염색공단 주변의 토양과 하수로부터 아조염료 분해 탈색능이 우수한 MB2균을 분리하여 Citrobacter sp.로 동정하였다. Citrobacter sp. MB2의 성장 최적배지 및 배양조건은 sucrose 0.5%, yeast extract 1.0%, $K_2HPO_4$ 0.1%, $NaHCO_3$ 0.1%, pH 7.0, 배양온도 $30^{\circ}C$에서 호기적 진탕배양이었으며, 최적배지에서의 균성장은 분리용 배지나 nutrient broth에서의 균성장보다 각각 7배 및 50배 이상 개체수가 증가하였다. Citrobacter sp MB2는 금속염에 대해 강한 내성을 보였으며, 항생제 ampcillin과 penicillin G에 대해서 강한 내성을 보였다.
The Optimal condition for degradation of crystal violet and other triphenylmethane dyes by Citrobacter sp. SK-3 isolated from the activated sludge of dye manufacturing factory was investigated. The optimal culture medium for the degradation of triphenylmethane dye was composed of minimum inorganic salt medium supplemented with 0.5% galactose, 0.1% beef extract, with the initial pH of 8.0 to 9.0. Under this condition, Citrobacter sp. SK-3 degraded 200 ppm of crystal violet completely within 24 hours. Citrobactre sp. SK-3 also degraded efficiently malachite green, pararosaniline, brilliant green, methyl violet, basic fuchsin and methyl red. Analysis of the degradation products of crystal violet through this layer chromatography and high performance liquid chromatography indicated that the methyl groups bound to crystal violet backborn were gradually demethylated to pentamethyl-, tetramethyl- and trimethylpararosaniline.
오염된 인삼분말로부터 1종의 세균을 순수분리하여 API kit 및 전자현미경을 이용하여 형태적, 생리적 특성을 조사하였다. 분리균은 직경 약 1.0 ${\mu}m$이었고 길이는 $2.0{\sim}6.0{\mu}m$로 세포표면에 규칙적으로 분포되어 있는 편모로 이동하는 간균이었다. 분리균은 ${\beta}-galactosdase$, arginine dihydrolase, ornithin decarboxylase를 가지고 있으며 탄소원으로 citrate를 이용할 수 없었고, $H_2S$는 생성하지 못하였다. 그러나 glucose, manitol, sorbitol, rhamnose, arabinose 등의 당 및 amygdalin을 탄소원으로 이용할 수 있었다. 이상의 API kit를 이용한 생리적 특성분석 및 전자현미경을 이용한 미세 형태적 특성 관찰결과에 의해 본 균주는 장내세균과 (Enterobacteriaceae)에 속하는 Citrobacter sp.로 동정되었다. 한편 분리균주 Citrobacter sp.의 생육에 미치는 인삼사포닌의 영향을 조사한 결과 사포닌은 농도의존적으로 균의 생육을 억제하는 경향을 나타내었다. 즉, 사포닌을 0.05, 0.5, 2.0, 4.0% 첨가하고 $38^{\circ}C$에서 3 일 동안 배양한 후 사포닌 비첨가군과 비교한 결과 균의 상대적 생육저해율은 각각 28.6, 66.7, 92.4, 97.7%로 나타났다. 사포닌의 미생물 생육 억제작용은 비교적 고농도인 4.0% 사포닌 첨가시에도 초기의 $6.2{\times}10^6$에서 $1.0{\timex}10^8$ CFU/g으로 완만한 가경향을 나타내어 사멸작용보다는 정균작용일 것으로 추측된다.
Kim, Ji-Yoon;Kim, Kyung-Woon;Park, Yong-Lark;Cho, Young-Su;Lee, Young-Choon
생명과학회지
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제10권4호
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pp.333-339
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2000
To identify genes involved in the decolorization of crystal violet, we isolated random mutants generated by transponson insertion in crystal violet-declorizing bacterium, Citrobacter sp. The resulting mutant bank yielded mutants with six distinct phenotypes, and Southern hybridization with a Tn5 fragment as a probe showed a single hybridized with six distinct phenotypes, and Southern hybridization with a Tn5 fragment as a probe showed a single hybridized band in the mutants Ctg 2, 5 an 6, whereas two and three bands were detected in Ctg1, 4 and 3, respectively. Tn5-inserted genes were isolated and the DNA sequence flanking Tn5 was determined. From comparison with a sequence database, putative protein product encoded by ctg 5 was identified as E. coli maltose transproter(Mal G) homolog, whereas the deduced amino acid sequence of the other ctg genes did not show any significant similarity with any DNA or protein sequency. Therefore, these results indicate that the other ctg genes except ctg 5 encode new proteins responsible for decolorization of crystal violet.
Crystal violet와 malachite green색소 분해에 관여하는 유전자들을 규명하기 위하여 색소분해능을 가진 Citrobacter sp.의 염색체 DNA속에의 transposon 도입에 의해 생성된 무작위 변이주들이 분리되었다. 이들 변이 주들로부터 두가지 색소분해능을 소실한 14개의 변이주들이 선별되었고, 이들로부터 염색체 DNA를 분리하여 EcoRl으로 절단한 후 Tn5 단편을 probe로하여 Southern hybridization을 행한 결과, 염색체 DNA상의 각각 다른 부위에 Transposon이 Single 삽입된 5개의 변이주 (Cmg2, Cmg6, Cmg8, Cmgll, Cmg12)가 최종적으로 분리되었다. 이들 변이주들의 Transposon 삽입부위 주위의 염기서열과 이로부터 유추되는 아미노산서열을 database상에 등록되어 있는 유전자의 염기서열과 단백질의 아미노산 서열에 대한 상동성을 비교한 결과, Cmg2는 대장균 maltose trnasporter (Mal C)이고, Cmg6은 LysR-type 전사조절 단백질이며, Cmg12는 산화환원효소를 코드하는 유전자인 것으로 알려졌고, 나머지 Cmg8과 Cmg11은 아직까지 기능이 알려져 있지 않은 단백질을 코드하는 유전자인 것으로임이 판명되었다.
Although, microbial arsenic mobilization by dissimilatory arsenate-reducing bacteria (DARB) and the practical use to the removal technology of arsenic from contaminated soil are expected, most previous research mainly has been focused on the geochemical circulation of arsenic. Therefore, in this review we summarized the previously reported DARB to grasp the characteristic for bioremediation of arsenic. Evidence of microbial growth on arsenate is presented based on isolate analyses, after which a summary of the physiology of the following arsenate-respiring bacteria is provided: Chrysiogenes arsenatis strain BAL-$1^T$, Sulfurospirillum barnesii, Desulfotomaculum strain Ben-RB, Desulfotomaculum auripigmentum strains OREX-4, GFAJ-1, Bacillus sp., Desulfitobacterium hafniense DCB-$2^T$, strain SES-3, Citrobacter sp. (TSA-1 and NC-1), Sulfurospirillum arsenophilum sp. nov., Shewanella sp., Chrysiogenes arsenatis BAL-$1^T$, Deferribacter desulfuricans. Among the DARB, Citrobacter sp. NC-1 is superior to other dissimilatory arsenate-reducing bacteria with respect to arsenate reduction, particularly at high concentrations as high as 60 mM. A gram-negative anaerobic bacterium, Citrobacter sp. NC-1, which was isolated from arsenic contaminated soil, can grow on glucose as an electron donor and arsenate as an electron acceptor. Strain NC-1 rapidly reduced arsenate at 5 mM to arsenite with concomitant cell growth, indicating that arsenate can act as the terminal electron acceptor for anaerobic respiration (dissimilatory arsenate reduction). To characterize the reductase systems in strain NC-1, arsenate and nitrate reduction activities were investigated with washed-cell suspensions and crude cell extracts from cells grown on arsenate or nitrate. These reductase activities were induced individually by the two electron acceptors. Tungstate, which is a typical inhibitory antagonist of molybdenum containing dissimilatory reductases, strongly inhibited the reduction of arsenate and nitrate in anaerobic growth cultures. These results suggest that strain NC-1 catalyzes the reduction of arsenate and nitrate by distinct terminal reductases containing a molybdenum cofactor. This may be advantageous during bioremediation processes where both contaminants are present. Moreover, a brief explanation of arsenic extraction from a model soil artificially contaminated with As (V) using a novel DARB (Citrobacter sp. NC-1) is given in this article. We conclude with a discussion of the importance of microbial arsenate reduction in the environment. The successful application and use of DARB should facilitate the effective bioremediation of arsenic contaminated sites.
육상양식장에서 항생제에 대한 내성을 가진 균을 분리하여 다양한 항생제에 대한 내성특성을 확인하고, 전자빔의 조사에 따른 내성균의 항생제 내성 특성변화와 살균효능에 관한 연구를 수행하였다. 메기, 송어, 뱀장어, 미꾸라지양식장의 배출수에서 분리된 균주 중 Aeromonas sp., Citrobacter sp., Bacillus sp., Marinobacter sp., Pantoea sp., Pseudomonas sp., Enterobacter sp.가 다제내성균으로 확인되었다. 양식장 배출수에서 분리한 균주 중 한가지의 항생제 내성을 가지고 있는 균은 41.7%이며, 2가지 이상의 항생제 내성을 가지고 있는 균은 58.3%로 나타났다. Quantitative Structure Analysis Relationship (QSAR) model에 의한 평가는 실험값과 매우 유사하여 독성 평가의 간접적인 지표로 이용될 수 있음을 알 수 있었다. 항생제 내성균에 대해 전자빔을 조사한 결과 1 kGy 이내의 선량에서 살균효율이 99.9%로 강한 살균력을 확인할 수 있었다.
활성슬러지법에 의한 벤젠폐수 처리실험을 통하여 활성슬러지의 벤젠처리중에 실제 그에 관여하는 세균을 분리 동정하였다. 반응조에서 분리한 세균은 6종으로, Pseudomonas fluorescens, Enterobacter agglomerans, Enterobacter cloacae, Klebsiella oxytoca, Citrobacter freundii와 Klebsiella pneumoniae로 동정되었다. 벤젠 분해능을 측정한 결과는 P. fluorescenss가 55%를 18시간만에 처리했고, E. cloacae는 24%, K. oxytoca 는 32%, E. agglomerans는 41%의 분해능을 보였다. P. fluorescens의 증식 최적조건은 온도 25-31$^{\circ}C$와 pH 7.0으로 확인되었다. P. fluorescens가 우점종일때 나타나는 지로생물은 원생동물인 Aspidisca sp.였다. 벤젠 농도가 387mg/$\ell$일 때에는 Aspidisca sp.와 Litonotus sp.가 증식을 최대로 하였고, 벤젠 농도가 1,600mg/$\ell$에서는 Litonotus sp.와 Vorticella sp.는 거의 성장하지 않았다. Glucose 배지에서는 모두 성장율이 높았다.
Citrobacter sp. Y19 was studied for $H_2$ production from glucose in batch culture. Important conditions studied include phosphate concentration, temperature, glucose concentration, and gas-phase replacement. Optimal $H_2$ production was observed at 140 - 180 mM of phosphate and $36^{\circ}C$. When glucose concentration increased from 0.1 to 5% (w/v), $H_2$ production increased up to 2% and remained constant thereafter. Intermittent purging of the reaction bottle with Ar gas stimulated the $H_2$ production by alleviating the inhibition by $H_2$. The maximum productivity was observed to be 113.2 ml $H_2$/h-1.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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