Cultural characteristics of Strptomyces griseolus isolated from the soil were investigated. This strain was disclosed to utilize D-xylose, and D-glactose in preference order as a carbon source with the formation of glucose isomerase. The addition of sweet potato starch also proved effective promoting the total enzyme activity measured at 29% higher than the control. Corn cob, one of waste agricultural resources, was hydrolyzed in 2~3% $H_2SO_4$ solution at $100^{\circ}C$, 3~5 hours to produce a xylose syrup which gave rise to the recovery of 19.9% in a batch system and 28.2% in a repeated system. By the addition of both 2% of xylose syrup(Be'28) prepared by and us 65% of corn steep liquor (total nitrogen 1.2%), enzyme induction was maximized. The enzyme activity was stimulated by the xylose and the cell growth by the C.S.L. Also, remarkable increase of enzyme activity was noticed by the addition of protein acid hydrolysate 86.2% higher than the control. $QO_2$ of the biomass cultured in 30L capacity jarfermentor recorded low oxygen requirement of 251.2 1/hr. Maximum activity of glucose isomerase was observed noted at the 9th hour after inoculation which is 2 hours faster than the stationery was observed noted at the 9th hour after inoculation which is 2 hours faster than the stationery phase of the biomass growth. Glucose isomerase from the strain was activated by adding the $Co^{++}\;and\;Mg^{++}$ with optimum temperature of $73^{\circ}C$ and pH of 7.2. Conversion ratio of 60% glucose to frutose was 42.5% after 70 hours reaction.
Kim Sang-Dae;Kim Ji-Hye;Kim Jong-Bong;Han Yeong-Hwang
Korean Journal of Microbiology
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v.41
no.3
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pp.164-167
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2005
The culture condition and medium composition for the enhanced mycelial growth of Lepista nuda DGUM 26501 were investigated. The optimal temperature and pH for the mycelial growth were $24^{\circ}C$ and $7.0\~8.0$, respectively. The partial pressure of oxygen for the enhanced mycelial growth was more than $10\%\;O_2$. When Czapek-Dox medium was used as a minimal medium, manitol and xylitol were very good carbon sources. Organic nitrogen sources were better than inorganic ones for mycelial growth. As the nitrogen source tested, com steep liquor, soytone and protease peptone were the best as a source of organic nitrogen sources. When ammonium phosphate as phosphorus sources was used, the enhanced mycelial growth was shown. Nicotinic acid was proved to be the most appropriate source of vitamin. After the mycelia of L. nuda DGUM 26501 was cultivated at $24^{\circ}C$ for 10 days in LNM broth (pH 7.0), the activities of extracellular enzyme were determined. The specific activity of $\alpha-amylase$ was much higher than those of other enzymes. However, little or no enzyme activities of $\beta-glucosidase$, CMCase, laccase and lipase were found.
S. chibaensis J-59 produced an extracellular xylanase in a CSL medium composed of 1.5% com steep liquor, 0.1% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.012% $CoCl_2{\cdot}6H_2O$, and 0.15% glucose containing xylan. but it did not produce in the culture medium containing xylose. The production of enzyme reached to a maximum level (0.83 uints/ml) when bacteria were cultured in 2.5 l jar fermentor for 48hrs at $30^{\circ}C$ and pH 7.0. Furthermore, S. chibaensis J-59 produced an intracellular glucose isomerase in a medium containing xylan and/or xylose. Xylanase was purified 29-fold over the culture supernatants of S. chibaensis J-59 by ammonium sulfate fractionation, chromatography on DEAE-Sephadex A-50, and gel filtration on Sephadex G-200. The purified enzyme is a monomeric enzyme with a native molecular mass of 25 kDa and a subunit molecular mass of 25 kDa. The purified enzyme requires $Mg^{2+}$ for activity, $Ca^{2+}$, $Co^{2+}$ is not an inhibitor but inhibit by $Fe^{3+}$, $Hg^{2+}$, and $Cu^{2+}$, sodium dodecyl sulfate, N-bromosuccinide. Pattern of hydrolysis demonstrated that the xylanase was an endo-splitting enzyme able to break down birchwood xylan at random giving xylobiose, xylotriose and xylotetrose as the main end products.
For screening thermostable $\alpha$-amylase from thermophiles, various samples from extreme environments such as hot spring and sewage near them, and compoat, wereexamined microbial growth in enrichment culture medium at 55$\circ$C on the assumption that enzymes from thermophiles are inevitable thermostable. One strain showing higher $\alpha$-amylase activity was pure cultured and designated as Bacillus sp. TR-25 from the results of morphological, cultural and physiological characteristics. The most important carbon sourses for the enzyme production were soluble starch, dextrin, potato starch and corn starch. Glucose and fructose had a catabolite repression on the enzyme production. The good nitrogen sources for the enzyme production were yeat extract, nutrient broth, tryptone, corn steep liquor and ammonium sulfate. The enzyme production was accelerated by addition of CaCl$_{2}$. $\cdot $ H$_{2}$O. The optimal medium composition for the enzyme production was soluble starch 2.0%, yeast extract 0.55, CaCl$_{2}$ $\cdot $ 2H$_{2}$O 0.015, Tween 80 0.001%, pH8.0, respectively. In jar fermenter culture, this strain shows a rapid growth and required cheaper carbon and nitrogen source. These properties are very useful to fermentation industry. The $\alpha$-amylase of this strain demonstrated a maximum activity at 80$\circ$C, pH 5.0, respectively. And calcium ion did not improve thermostability of the enzyme. At 10$0^{\circ}C$, this enzyme has 235 of relative activity. Transformation was carried out by thermophilic Bacillus sp. TR-25 genomic DNA. As a result, the transformant has increased thermostable $\alpha$-amylase activity.
We have investigated industrial media for lactic acid fermentation to reduce the cost of nitrogen sources. Corn steep liquor (CSL) was successfully used at 5% (v/v) in batch fermentations. Use of soluble CSL improved the productivity about 20% with an advantage of clearer fermentation broth. Yeast extract-complemented CSL improved the productivity about 20% with an advantage of clearer fermentation broth. Yeast extract-complemented CSL media further increased the increased the productivity. It was found that 3.1 g/L yeast extract and 5% CSL could be an effective substitute for 15 g/L yeast extract in 10% glucose medium. Brewing yeast was also used as a sole nitrogen source equivalent to 5% CSL. A continuous culture coupled with cell-recycle by microfiltration at the dilution rate of 0.05-0.065 h-1 led to the highest lactic acid productivity. Lactic acid was recovered by electrodialysis from the cell free broth. Depleted cell free broth supplemented with 5-10 g/L of yeast extract performed reasonably in batch and continuous cultures. Reuse of the fermentation broth may reduce the cost of raw materials as well as minimize the fermentation wastes.
In this study, the cultural medium used for the efficient production of $\gamma$-PGA with a newly isolated Bacillus sp. RKY3 was optimized. It was necessary to supplement the culture medium with L-glutamic acid and an additional carbon source in order to induce the effective production of $\gamma$-PGA. The amount of $\gamma$-PGA increased with the addition of L-glutamic acid to the medium. The addition of 90 g/L L-glutamic acid to the medium resulted in the maximal yield of $\gamma$-PGA (83.2 g/L). The optimum nitrogen source was determined to be peptone, but corn steep liquor, a cheap nutrient, was also found to be effective for $\gamma$-PGA production. Both the $\gamma$-PGA production and cell growth increased rapidly with the addition of small amounts of $K_2HPO_4$ and $MgSO_4\cdot7H_{2}O$. Bacillus sp. RKY3 appears to require $Mg^{2+}$, rather than $Mn^{2+}$, for $\gamma$-PGA production, which is distinct from the production protocols associated with other, previously reported bacteria. Bacillus sp. RKY3 may also have contributed some minor $\gamma$-PGA depolymerase activity, resulting in the reduction of the molecular weight of the produced $\gamma$-PGA at the end of fermentation.
Statistical medium optimization has been carried out for the production of succinic acid in anaerobic fermentations of Actinobacillus succinogenes. Succinic acid utilized as a precursor of many industrially important chemicals is a fourcarbon dicarboxylic acid, biosynthesized as one of the fermentation products of anaerobic metabolism by A. succinogenes. Through OFAT (one factor at a time) experiments, corn steep liquor (CSL), a very cheap agricultural byproduct, was found to have significant effects on enhanced production of succinic acid, when supplemented along with yeast extract. Hence, using these factors including glucose as a carbon/energy source, interactive effects were investigated through $2^n$ full factorial design (FFD) experiments, showing that the concentration of each component (i.e., glucose, yeast extract and CSL) should be higher. Further statistical experiments were conducted along the steepest ascent path, followed by response surface method (RSM) in order to find out optimal concentrations of each constituent. Consequently, optimized concentrations of glucose, yeast extract and CSL were observed to be 180 g/L, 15.08 g/L and 20.75 g/L respectively (10 g/L of $NaHCO_3$ and 100 g/L of $MgCO_3$ to be supplemented as bicarbonate suppliers), with the estimated production level of succinic acid to be 92.9 g/L (about 3.5 fold higher productivity as compared to the initial medium). Notably, the RSM-estimated production level was almost similar to the amount of succinic acid (92.9 g/L vs. 89.1 g/L) produced through the actual fermentation process performed using the statistically optimized production medium.
To find antitumor components of Lyophyllum decastes, the mycelia of L. decastes were cultured in artificial media and a new antitumor component which showed potent antitumor activity against sarcoma 180 implanted in mice, was isolated and named 'Lyophyllan A'. Lyophyllan A was composed of a polysaccharide moiety (86%) and a protein moiety (2%). The polysaccharide moiety was found to be a heteroglycan which consisted of glucose (48.1%), mannose (30.8%), galactose, xylose and fucose. The protein moiety contained 18 amino acids. Cultural characteristics of L. decastes were investigated by shake culture method. The best result was obtained when L. decastes was cultured in medium glucose 50g, peptone 10g, corn steep liquor 30ml, $KH_2PO_4$ 0.87g, $MgSO_4$$7H_2O$ 0.5g, $CaCl_2$ 0.3g, $FeSO_4{\cdot}7H_2O$ 10mg, $MnCl_2{\cdot}4H_2O$ 7mg, $ZnSO_4{\cdot}7H_2O$ 4mg and $CuSO_4{\cdot}5H_2O$ 1mg per one liter at $26^{circ}C$, 180rpm, for 9 days.
Alginate and alginate-derived oligomannuronate enhanced penicillin production in shake flask and fermentor cultures of Penicillium chrysogenum Wis 54-1255 (containing a single copy of the penicillin gene cluster) and in the high producter strain P. chrysogenum AS-P-99 (containing multiple copies of the penicillin gene cluster). Alginate was not used as a single carbon source by P. chryogenum. The stimulatory effect on penicillin production was observed in a defined medium and, to a lower extent, in a complex production medium containing corn steep liquor. Alginate-supplemented cells showed higher transcript levels of the three penicillin biosynthetic genes, pcbAB, pcbC, and penDE, than cells grown in the absence of alginate. The promoters of the pcbAB, pcbC, and penDE genes were coupled to the reporter lacZ gene and introduced as monocopy constructions in P. chrysogenum Wis 54-1225 npe10 by targeted integration in the pyrG locus; the reporter ${\beta}$-galactosidase activity expressed from the three promoters was stimulated by alginate added to the culture medium of the transformants. These results indicate that the stimulation of penicillin production by alginate was derived from an increase in the transcriptional activity of the penicillin biosynthesis genes. The induction by alginate of the transcription of the three penicillin biosynthetic genes is good example of the coordinated induction of secondary metabolism genes by elicitors of plant (or microbial) origin.
This study was targeted to isolate and characterize a bacterium producing lactic acid in a large amount. Lactic acid bacteria of about fifty strains were isolated from kimchi, a Korean traditional fermented vegetable food. Strain KH-1 of them was most effective in the lactic acid production and showed 99% homology with Lactobacillus casei from analysis of 16S rRNA sequencing. The conversion ratio of lactic acid from glucose by 1. casei KH-1 was 98% in anaerobic condition, and the lactic acid was composed as racemic mixture of D(-)-and L(+)-lactic acid, 7% and 93%, respectively. This result indicated that L. casei KH-1 was a homofermentative bacterium mainly producing L(+)-lactic acid. The strain KH-1 used glucose as a preferential substrate but not utilized lactose. In investigation of more inexpensive nitrogen source for cultivation of strain KH-1 using industrial MRS medium, when yeast extract and corn steep liquor were used at the ratio of 1 to 1, the molar yield of lactic acid produced per mole of glucose(Yp/s) was 1.09.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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