• 한국식품영양학회지
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• 제28권4호
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• pp.728-736
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• 2015

Cronobacter spp.는 Salmonella spp.와 함께 조제분유에서 발견되는 미생물 중 위험도가 가장 높은 category A에 속하는 균으로 알려져 있다. 1958년 영국에서 처음으로 유아의 뇌수 막염의 원인균으로 보고되었으며, 감염 후 신생아에게서 괴사성 장염, 패혈증 등을 일으켜 후유증으로 시력과 청력 상실 및 신경마비를 일으키기도 한다. 이러한 위험성 때문에 Cronobacter spp.의 신속 검출 및 진단은 식중독 예방에 있어서 중요하다. 따라서 2002년 미국 식품의약품안전국에서는 분유에서의 Cronobacter spp.를 EE broth, VRBG 배지를 이용해 균을 분리 하고, TSA 배지에 순수분리 후 노란색을 발하는 colony를 생화학적 실험을 통해 검출하는 방법을 제시했다. 또한, 우리나라 식품공전에서도 배지를 이용하여 Cronobacter spp.를 검출 하는 방법에 대해 등재하였다. 하지만 배지배양법을 기반으로 하는 Cronobacter spp.의 검출방법은 검출에 소요되는 시간과 노동력 등이 비효율적이라는 단점이 있다. 따라서 많은 시간이 소요되는 배지배양법을 보완하고자 PCR, real-time PCR 방법 및 최근에는 PCR기법과 ELISA, CE-LIF 등을 결합하여 검출하는 방법이 개발되어 Cronobacter spp.의 검출에 사용되기도 하였다. Cronobacter spp.의 검출에 사용되고 있는 분자생물학적 기반의 PCR 및 real-time PCR 기법은 민감도와 특이도가 좋으며, 배지배양법에 의한 검출방법에 비해 검출 시간을 획기적으로 줄일 수 있다는 장점이 있다. 하지만 까다로운 실험과정과 조작에 있어서 필요한 전문적인 기술이 필요함은 한계점으로 사료된다. 면역학적 방법에 의한 Cronobacter spp. 검출에 관한 연구를 통해, 분석에 소요되는 상당시간을 단축할 수 있었으며, 민감하고 특이적인 검출이 가능함을 보여주었다. 특히 일부 연구보고에서 면역학적 검출방법은 고가의 장비가 필요 없으며, 간단한 지침에 따라 모니터링 업무의 수행이 가능하다고 하였다. 면역학적 검출방법에는 ELISA 방법 외에도 immunomagnetic bead, liposome, immunochromatographic strip 등이 개발되고 있다. 우리나라 식품의약품안전처에서는 영 유아 대상 식품의 안전관리를 강화하고자 Cronobacter spp.에 대해서는 '불검출'로 기준을 설정 운영하고 있으며, 지속적으로 이에 관한 규정을 강화하고 있는 실정이다. 따라서, 식품산업체 및 식품 의 제조, 가공, 유통 현장에서 쉽게 모니터링이 가능하며, 신속, 민감하고 특이적인 검출방법의 개발은 지속되어야 한다.

• 한국동물위생학회지
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• 제36권2호
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• pp.67-71
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• 2013

Neonatal infection caused by Cronobacter species can result in serious illnesses such as bacteremia, septicemia, meningitis, and death in at-risk infants who are orally fed contaminated reconstituted powdered infant formulas. The objective of this study was to compare the virulence among three Cronobacter species strains by using an animal model for human neonatal Cronobacter species infections. We acquired timed-pregnant ICR mice and all owed them to give birth naturally. On postnatal day 3, each pup was administered orally a total dose of $1{\times}10^7$ CFU Cronobacter species strain 3439, CDC 1123-79, and 3231. Mice were observed twice daily for morbidity and mortality. At postnatal day 10, the remaining pups were euthanized, and brain, liver, and cecum were excised and analyzed for the presence of Cronobacter species. Cronobacter species were isolated from cecum and other tissues in inoculated mice. In the tissues of Cronobacter species infected mice, meningitis and gliosis were detected in the brain. In this study, we identified the virulence among Cronobacter species strains by using a neonatal mice model which was a very effective animal model for human neonatal Cronobacter species infections.

• 한국식품영양과학회지
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• 제39권5호
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• pp.764-768
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• 2010

식품공전에 Cronobacter sakazakii 분리배지로 등재되어 있는 3종의 분리배지에 대한 평가실험을 실시하였다. Chromogenic Enterobacter sakazakii agar, Enterobacter sakazakii agar가 VRBG agar에 비하여 뚜렷한 색택과 모양의 집락을 생성하였다. 3종의 분리배지 모두 30종의 Cronobacter sakazakii에 대한 sensitivity가 100%로 측정되었지만 Cronobacter sakazakii 이외의 Enterobacteriaceae 균주를 이용한 specificity 실험에서는 Chromogenic Enterobacter sakazakii agar, Enterobacter sakazakii agar가 100%로 측정되었지만 VRBG agar는 0%로 측정되었다. 인위적으로 접종한 식품에서의 회수율은 실험에 공시된 3종 배지에서 커다란 차이가 없었다.

• 미생물학회지
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• 제48권4호
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• pp.229-239
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• 2012

Cronobacter spp. (formerly Enterobacter sakazakii), a Gram-negative bacillus, is a rare cause of meningitis and central nervous system infections. In England, the first case infected by this organism occurred in 1958. By July 2008, approximately 120 documented cases of Cronobacter spp. infection and at least 27 deaths have been identified from all around the world in the published literature and in reports submitted by public health sectors. In 2007, it was proposed by European organizations that the original taxonomy of E. sakazakii would be revised, to consist of five new species moved to a new genus, and identified as "Cronobacter". E. sakazakii has thus now been reclassified as 6 separate species in the new genus, Cronobacter, gen. nov., within the Enterobacteriaceae family. The new species are presently Cronobacter sakazakii, C. turicensis, C. malonaticus, C. muytjensii, and C. dublinensis; the sixth species is identified simply as genomospecies I, as currently including only two representative strains. The objectives of this review are to provide insight on (1) the classification and taxonomy of Cronobacter spp., (2) its clinical etiology and pathogenicity, (3) prequency of Cronobacter spp. in different categories of ready-to-eat food other than infant formula, (4) methods for detecting, isolating and typing Cronobacter spp., and (5) recent research trends for detecting Cronobacter spp.

• 한국축산식품학회지
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• 제38권2호
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• pp.376-390
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• 2018

Cronobacter species have been associated with disease outbreaks and sporadic infections, particularly in premature and immunocompromised infants. Cronobacter species can cause foodborne infections such as neonatal meningitis, septicaemia and necrotising enterocolitis. Accordingly, there is an urgent need to control and monitor the Cronobacter species in food, especially in powdered infant formula (PIF) and other baby foods. Therefore, in this review, the isolation and prevalence of Cronobacter species in infant food including PIF and the recent advance of detection methods are discussed for the better understanding on the current research status of Cronobacter species.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권4호
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• pp.757-762
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• 2010

Cronobacter is a major foodborne pathogen in powdered infant formula and can lead to serious developmental after-effect and death to infants. The contamination of Cronobacter may be a high risk for the powdered foods. To isolate and identify Cronobacter from the powdered foods such as powdered infant formula and Saengsik in Korea, a conventional culture method, rapid identification system, PCR, and 16S rDNA sequencing were performed. As the results of isolation, seven Cronobacter spp. were isolated from seven out of 102 powdered infant formulas and 41 Cronobacter were isolated from 41 out of 86 Saengsiks. Forty-eight Cronobacter isolates were identified to be C. sakazakii and C. dublenisis by 16S rDNA sequence analysis. Most of the isolates were C. sakazakii and 13% of the isolates were C. dublinesis. One fourth of the C. sakazakii isolates showed different biochemical characteristics of negative nitrate reduction and nonmotility activities compared with the other strains reported previously.

• Journal of Dairy Science and Biotechnology
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• 제39권3호
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• pp.113-120
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• 2021

Although the number of incidences of illness caused by ingestion of the bacterial pathogen Enterobacter sakazakii (Cronobacter spp.) has dramatically declined, there remains a need for a robust isolation method to recover this microbe from powdered infant formula (PIF). The current method described in the FDA's Bacteriological Analytical Manual requires multiple steps, and 3-4+ days for complete analysis of PIF isolated E. sakazakii (Cronobacter spp.). We describe a bacteriological method including a one-step enrichment followed by plating on chromogenic agar for presumptive identification of E. sakazakii (Cronobacter spp.). Suspected colonies are confirmed by either biochemical analyses, or a Real-Time PCR-based assay. Using this method, E. sakazakii (Cronobacter spp.) in PIF can be isolated and identified within one day (24 hours).

• 한국축산식품학회지
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• 제30권3호
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• pp.479-486
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• 2010

국내의 건조분말 식품에서 분리한 Cronobacter spp.의 건조내성에 따른 열, 살균소독제, 항생제에 대한 내성특성 분석하여 Cronobacter spp.을 제어하는 효과적인 방법을 연구하고자 하였다. 분리된 37개의 건조저항 균주, 7개의 건조민감 균주, 그리고 68개의 중간그룹의 균주 총 112개에 대하여 분석한 결과 건조내성을 가지고 있는 Cronobacter spp.는 열에 대해서도 저항성이 큰 것으로 나타났다. 따라서 조제분유등의 건조 스트레스에 노출되어 살아남은 Cronobacter spp.는 열 스트레스에서도 높은 내성을 보일수 있을 것으로 사료된다. 살균소독제를 이용한 Cronobacter spp.의 제어효능은 sodium hypochlorite는 15-25 ppm와 benzalkonium chloride는 5-15 ppm 농도에서 5 log CFU/mL 살균 효과가 있었다. Albumin으로 3%(w/v)오염시킨 부유세균의 살균력은 건조내성 균주와 건조민감 균주 모두에서 오염전과 비슷하여 유기물 오염상태에서도 살균소독제 효능에는 큰 영향을 주고 있지 않음을 알 수가 있었다. 그리고 항생제 내성은 $\beta$-lactam 계열의 ampicillin에 대하여 약 90% 분리주가 64-128 ppm의 농도에서 최소저해 농도를 보여 주었다. Aminoglycoside 계열의 kanamycin과 Gram(-) spectrum의 nalidixic acid에서 4 ppm의 가장 낮은 내성을 보였다. 건조민감 균주과 건조내성 균주의 최소저해농도 경우 전반적으로 모든 항생제에 대해서 건조 내성이 높은 균주가 더 큰 항생제 내성을 지니고 있는 것으로 나타났다. 따라서 분리 Cronobacter spp.의 건조내성이 열과 항생제의 저항성과 관련이 있는 것으로 보인다. 그러므로 조제분유와 같은 분말식품과 그 원료의 오염 Cronobacter spp.의 살균제어에 더 강력한 처리가 필요할 것으로 보인다.

• 한국식품과학회지
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• 제41권6호
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• pp.681-686
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• 2009

Cronobacter spp.(Enterbacter sakazakii)의 건조저항성은 다른 장내 세균들보다 강한 특성을 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 국내 식품으로부터 분리한 110개의 Cronobacter균주로부터 건조내성 특성을 분석하고 여러 상대습도에서의 생존특성을 연구하고자 하였다. 국내 식품에서 분리한 Cronobacter 110균주중 8시간 금속표면 건조노출에 대하여 초기균수의 약 절반정도 생존하는 고내성그룹이 30%, 대부분이 사멸하는 저내성그룹이 약 10%를 차지하여 전체 균주 중 중간정도 이상의 내성을 가지는 균주가 90% 이상을 차지하고 있었다. 15일간 장기 건조노출에 경우도 비슷한 경향을 보여 주었다. 조제분유에서 Cronobacter 건조 노출의 경우 고내성그룹과 중간내성그룹은 30일 이후에도 5 log CFU/mL에서 3 log CFU/mL 이상의 생균수를 나타내었다. 오히려 금속 표면건조 때보다 더 생존율이 높아 조제분유에서는 더 내성이 증가함을 할 수가 있었다. 따라서 국내 식품에서 분리한 대부분의 Cronobacter도 건조에 강한 내성을 가지고 있는 것으로 보인다. 건조환경에서의 biofilm 형성능력은 고내성과 중간 내성그룹 균주는 노출초기에서부터 biofilm 생성이 이루어졌다. 그러나 저내성그룹 균주의 경우에는 biofilm의 형성이 증가하지 않다가 7일 후 biofilm 생성이 많아지는 것으로 분석되었다. 따라서 Cronobacter의 biofilm 형성능은 각 그룹간 biofilm 생성의 시간적인 차이만 존재하고 대부분의 Cronobacter는 건조스트레스에서 biofilm 형성능이 비슷한 것으로 보인다. Cronobacter는 건조금속표면의 75%의 상대습도에서 24-48시간 내에 모두 사멸하는 것으로 나타났으나 40% 상대습도에서는 초기균수의 60% 생균수를 유지하여 낮은 상대습도에 강한 저항특성을 보여주었다. 대부분의 Cronobacter는 건조에 강한 내성을 가지고 있어 조제분유등의 건조식품에서 오랫동안 살아 있을 수 있으나 습도가 높은 환경에서는 사멸이 많이 일어나는 것으로 사료된다. 그러므로 식품생산현장에서 습도를 조절하여 Cronobacter를 제어할 수 있을 것으로 보인다.

• 한국축산식품학회지
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• 제29권6호
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• pp.702-708
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• 2009

본 연구는 국내에서 시판되고 있는 분유 및 영 유아식품에서 분리한 Cronobacter spp.(Enterobacter sakazakii) 14개 균주의 biofilm 생성 능력, 산성 환경에서의 생장, 용혈성을 관찰하였다. 연구 결과, 14개의 분리균주는 polyethylene에서 biofilm을 생성하였으며 영양성분이 풍부할수록 biofilm을 강하게 생성하였다. 영양성분의 종류에 따른 biofilm 생성 능력 차이는 뚜렷한 경향을 나타내지 않았으며, Cronobacter spp.의 biofilm 생성 능력은 균주별 특성에 의한 것으로 판단된다. 다양한 pH 환경에서 생장 특성을 관찰한 결과, 14개 중 7개의 균주(50%)가 pH 4.1에서도 생장할 수 있어 국외 균주에 비해 내산성이 비교적 낮게 나타났다. 한편 분리된 모든 균주에서 용혈성은 관찰되지 않았다. 본 연구는 국내 영 유아용 식품에서 분리된 Cronobacter spp.의 생리 생화학적 특성을 제시하였으며 이는 향후 Cronobacter spp. 연구 및 관련 식품산업의 저감화 기술 개발에 기초 자료로 활용될 수 있을 것으로 판단된다.