국내의 토마토에서 발생하는 주요 바이러스는 Tomato chlorosis virus (ToCV), Tomato spotted wilt virus (TSWV), Cucumber mosaic virus (CMV), Pepper mottle virus (PepMoV), Tomato mosaic virus (ToMV)이다. 이들 바이러스를 진단하기 위해 프라이머 세트와 반응액을 포함하는 역전사중합반응(RT-PCR)법의 조건을 조사하였다. 공시한 바이러스에 특이적인 염기서열로부터 모두 46개 프라이머 세트를 설계하고, 이를 이용해 주형을 넣지 않은 RT-PCR에서 비특이 반응을 조사하였다. 이들 가운데 16개 조합을 건전한 토마토 RNA에 적용한 결과 프라이머 세트와 RT-PCR 반응액 간의 친화성이 비특이 반응 감소에 영향을 주었다. cDNA 합성과 관련된 인자와 RT-PCR 반응액 사이의 조합을 근거로 ToCV 진단을 위한 두 종류의 반응액을 선발하였다. ToCV 진단 시 수립된 조건을 나머지 바이러스 진단에 적용했을 때, 특이성이 높은 프라이머 세트 C029 (ToCV), C072 (TSWV), C070 (CMV), C048 (PepMoV), C065 (ToMV)를 선발할 수 있었다. 이들 프라이머 세트는 공시한 바이러스를 특이적으로 진단하는 데 유용할 것으로 판단된다.
Weeds are widely grown in the field and are infected by many viruses. A survey was conducted to identify viruses infecting weeds in Korea. Virus-infected weed samples including Rorippa indica (L.) Hiern, R. islandica (Oed.) Bord, Crepidiastrum denticulatum (Houtt.) Pak & Kawanno, Achyranthes japonica (Miq.) Nakai, and Chrysanthemum boreale (Makino) Makino were collected in Kyonggi Province. These weeds were grown in the greenhouse and were isolated on 10 test plants. Several virus isolates were isolated fron infected tissues and were further studied by host range assay, serological test, electron microscopy (EM), reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and sequencing. Each isolated virus strain was mechanically transmitted to weeds and various hosts including Nicotiana spp., Brassica spp., Vigna unguiculata, Capsicum annuum, and Cucumis sativus and showed systemic mosaic, vein clearing, necrosis, mottle, malformation, chlorosis, and/or death of host plants in some cases. Each virus was then purified using infected leaves and observed by EM. From these results three viruses were isolated and identified as Turnip mosaic virus (TuMV), Broad bean wilt virus (BBWV), and Cucumber mosaic virus (CMV). RT-PCR using virus-specific oligonucleotide primers and the cloning were conducted to determine the nucleotide sequences of coat proteins of the three viruses their amino acid sequence were deduced. The amino acid sequence homologies were about 92.7 to 99.7%, 96.2 to 97.7%, and 93.9 to 98.6% to other reported TuMV, BBWV, and CMV strains, respectively. These results suggest that many weeds may serve as primary inoculum source of diseases caused by TuMV, BBWV, CMV and that the management of these viral diseases can be achieved through weed control.
2008~2009년에 강원, 충남, 제주 지역의 백합 재배 농가에서 바이러스 감염 증상을 보이는 백합의 잎과 구근을 채취하였으며 RT-PCR 방법으로 Lily mottle virus (LMoV), Lily symptomless virus (LSV), Cucumber mosaic virus (CMV) 등 3 종류의 바이러스를 검출 하였다. LSV 12주, LMoV 20주, CMV 1주가 검출 되었으며 LSV에 감염된 12개의 식물체 중 7개에서는 LMoV도 검출되어 복합 감염된 것을 확인하였다. LMoV와 LSV에 의한 복합 감염은 엽맥투명화, 잎말림, 반점, 모자이크, 황화 줄무늬 등 단독 감염보다 심각한 병징을 나타내었으며 좋지 않은 환경에서 저장된 구근에서도 복합 감염이 관찰되었다. 채집된 식물체는 LMoV 감염이 가장 많았으며 Lily virus X(LVX)에 의한 감염은 검출되지 않았다. 7개 분리주의(LMoV 4주, LSV 2주, CMV 1주) 외피 단백질 유전자를 증폭한 후 염기서열을 분석하여 국내에서 발표된 백합 바이러스 염기서열(LSV:AJ516059, CMV: AJ296154)과 비교 하였으며 LMoV는 국내에서 처음으로 염기서열을 결정하여 기존에 보고된 염기서열(AJ564636)과 비교하였다. 분리주는 기존에 보고된 바이러스와 95~99%의 뉴클레오티드 염기서열 유사성을 보였으며, 이들 분리주의 분자 생물학적 특성을 밝히고 신속하고 정확한 바이러스 진단을 위해서는 전체 염기 서열 분석이 필요한 것으로 판단되었다.
우리나라 파프리카에 발생하는 주요 바이러스는 오이모자이크바이러스(Cucumber mosaic virus, CMV), 고추모틀바이러스(Pepper mottle virus, PepMoV), 잠두위조바이러스2(Broad bean wilt virus2, BBWV2), 고추약한모틀바이러스(Pepper mild mottle virus, PMMoV), 토마토반점위조바이러스(Tomato spotted wilt virus, TSWV) 및 사탕무황화바이러스(Beet western yellows virus, BWYV) 등 6종이다. 생산량 감소 및 고품질 규격품 생산의 가장 큰 제한요인이 되고 있는 바이러스병의 피해를 최소화하기 하기 위하여 바이러스별 병징 및 발생원인에 따른 예방법을 알아본다.
Ryu Choong-Min;Murphy John F.;Reddy M.S.;Kloepper Joseph W.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제17권2호
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pp.280-286
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2007
We evaluated a commercial biopreparation of plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR) strains Bacillus subtilis GB03 and B. amyloliquefaciens IN937a formulated with the carrier chitosan (Bio Yield) for its capacity to elicit growth promotion and induced systemic resistance against infection by Cucumber Mosaic Virus (CMV) and Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 in Arabidopsis thaliana. The biopreparation promoted plant growth of Arabidopsis hormonal mutants, which included auxin, gibberellic acid, ethylene, jasmonate, salicylic acid, and brassinosteroid insensitive lines as well as each wild-type. The biopreparation protected plants against CMV based on disease severity in wild-type plants. However, virus titre was not lower in control plants and those treated with biopreparation, suggesting that the biopreparation induced tolerance rather than resistance against CMV. Interestingly, the biopreparation induced resistance against CMV in NahG plants, as evidenced by both reduced disease severity and virus titer. The biopreparation also elicited induced resistance against P. syringae pv. tomato in the wild-type but not in NahG transgenic plants, which degrade endogenous salicylic acid, indicating the involvement of salicylic acid signaling. Our results indicate that some PGPR strains can elicit plant growth promotion by mechanisms that are different from known hormonal signaling pathways. In addition, the mechanism for elicitation of induced resistance by PGPR may be pathogen-dependent. Collectively, the two-Bacilli strain mixture can be utilized as a biological inoculant for both protection of plant against bacterial and viral pathogens and enhancement of plant growth.
Systemic acquired resistance is a form of inducible resistance that is triggered in systemic healthy tissues of local-infected plants. Several candidate signaling molecules emerged in the past two years, including the methylated derivatives of well-known defense hormones salicylic acid (SA) and jasmonic acid (JA). In our present study, the symptom on Cucumber mosaic virus (CMV) infected Arabidopsis leaves in 0.1 mM SA or 0.06 mM JA pre-treated plants was lighter (less reactive oxygen species accumulation and less oxidative damages) than that of the control group. JA followed by SA (JA${\rightarrow}$SA) had the highest inhibitory efficiency to CMV replication, higher than JA and SA simultaneous co-pretreatment (JA+SA), and higher than a JA or a SA single pretreatment. The crosstalk between the two hormones was further investigated at the transcriptional levels of pathogenesis-related genes. The time-course measurement showed JA might play a more important role in the interaction between JA and SA.
신나팔나리(Lilium x fomolongi) 뇌산 품종 실생묘에 Cucumber mosaic virus(CMV), Lily mottle virus(LMoV) 및 Lily symptomless virus(LSV)를 인공적으로 접종하여 생육에 미치는 영향을 조사하였다. 또한 재배포장에서 자연감염된 바이러스 병징과 감염율을 조사하였다. 재배포장에서 가장 많이 관찰되는 병징은 LMoV 감염에 의한 잎 모틀 증상이었다. 바이러스 감염율은 6년 이상 재 사용된 구근으로 재배하는 포장의 경우 CMV, LSV, LMoV 바이러스 가운데 두 종류 이상의 바이러스에 의한 복합 감염율은 80% 가량이었다. 신나팔나리 (Lilium x fomolongi) 품종 뇌산에 CMV-Li1과 LMoV-Li 복합감염시 건전주에 비해 초장 14%, 생체중 38%, 꽃 길이가 15% 감소하였다. CMV-Li1과 LMoV-Li 단독감염시에도 생체중은 건전주에 비해 각각 21.8%, 28.4%의 유의성 있는 감소를 보였다.
Ninety samples showing mosaic symptoms on soybean (Glycine max) cv. Sukryangputkong were collected from the Cheongsongkun area, Kyungbuk province in Korea. Initially, DAS-ELISA was conducted far detection of Soybean mosaic virus (SMV). Negative samples were chosen at random and mechanically inoculated on soybean cv. Buffalo, which reported not to produce mosaic symptoms when mechanically inoculated with SMV. An isolate of SMV, designated as B-1, from Buffalo showing mosaic and mottle symptoms was used for identification and biological characterization of the causal vim. The purified B-1 isolate had spherical particles of approximately 24nm. It positively reacted with the antiserum against Cowpea mosaic virus (CPMV) but not with Cucumber mosaic virus (CMV) and SMV antisera. CPMV was newly isolated from soybean and had been characterized by host range and by serological and electron microscopic methods. Results of this study suggest that CPMV is the possible cause of mosaic disease in vegetable soybean and that based on sympto-matology, a difference between the typical mosaic and rugose symptoms caused by SMV and CPMV was observed. This is first report of CPMV from soybean in Korea.
To analyze the genome of Cucumber mosaic virus(CMV) in pepper, we developed a new extraction method for double-stranded RNA(dsRNA). To isolate the dsRNA, 0.1g of pepper leaves homogenized with 1ml of 5${\times}$EXB extraction buffer[0.5M glycin, 0.5M NaCl, 5mM EDTA(pH9.0/NaOH), 10% Sodium N-lauryl salcosinate(NLS), 10% Sodium dodecylsulfate(SDS)] and purified with the 1/4 volume of phenol: chloroform: isoamylalcohol(25:24:1). dsRNAs from the aqueous phase was precipitated with isopropanol. This procedure was able to detect a minimal amount of dsRNA from CMV infected plant tissue and to distinguish different CMV satellite RNAs by polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE). Moreover, this method can be applied CMV infected in pepper or Rice dwarf virus (RDV) infected rice.
Kim, Eunji;Noh, Hee Min;Phat, Chanvorleak;Lee, Gung Pyo;Kim, Jun Hong;Park, Tae-Sung;Lee, Chan
원예과학기술지
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제34권6호
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pp.924-939
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2016
The great economic losses caused by Cucumber mosaic virus (CMV) infection of peppers has led to the development of genetically modified (GM) CMV-resistant peppers. We developed virus-resistant pepper plants using Agrobacterium tumefaciens -mediated transformation. The expressed recombinant protein was purified using nickel-nitrilotriacetic acid resin and immunoaffinity chromatography, and purity was assessed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Immunoblot analysis revealed the purified CMV coat protein (CMV-CP) had a molecular mass of 25 kDa. After in-gel digestion and desalting, the internal peptide fragments of CMV-CP were sequenced by matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight. Most GM pepper and Escherichia coli BL21 internal peptides had identical peptide sequences and contained 137 of 183 whole peptides in CMV-CP. A quantitative enzyme-linked immunosorbent assay was performed to detect CMV-resistant GM peppers. We also provide basic information about the expressed protein in GM peppers for further safety assessment. The contents of soluble protein and CMV-CP were measured in GM and control peppers cultivated in three different areas of Korea. Statistical significance in terms of cultivation areas, harvest times, generations, and plant tissue origin were determined based on a P value of 0.05. The highest amount of CMV-CP was detected at the seedling stage from plant grown in each region. T3 and T5 showed significantly different levels of CMV-CP from T4 in leaves in the whorl stage. No statistical differences were observed among GM peppers at different stages of maturity in any cultivation area. The results from this study contribute to the safety evaluation of newly designed CMV-resistant GM peppers and provide a standard against which to compare other virus-resistant GM peppers.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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