Thermal resistance and heat activation characteristics of Clostridium botulinum ATCC 25763 spores were evaluated. The effects of nisin and pH on the activation and subsequent germination were also investigated. Spores of C. botulinum were not inactivated by heat treatments up to $92^{\circ}C$ for 2 hr. Heat treatment at $85^{\circ}C$ for 90 min was selected as the optimal activation condition based on monitoring subsequent germination. L-alanine alone or in combination with L-cysteine was not sufficient to germinate the spores of this strain. Tryptone-Peptone- Glucose-Yeast extract (TPGY) broth supplemented with L-alanine was used as a suitable germination medium. Decreasing pH of activation suspension increased the degree of phase darkening, i.e., germination. In addition, the presence of nisin during activation increased the degree of phase darkening. The majority of spore populations were dormant at a pH of less than 2.8, and these populations required heat activation to increase the culturability on TPGY agar medium. However, extended heating in the presence of nisin at pH 2.8 decreased the spore count; however, heat activation was less necessary at pH 3.4, compared at pH 2.8.
An enrichment semi-nested PCR procedure was developed for detection of Clostridium botulinum types A, B, E, and F. It was applied to sediment samples to examine the prevalence of C. botulinum in the Korean environment. The first pair of primers for the semi-nested PCR was designed using a region shared by the types A, B, E, and F neurotoxin gene sequences, and the second round employed four nested primers complementary to the BoNT/A, /B, /E, and /F encoding genes for simultaneous detection of the four serotypes. Positive results were obtained from the PCR analysis of five of 44 sediments (11%) collected from Yeong-am Lake in Korea; all were identified as deriving from type B neurotoxin (bontb) genes. Two of the C. botulinum type B organisms were isolated, and their bontb genes sequenced. The deduced amino acid sequences of BoNT/B showed 99.5 and 99.8% identity with the amino acid sequence of accession no. AB084152. Our data suggest that semi-nested PCR is a useful tool for detecting C. botulinum in sediments, and renders it practicable to conduct environmental surveys.
botulinum toxin type A는 anaerobic bacterium clostridium botulinum에서 유래된 poly peptide neurotoxin으로서 사시, 안면연축, 수부다한증등에 치료목적으로 안정적으로 사용되어오다 최근에는 이마주름, 눈가주름등 주름살의 개선 목적으로 널리 사용되어 오고있다. 특히 턱얼굴외과 영역에서는 이러한 주름살의 개선이외에도 사각턱, 안면 신경의 이상으로 인한 안면 비대칭등 적용범위가 상당히 넓고 치료효과도 만족할 만하다고 하겠다. 이에 턱얼굴외과의사 나아가 치과의사들의 많은 사용을 기대하여 botulinum toxin 사용의 역사적 배경, 약리 및 작용기전, 가능한 합병증, 턱얼굴영역에서의 적용가능성 등에 대해 알아보고자 한다.
Botulinum toxins are neurotoxic modular proteins composed of a heavy chain and a light chain connected by a disulfide bond and are produced by Clostridium botulinum. Although lethally toxic, botulinum toxin in low doses is clinically effective in numerous medical conditions, including muscle spasticity, strabismus, hyperactive urinary bladder, excessive sweating, and migraine. Globally, several companies are now producing products containing botulinum toxin for medical and cosmetic purposes, including the reduction of facial wrinkles. To test the efficacy and toxicity of botulinum toxin, animal tests have been solely and widely used, resulting in the inevitable sacrifice of hundreds of animals. Hence, alternative methods are urgently required to replace animals in botulinum toxin testing. Here, the various alternative methods developed to test the toxicity and efficacy of botulinum toxins have been briefly reviewed and future perspectives have been detailed.
This experiment was carried out to develop long-term preservable meat products by controlling a water activity which has a potential inhibitory effects on the growth of microorganism and germination of spore. For this purpose the accuracy of instrument for the measurement of water activity, electric hygrometer was used for this study as well as water activity of final products were investigated according to the various amounts of different kinds of additives. Spore of Bacillus spp, Clostridium sporogenes and Cl. botulinum were inoculated to the meat products with different aw and their growth states in $25^{\circ}C$ were observed to find out the lowest aw which inhibit their growth (aw 0.950).
Botulism in wild waterfowl has been reported in many areas of the world. In 18 October 2008 to 22, 101 dead wild ducks were found in Anyangcheon. 24 of dead birds were spotbill (Anas poeilorhyncha), 56 were Mallard (Anas platyrhynchos), 18 were green- winged teal (Anas carolinensis) and 3 were others. Clinical sign of the sick birds were flaccid paralysis of the neck. At autopsy, most birds had no specific lesions. Stomach is empty. In the mouse bioassay, Samples of serum and intestinal contents taken from 9 dead birds killed all the injected mice, and their toxicity was neutralized by the antitoxin against C. botulinum type C toxin.
Real time reverse transcription (RT)-PCR was used to quantify the expression of the botulinum neurotoxin type A (BoNT/A) gene (cntA) by normalization with the expression of 16S rRNA. The method were confirmed by monitoring the mRNA levels of cntA during growth in five type A strains. In all but one of the strains the expression of cntA mRNA was maximal in the late exponential phase, and approximately 35-fold greater than in the early exponential phase. The concentration of the extracellular BoNT/A complex detected by ELISA was highest in stationary phase. Sodium nitrite and sorbic acid completely inhibited growth at 20 ppm and $4mg\;ml^{-1}$, respectively. CntA expression became lower in proportion to the concentration of sorbic acid, and this reduction was confirmed by mouse bioassay. Our results show that real time RT-PCR can be used to quantify levels of C. botulinum type A neurotoxin transcripts and to assess the effects of food additives on botulinal risk.
Kim, Hye-Jung;Nam, Ki-Jin;Lee, Dong-Sun;Paik, Hyun-Dong
Korean Journal of Food Science and Technology
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v.36
no.4
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pp.683-687
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2004
Raw beefs used fer Jangzorim production were evaluated fur contamination of pathogenic bacteria and microorganisms related to spoilage and food safety. Eleven groups of mesophilic, psychrotrophic, and anaerobic microorganisms, and total coliforms were selected to evaluate degree of food contamination. Nine strains including Bacillus cereus, Clostridium botulinum, C. perfringens, and Listeria monocytogenes were selected to evaluate incidences of pathogenic bacteria. Raw beefs harbored large populations of microorganisms, which decreased greatly after heat treatment. Psychrotrophic microorganisms were found to be more abundant than other microorganisms. B. cereus, C. perfringens, and L. monocytogenes were isolated from raw beefs, whereas C. botulinum, Escherichia coli O157:H7, Salmonella spp., Shigella spp., Staphylococcus aureus, and Yersinia enterocolitica were not isolated. Isoiates from Cereus selective agar, clostridium Perfringens agar, and Oxford agar were in 99.8, 99.9 and 98.6% agreements with B. cereus, C. perfringens, and L. monocytogenes at species level, respectively. B. cereus produced enterotoxin with CRET-RPLA method, whereas C. perfringens did not produce enterotoxin with PET-RPLA method.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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