Mechanical stimulation is known to activate several cellular signal transduction pathways, leading to the induction of signaling molecules and extracellular matrix (ECM) proteins, thereby modulating cellular activities, such as proliferation and survival. In this study, primary human dermal fibroblasts (HDFs) were seeded onto chitosan-based scaffolds, and then cultured for 3 weeks in a bioreactor under a cyclic strain of 1 Hz frequency. Compared to control samples cultured under static conditions, the application of a cyclic strain stimulated the proliferation of HDFs in I week, and by week 3 the thickness of the cell/scaffold composites increased 1.56 fold. Moreover, immunohistochemical staining of the culture media obtained from the cell/scaffold samples subjected to the cyclic strain, revealed increases in the expression and secretion of ECM proteins, such as fibronectin and collagen. These results suggest that the preconditioning of cell/scaffold composites with a cyclic strain may enhance the proliferation of HDFs, and even facilitate integration of the engineered artificial dermal tissue into the host graft site.
실크 피브로인은 생체적합성과 비독성 및 비면역 특성을 갖는 생분해성 천연고분자로서, 콜라겐의 가수분해로부터 유래되는 천연물질인 젤라틴을 이용하여 실크 피브로인/젤라틴 지지체를 제조하였다. 지지체의 최적화 조건을 찾기 위하여 실크 피브로인의 양과 젤라틴 및 글루타알데히드의 농도를 다르게 하여 제조하였다. 실크 피브로인/젤라틴 지지체는 SEM과 DSC 및 수분흡수성 평가를 통해 특성분석을 하였으며 세포생존율 및 증식률은 WST 방법을 통해 평가되었다. 이 결과 실크 피브로인 0.3 g 지지체에 8% 젤라틴 및 1% 글루타알데히드를 함유한 지지체에서 세포 부착 및 증식을 위해 가장 적합한 특성을 제공한다고 제안되었다. 결과적으로, 실크 피브로인/젤라틴 지지체는 잠재적인 세포 전달체 및 조직공학을 위한 구조 기반역할을 할 수 있을 것으로 사료된다.
Lee, Dong-Hwan;Kim, Il-Kyu;Cho, Hyun-Young;Seo, Ji-Hoon;Jang, Jun-Min;Kim, Jin
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제44권2호
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pp.79-85
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2018
Objectives: The aim of this study was to evaluate the effects of herbal extracts on bone regeneration. Two known samples were screened. Materials and Methods: We previously established a rat calvaria defect model using a combination of collagen scaffold and herbal extracts. An 8 mm diameter trephine bur with a low-speed dental hand piece was used to create a circular calvaria defect. The experimental group was divided into 4 classifications: control, collagen matrix, Danshen with collagen, and Ge Gan with collagen. Animals in each group were sacrificed at 4, 6, 8, and 10 weeks after surgery, and bone regeneration ability was evaluated by histological examination. Results: Results revealed that both Danshen and Ge Gan extracts increased bone formation activity when used with collagen matrix. All groups showed almost the same histological findings until 6 weeks. However, after 6 weeks, bone formation activity proceeded differently in each group. In the experimental groups, new bone formation activity was found continuously up to 10 weeks. In the Danshen and Ge Gan groups, grafted materials were still present until 10 weeks after treatment, as evidenced by foreign body reactions showing multinucleated giant cells in chronic inflammatory vascular connective tissue. Conclusion: Histological analyses showed that Danshen and Ge Gan extractions increased bone formation activity when used in conjunction with collagen matrix.
Background: Radiation therapy is widely employed in the treatment of head and neck cancer. Adverse effects of therapeutic irradiation include delayed bone healing after dental extraction or impaired bone regeneration at the irradiated bony defect. Development of a reliable experimental model may be beneficial to study tissue regeneration in the irradiated field. The current study aimed to develop a relevant animal model of post-radiation cranial bone defect. Methods: A lead shielding block was designed for selective external irradiation of the mouse calvaria. Critical-size calvarial defect was created 2 weeks after the irradiation. The defect was filled with a collagen scaffold, with or without incorporation of bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) (1 ㎍/ml). The non-irradiated mice treated with or without BMP-2-included scaffold served as control. Four weeks after the surgery, the specimens were harvested and the degree of bone formation was evaluated by histological and radiographical examinations. Results: BMP-2-treated scaffold yielded significant bone regeneration in the mice calvarial defects. However, a single fraction of external irradiation was observed to eliminate the bone regeneration capacity of the BMP-2-incorporated scaffold without influencing the survival of the animals. Conclusion: The current study established an efficient model for post-radiation cranial bone regeneration and can be applied for evaluating the robust bone formation system using various chemokines or agents in unfavorable, demanding radiation-related bone defect models.
본 연구는 키토산 알지네이트 수화겔을 사용하여 제작된 연골세포의 3차원 구조를 유지하며 생물학적, 생리학적인 기능을 유지하는데 적합한 poly (L-Lactic-co-${\varepsilon}$-Caprolactone) (PLCL) 지지체의 효과에 대한 연구이다. 체내에서 수화겔은 단독으로 지지체 역할을 하기에는 부하를 견디기에 약하다. 이에 본 연구에서는 연골세포와 유사한 세포, 세포외 기질의 3차원적 구성을 만들기 위해 PLCL 지지체와 수화겔을 사용하여 합성 지지체를 제작하였다. 염화나트륨을 사용한 입자 침출 기법으로 85%의 다공성, $300-500{\mu}m$ 크기의 구멍을 가진 탄성력 높은 지지체를 제작하였다. 소의 연골세포와 키토산 알지네이트 겔 혼합물이 PLCL 지지체에 적용되었고 대조군의 알지네이트와 비교 연구하였다. 키토산 알지네이트 수화겔과 연골세포가 혼합된 경우에 알지네이트 단독 사용에 비해 세포 성숙, 증식, 세포외 기질의 합성, sGAG 생성과 II 형 콜라겐의 발현 등의 효과가 좋은 것으로 확인되었다. 본 연구 결과를 통해 PLCL 지지체에 연골세포와 키토산 알지네이트 겔 혼합물을 적용할 경우 세포 증식과 기질의 합성에 적합한 환경을 만들 수 있으며 연골의 복구와 재생에 효과적으로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
Vocal fold scarring is an intractable phonosurgical condition. The number of patients with vocal fold scars is increasing with the aging of society and with the increasing application of laryngeal microsurgery. Many methods are available to treat these, including voice therapy, stem cells, regenerative scaffolds, and growth factors. However, no standard treatment strategy has yet been established, and novel techniques are required. Basic fibroblast growth factor has been shown to be effective for the treatment of mild chronic vocal fold scarring. The combined use of basic fibroblast growth factor and regenerative scaffolds is currently under investigation. Here, we report a female patient in whom vocal fold scarring developed after two laryngeal microsurgeries. We performed laryngeal microsurgery to remove the scar tissue and used basic fibroblast growth factor and a collagen scaffold to promote healing. The patient's voice quality was greatly increased, and she was content with her voice after 2 years of follow-up. This is the first report of this methodology in Korea and is presented along with a review of the literature.
양막은 다양한 생체재료로 이용되어 왔으며 생체적합성과 환부의 치료효능이 우수한 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 양막을 갈아 양막스폰지를 제조하고 중간엽줄기세포를 배양한 뒤 누드마우스이식을 통하여 콜라젠스폰지와 비교하여 골형성유도능에 대한 연구를 실시하였다. 연구결과 세포의 부착과 증식면에서는 두 시료가 유사하였으나, 체내에 이식한 결과 양막스포지군에서 좀 더 많은 콜라젠 분비와 칼슘이 침착되었음을 확인하였다. 그리고 면역화학염색 결과 골형성 시 필요한 오스테오칼신과 오스테오넥틴이 좀 더 발현된 것을 관찰할 수 있었다. 따라서 양막은 골형성유도를 향상시킬 수 있는 가능성이 있음을 알 수 있었다.
Purpose: Numerous materials, both autologous and nonautologous, have been used for augmentation of sunken areas, but they have their own limitations. The purpose of this study is to determine the histologic response and volume change of the xenogenic collagen-based scaffold($Terudermis^{(R)}$) to the transfer into a subcutaneous soft tissue location in vivo rabbit model. Methods: Eighteen New Zealand white rabbits were used. Three $1.2{\times}1.2cm$ sized subcutaneous pockets were created on the dorsal surface of each ear. $1{\times}1cm$ sized collagen matrix($Terudermis^{(R)}$) and autologous dermal graft were implanted into each pocket. Full thickness of ear was harvested in 3 days, 1, 2, 4 weeks, 3, 6 months after implantation. Results: Histological analysis of implants demonstrated progressive neovascularization, fibroblast infilteration, neocollagen bundle synthesis and organization, and few foreign body reaction. The thickness of the collagen matrix in 3 days after the operation was 87.69% of the thickness of the collagen matrix in wet state. Then it decreased to 30.17% in 6 months after the operation. The rate of decrease was similar at all points at the same time compared with autologous dermal graft. Conclusion: Our experimental study suggests that $Terudermis^{(R)}$ could be a safe material as an implant for permanent augmentation in subcutaneous tissue. However the choice of graft for augmentation should be remained to the clinical situations.
To induce bone formation at ectopic site by tissue engineering and gene therapy, we transplanted collagen sponges containing rhBMP-7 transduced HEK 293 cells in the hypodermis of nude mice. Bone formation was investigated by histological and electron microscopic method at 3, 6, and 9 weeks after transplantation. At 9 weeks after transplantation, eosinophilic bony tissue was observed in the implanted collagen sponge and was confirmed as bone tissue by Von Kossa stain. In the transmission electron microscopic observation, the cells in newly formed bone tissue had eccentrically located nucleus and well developed rough endoplasmic reticulum (rER). Therefore, the cells were evaluated as osteoblasts. Those results suggest that it is possible to form a bone tissue in the ectopic site by transplantation of rhBMP-7 transduced HEK 293 cells. This will be contributed to push more advanced gene therapy for bone formation. However, the HEK 293 cell is unable to apply to the clinical gene therapy. Therefore it is worth to find more compatible cells for clinical application. In addition, collagen sponge is considered as an excellent scaffold and/or carrier for gene therapy and a good biomaterial for tissue engineering.
중간엽 줄기세포(MSCs)는 미분화 상태의 세포로써, 섬유아세포, 연골아세포, 골아세포 등으로 분화하여 인체의 근골격계를 구성하며, 기계적 자극은 중간엽 줄기세포 분화를 결정하는 중요한 인자로 알려져 이다. 본 연구에서는, 세포가 생존하기 위한 환경을 제공하고, 세포가 기계적 자극조건에 따라 분화할 수 있도록 하는 바이오리엑터를 제안하엿다. 또한, 중간엽 줄기세포를 배양하기 위한 세포 지지체로써 PU(polyurethane)로 제작된 지지체를 제안하였다. 세포 분화를 확인하기 위하여, 중간엽 줄기세포를 PU 지지체에 seeding한 후, 바이오리엑터를 이용하여 기계적 자극에 의한 세포의 분화를 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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