchini was prevalent around Goseong, Gyeongsangnam-do, Korea. A survey conducted (2004) in the Goseong area revealed about 20% virus infection rate. The disease causative identified as Cucumber mosaic virus (CMV-Z1) was further characterized. The isolate induces mosaic symptoms on Cucumis sativus, while severe mosaic, stunt and malformation on C. pepo. Thin section analyses have shown that virus inclusions are formed in the cuticle layers as well as epidermal, parenchyma and collenchymas cells in virus-infected Nicotiana tabacum. CMV-Z1 isolate induced specific cytoplasmic inclusion bodies such as irregular clumps (IC), crystal (Cr) and irregular chloroplasts (ICh). IC was made up of virus particles interspersed with a darkly stained amorphous material and found both in the cytoplasm and vacuoles, whereas ICh and Cr were rarely found in the vacuoles. The genome of CMV-Z1 RNA-1 consists of 3359 nucleotide (nt) encoding 1a protein of 993 amino acids (aa). The CMV-Z1 RNA-2 was 3050 nt in length containing 2a (857 aa) and 2b (110 aa), while RNA-3 encoding 3a movement protein (279 aa) and coat protein (218 aa) was 2215 nt in length. Phylogenetic analyses of nucleotide sequences of CMV-Z1 isolate appeared it is more closely related to subgroup IA than to subgroup IB or II.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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