N-Acetyl-$\beta$-D-hexosaminidase ($\beta$-HexNAc'ase) (EC 3.2.1.52) was purified from rice seeds (Oryza sative L. var. Dongjin) using ammonium sulfate (80%) precipitation, Sephadex G-150, CM-Sephadex, and DEAE-Sephadex chromatography, sequentially. The activities were separated into 7 fractions($F_1-F_7$) by CM-Sephadex chromatography. Among them, F6 was further purified to homogeneity with a 13.0% yield and 123.3 purification-fold. The molecular mass was estimated to be about 52 kDa on SDS-PAGE and 37.4 kDa on Sephacryl S-300 gel filtration. The enzyme catalyzed the hydrolysis of both p-nitrophenyl-N-acetyl-$\beta$-D-hexosaminide (pNP-GlcNAc) and p-nitrophenyl-N-acetyl-$\beta$-D-hexosaminide (pNP-GalNAc) as substrates, which are typical properties of $\beta$-HexNAc'ase. The ratio of the pNP-GlcNAc'ase activity to the pNP-GalNAc'ase activity was 4.0. However, it could not hydrolyze chitin, chitosan, pNP-$\beta$-glucopyranoside, or pNP-$\beta$-glucopyranoside. The enzyme showed $K_m$, $V_{max}$ and $K_{cat}$ for pNP-GlcNAc of 1.65 mM, $79.49\;mM\;min^{-1}$, and $4.79{\times}10^6\;min^{-1}$, respectively. The comparison of kinetic values for pNP-GlcNAc and pNP-GalNAc revealed that the two enzyme activities are associated with a single binding site. The purified enzyme exhibited optimum pH and temperature for pNP-GlcNAc of 5.0 and $50^{\circ}C$, respectively. The enzyme activity for pNP-GlcNAc was stable at pH 5.0-5.5 and $20-40^{\circ}C$. The enzyme activity was completely inhibited at a concentration of 0.1 mM $HgCl_$ and $AgNO_3$, suggesting that the intact thiol group is essential for activity. Chloramine T completely inhibited the activity, indicating the possible involvement of methionines in the mechanism of the enzyme.
This study was conducted to investigate the characteristics of chloramination as a secondary disinfection in a drinking water distribution system. At the range from pH 6 to pH 8, monochloramine was predominant with a trace of dichloramine, and the free chlorine was detected after breakpoint. At $25^{\circ}C$, the breakpoints of pH 6, 7 and 8 appeared when the weight ratios of chlorine to ammonia nitrogen were 11:1, 9:1 and 10:1 respectively, and the peak points on the breakpoint curves at pH 6, 7 and 8 were in the Cl$_2$ / NH$_3$-N ratio of 9:1, 6:1 and 5:1 respectively. As pH increased from 6 to 8, maximum point of monochloramine on the breakpoint curve was moved from 7:1 to 5:1 in the weight ratio of chlorine to ammonia nitrogen. The maximum concentration of monochloramine was formed at the pH values of 7~8 and in the Cl$_2$ / NH$_3$-N ratio below 5:1. As the Cl$_2$/NH$_3$-N ratio increased and the pH lowered, chloramines decay proceeded at an increased rate, and residual chloramines lasted longer than the residual free chlorine. The monochloramine and the dichloramine were formed at pH 6, and then the dichloramine continued increasing with contact time.
Lee, Kang Jin;Hong, Jee Eun;Pyo, Heesoo;Park, Song-Ja;Yoo, Je Kang;Lee, Dae Woon
Analytical Science and Technology
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v.17
no.1
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pp.69-81
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2004
The formation pattern of DBPs (disinfection by-products) in raw water treated with hypochlorite, chlorine disinfectant was studied. TOC (total organic carbon), residual chlorine, turbidity and 14 DBPs in raw water from Han-river and Nakdong river during 1 ~ 14 days were determined. Total DBPs in Han river was 101.3 ng/mL (789.6 nM) after 7days and THMs (trihalomethanes) are the dominant portion of 68%. HAAs (haloacetic acids) and chloral hydrate were determined 19% and 10% respectively. In Nakdong river total DBPs was 98.4 ng/mL (678.6 nM) and dominant class was HAAs. (55.8 ng/mL, 57%) THMs(34%) and N-compounds like HANs (haloacetonitriles, 5%) and chloropicrin were increased. It may be explained that high concentration of NH4-N in Nakdong river react with chlorine produced chloramine and this formed different pattern of DBPs. As a result, total DBPs formation pattern depends on raw water and disinfectant and in generally the initial concentration of acidic HAAs was high and THMs was increased gradually.
Objectives: Due to the heterogeneous receptor distribution and changes of receptor status over time, the biochemical measurement of estrogen receptor status of biopsy specimens is not sufficient to diagnose breast cancer. As a result, I-123 labeled estradiols have been applied for the diagnosis. The purpose of this study was to develop a suitable radioligand for imaging estrogen receptor-positive human breast tumors. Methods: Among the various estradiol derivatives, $17{\alpha}-[^{123}I]$iodovinyl estradiol ($[^{123}I]$IVE) has been prepared from $17{\alpha}$-ethynyl estradiol. Labeling of $E-17{\alpha}-[^{123}I]$iodovinyl estradiol (E-$[^{123}I]$IVE) was carried out using peracetic acid with $[^{123}I]NaI\;and\;Z-[^{123}I]IVE$ labelling was archived using chloamine-T/HCl solution with $[^{123}I]$NaI. Labeling yield was determined by silica thin-layer chromatography (TLC) and radiochemical purity was measured by high performance liquid chromatography (HPLC). The biodistribution of E-$[^{123}I]$IVE was measured in immature female rats at 60 min, 120 min and 300 min after injection. Results: The labeling yield of two isomers was 92% and 94% ($E-[^{123}I]IVE\;and\;Z-[^{123}I]IVE$, respectively). The radiochemical purity was more than 98% after purification. The highest uptake was observed at 120 min in uterus (3.11% ID/g for E-$[^{123}I]$IVE). Conclusion: These results suggest the possibility of using E-$[^{123}I]$IVE as an imaging agent for the evaluation of the evaluation of the presence of estrogen receptor in patients with breast cancer.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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