수도 약배양의 효율을 높이기 위하여 callus 유기와 녹색체 출현율에 영향하는 화분의 발육단계, 화분의 저온처리와 기관 및 배지의 영향에 대한 일련의 실험을 수행하였으며 이에서 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 단핵기의 화분에서 callus 유기율이 높았으며 이때는 대체로 엽신간장이 5~8cm에 해당되나 품종에 따라 차이가 있다. 2. 이삭을 상, 중, 하로 나누어 조사한 결과 엽이간장이 5~8cm의 것은 상부와 중간부분에 단핵기에 해당되는 것으로 나타났고 9~10cm 정도의 것은 중부와 하부 부분이 단핵기에 해당하는 것으로 나타났다. 3. 일반적으로 저온처리는 8$^{\circ}C$에서 12$^{\circ}C$가 callus 유기에 알맞는 것으로 나타났다. 그러나 온도에 대한 반응은 품종에 따라 차이가 있어 4$^{\circ}C$에서 callus 유기가 잘된 것도 있었다. 4. 저온 처리기간은 일반적으로 8~12일 정도에서 callus 유기가 잘 되었으나 품종간 차이가 있다. 5. 본 실험에서는 N6D 배지보다 N6 배지에서 callus 유기율이 높았다. 6. 대체로 녹색체 출현율은 4$^{\circ}C$와 8$^{\circ}C$로 처리한 것이 12$^{\circ}C$ 처리보다 높았다. 그러나 품종간 차이가 있었다. 7. 녹색체 출현에 좋은 결과를 주었던 온도 처리기간은 대체로 8~12일로 나타났다. 8. 본 실험에서 녹색체 출현율은 N6 배지보다 개량 MS 배지에서 2배 정도 높았다.
Mitotic gynogenesis was induced in the far eastern catfish, Silurus asotus using UV-irradiated heterospecific sperm and cold shock treatment. Eggs were activated with the sperm of mud loach, Misgurnus mizolepis which has been irradiated with UV at dose of 9,000 ergs/$mm^2$. To determine the optimum duration required to prevent the first cleavage, a cold shock at 4$^{\circ}C$ with duration of 20, 30 or 40 min was applied to the eggs 50 min after activation. To induce diploidization of mitogenesis, the most effective protocol was to apply cold shock to 50-min old (after activation) eggs at 4$^{\Circ}C$ for 30min.
In spite of potential benefits of anther culture, low productivity of plant regeneration in some genotypes; e.g. tonsil and indica rice, is one of the major obstacles for practical use of anther culture. This study was conducted to improve cold shock method and carbohydrate source for increasing the efficiency of anther culture in rice. The most common carbon source, sucrose was replaced to maltose, which has two molecules of glucose. Maltose increased callus induction 1.4-to 1.8-fold higher in japonica rice, 3.2-to 11.6-fold in tongil types and 2.7-fold in indica rice IR50. Callus induction was increased from 0.2% to 12.5% in maltose medium compared to the medium supplemented with sucrose plus glucose in indica rice "Tetep". A simple procedure of vacuum packaging of panicles during cold shock treatment prolonged not only anther viability more than 15 days but also increased callus induction more than 2-fold compared to open-air storage (conventional method). Combining of above two methods, callus induction was increased 28 to 56% in japonica, 13 to 33% in tonsil type and 12 to 31% in indica rice. Plant regeneration was increased 14 to 35% in japonica, 10 to 20% in tonsil and 4 to 15% in indica rice, respectively.
Bacillus subtilis에 존재하는 DEAD-box RNA helicase 유전자의 결손이 저온 충격에 민감성을 보이는지를 조사하였다. 저온 충격에 민감한지를 알아 보기 위하여 대수기에($O.D_{600}$=0.5-0.6) 있는 세포를 $15^{\circ}C$도 낮추어 저온충격을 가하여 생장하는 정도를 조사하였다. DEAD-box RNA helicase 유전자 ydbR, yfmL, yqfR, deaD의 결손 균주들이 저온충격을 가하였을 때 ydbR 결손 균주의 생장이 야생형 균주에 비해 5배 정도 현저히 감소하였으나, 다른 DEAD-box RNA helicase 유전자의 (yfmL, yqfR, deaD) 결손은 야생형 균주와 비슷한 생장을 보였다. 저온에서의 유전자 발현을 알아보기 위하여 Northern blot으로 mRNA 양을 알아본 결과 $37^{\circ}C$에 비해 $15^{\circ}C$에서 ydbR과 yqfR의 mRNA전사물 증가를 확인할 수 있었고, 반면에 yfmL과 deaD의 전사 증가는 관찰되지 않았다. $37^{\circ}C$에서 $15^{\circ}C$로 저온 충격을 가하면 ydbR mRNA 양의 뚜렷한 증가를 확인하였고, 전사 억제제인 rifampicin를 처리하여 ydbR mRNA의 양을 조사하였을 때 $15^{\circ}C$ 조건에서는 mRNA 양이 거의 유지하는 반면에 $37^{\circ}C$ 조건에서는 급격한 mRNA의 감소가 일어나 전사과정에서 유도되기 보다는 전사 후 전사물의 안정에 기인하는 것으로 보인다. 이와 관련하여 ydbR 유전자의 5' UTR (untranaslated region) 부근에서 csp (cold shock protein) 유전자에서 관찰되는 cold box element를 확인하였고, ydbR이 저온 충격 조건에서 발현되는 과정이 csp와 유사하게 전사물의 안정성에 기인함을 알 수 있었다.
Antifreeze proteins (AFP) inhibit growth and recrystallization of ice, and permit organisms to survive in cold environments. The AFP from an Antarctic bacterium, Flavobacterium frigoris PS1, FfIBP (Flavobacterium frigoris icebinding protein), was produced in E. coli using a cold shock induction system. The culture temperature was shifted from $37^{\circ}C$ to $15^{\circ}C$ and a 20 L culture scale was used. The final weights of dried cell and FfIBP were estimated to be 126 g and 8.4 g, respectively. The thermal hysteresis (TH) activity ($1.53^{\circ}C$) of the produced FfIBP was 3.6-fold higher than that of the LeIBP (Leucosporidium ice-binding protein) produced in Picha. The current study demonstrates that large-scale production of FfIBP was successful and the result could be extended to further application studies using recombinant AFPs.
참전복의 3배체 유도를 위하여 수정 12분후 및 32분 후에 저온$(0^{\circ}C\;,\;3^{\circ}C)$해수 혹은 고온$(35^{\circ}C\;,\;40^{\circ}C)$ 해수 속에서 여러 처리 지속 시간으로 3배체 유도 실험을 한 결과, 수정율은 실험군 사이에 유의한 차가 없었다. (P>0.05). 그러나 부화율과 정상발생율은 3배체구간 2배체 대조구보다 유의하게 낮았다. (P<0.05). $40^{\circ}C$의 고온처리구에서 수정율은 매우 낮았고$(0\~2.7\%)$ 부화되는 유생은 없었다. 3배체 유도율은 염색체수를 직접 계수해서 구했는데 가장 높은 3배체 유도율은 수정 12분 후에 $3^{\circ}C$ 해수에 15분 동안 처리했을 때 $(84.0\%)$였다. 참전복 2배체의 염색체 수는 2n=36이었고 3배체의 염색체 수는 3n=54이었다.
본 연구에서는 저온에서 발현이 유도되고 지속적으로 발현된다고 알려진 대장균의 6개의 유전자 (frdA, glpB, hypE, katG, nupG, ompT)에 대한 promoter의 단백질 생산성을 알아보기 위하여 GFP를 reporter 단백질로 이용하여 각각의 promoter들에 대한 $37^{\circ}C$와 $15^{\circ}C$에서의 발현도와 저온 유도성에 대하여 고찰하였다. nupG promoter의 경우 $37^{\circ}C$와 $15^{\circ}C$ 모두에서 지속적인 유전자 발현도를 보였으나 promoter에 의한 저온 유도성은 없는 것으로 판별되었다.
가잠의 Virus다각체의 저온 및 고온처리에 대한 유발현상을 조사하기 위하여 5령기잠을 공시하고 저온(5$^{\circ}C$, 24hrs.), 고온(Hot water bath 에 4$0^{\circ}C$, 5min으로 침지 및 Oven 내에 4$0^{\circ}C$, 30min.으로 단독 및 복합처리하여 핵다각체병(N) 중장형 다각체병(C), 병발형(NC) 유발률을 조사하고 동시에 핵다각체병(N)과 중장형다각체병(C)대하여 Giemsa solution 염색법에 의한 염색성을 조사하였다. 1. 냉장(5$^{\circ}C$, 24 시간) 처리와 고온(Hot water bath, 4$0^{\circ}C$, 5분간) 처리를 한 핵복다각체병(N)은 중장형다각체병(C)보다 그 유발률이 적고 또 복합처리에 있어서도 중장형다각테병(C)의 유발율은 핵다각체병(N)보다 많다. 2. 냉장처리후 고온(4$0^{\circ}C$, 30분간 건열) 처리, 반대로 고온처리후 냉장처리한 Virus다각체의 유발률도 중장형다각체병(C) 보다 핵형다각예병(N)의 유발현상이 현저하게 많이 나타났다. 3. Giemsa solution 염색법에 의한 핵다각체병(N)의 다각체는 염색이 되지 않으나 중장형다각예병(C)의 다각체는 잘 염색되어 염색성에 의하여 구별할 수 있었다.
Kim, Su-Jung;Kim, Jong-Hwan;Park, Jae-Yong;Kim, Han-Taek;Jeong, Seon-Ju;Ha, Yeong-Lae;Yun, Han-Dae;Kim, Jeong-Hwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권5호
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pp.1071-1074
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2004
The effect of preadaptation at low temperature on cryoprotection was studied for Lactobacillus paraplantarum C7, a bacteriocin producer isolated from kimchi. L paraplantarum C7 cells in their log growth phase were incubated at $15^\circ{C}$, $10^\circ{C}$, or $5^\circ{C}$ for 2, 4, and 6 h, respectively, before being frozen at $-70^\circ{C}$. After 24 h of freezing, viable cells were counted after brief thawing. The freezing-thawing cycles were repeated three more times. Cells preadapted at $10^\circ{C}$ or $5^\circ{C}$ before freezing survived better than control cells, but preadaptation at $15^\circ{C}$ did not confer cryoprotection. Chloramphenicol addition did not destroy the cryoprotection, indicating that protein synthesis was not required for the development of cryoprotection. SDS-PAGE showed induction of a 6.5-kDa protein, a major cold-shock protein, in preadapted cells.
넙치 양식의 생산성을 높이는 방법의 일환으로 수컷에 비해 성장이 빠른 암컷만의 생산을 위하여 먼저 참돔 정자를 이용한 자성발생성 이배체의 유도 조건, 성장, 생존율 및 성비를 조사하였다. 그 결과 자성발생성 이배체 넙치는 $4,800ergs/mm^2$의 자외선으로 불활성화 시킨 참돔 정자와 성숙된 넙치 난을 인공 수정시켜 수정 후 3분부터 수온 $2^{\circ}C$에서 45분 동안 제 2극체 방출의 억제에 의하여 유도되었다. 유도된 자성발생성 이배체의 성장과 생존율은 부화후 200일째까지는 대조군과 유의차가 없었으나, 부화후 300일째는 자성발생성 이배체의 성장이 대조군보다 양호하였다. 또한 자성발생성 이배체의 암컷 비율은 $92.1\%$로 대조군의 $43.6\%$에 비하여 월등히 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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